罗伊氏乳酸杆菌辅助治疗轮状病毒肠炎患儿的效果及对T淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨罗伊氏乳酸杆菌辅助治疗轮状病毒肠炎患儿的效果,并分析其对患儿T淋巴细胞亚群的影响,为临床提供参考。方法 按随机数字表法将2021年1月至2023年1月内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院收治的78例轮状病毒肠炎患儿分为观察组(39例,采用罗伊氏乳酸杆菌联合蒙脱石散、枯草杆菌二联活菌进行治疗)和对照组(39例,采用蒙脱石散联合枯草杆菌二联活菌进行治疗)。比较两组患儿治疗效果、临床症状缓解时间、血清胃泌素(GAS)、胃动素(MOT)及血管活性肠肽(VIP)水平,比较两组患儿CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD8^(+)T淋巴细胞百分比及CD4^(+)/CD8^(+)比值。结果 观察组患儿整体疗效优于对照组,总有效率高于对照组(均P<0.05)。观察组患儿退热时间、止泻时间、止吐时间及脱水纠正时间均短于对照组(P<0.05)。两组患儿治疗后GAS、MOT及VIP水平均低于治疗前,且观察组均低于对照组(均P<0.05)。两组患儿治疗后CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比及CD4^(+)/CD8^(+)比值均高于治疗前,CD8^(+)T淋巴细胞百分比均低于治疗前,且观察组上述T淋巴细胞亚群水平改善程度优于对照组,CD8^(+)T淋巴细胞百分比低于对照组(均P <0.05)。结论 采用罗伊氏乳酸杆菌辅助治疗轮状病毒肠炎患儿的效果更佳,有效缩短患儿退热、止泻、止吐及脱水纠正时间,改善胃肠激素水平,提高免疫功能。

猪源罗伊氏乳酸杆菌对断奶仔猪生长性能和血清指标的影响

本研究旨在探讨在饲粮中添加猪源罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)对断奶仔猪生长性能和血清指标的影响。选用平均体重为(16.57±0.23)kg的断奶仔猪(杜洛克×长白×大白三元杂交)64头,随机分成4组,每组4个重复,每个重复4头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲粮分别在基础饲粮中添加0.25%、0.50%、0.75%的猪源罗伊氏乳酸杆菌,试验期为30 d。结果表明:1)添加0.50%和0.75%猪源罗伊氏乳酸杆菌组断奶仔猪平均日增重分别比对照组提高了7.56%(P<0.05)和20.07%(P<0.05),料重比分别比对照组降低了1.96%(P>0.05)和14.90%(P<0.05);2)饲粮中添加猪源罗伊氏乳酸杆菌能够极显著降低断奶仔猪血清中白蛋白与球蛋白比值(P<0.01),并极显著增加血清中干扰素γ含量(P<0.01);3)添加0.50%和0.75%猪源罗伊氏乳酸杆菌组断奶仔猪血清中结合珠蛋白含量分别比对照组降低了8.79%(P<0.05)和9.34%(P<0.05)。结果提示,饲粮中添加猪源罗伊氏乳酸杆菌能够提高断奶仔猪机体免疫能力,而当其达到一定添加剂量时,对于提高断奶仔猪生长性能的效果表现明显。

冷胁迫对冷冻干燥罗伊氏乳酸杆菌细胞膜流动性的影响

以DPH(1,6-二苯基-1,3,5-己三烯)为荧光探剂,优化了测定罗伊氏乳酸杆菌细胞膜流动性的条件,其最佳测定条件为:激发波长360nm,发射波长430nm,菌浓度OD0.8,30℃孵育时间为20min。同时研究冷胁迫处理对冷冻干燥存活率。细胞活力及细胞膜流动的影响,研究表明冷胁迫能改善乳酸菌的冷冻干燥存活率,同时在一定的条件下,冻干后细胞的流动性也有所改变,说明经过一定的冷胁迫处理后,增加了细胞的抗性,从而提高细胞的冷冻存活率。

仔猪源罗伊氏乳酸杆菌生物学特性的研究

研究了罗伊氏乳酸杆菌的生物学特性包括生长曲线、耐热存活率、耐酸存活率、贮藏存活率以及发酵参数。采用均匀设计的试验设计对影响乳酸杆菌发酵较大的6个因素如碳源、氮源和时间进行优化。试验结果表明,罗伊氏乳酸杆菌的浓度在开始时有所下降,经过2h之后从1 0×103数量级迅速上升,到第22h接近1 0×1010数量级,到40h细菌的数量级开始缓慢下降。75℃处理15min之后存活率为31 3%,经过1个月贮藏存活率为85 5%,pH2 0处理6h的存活率为72%.优化的发酵参数为:时间20h;葡萄糖10g/L;蔗糖60g/L;胰蛋白胨30g/L;酵母浸粉5g/L;柠檬酸铵12g/L.试验表明了罗伊氏乳酸杆菌具有良好的抗逆性,生长繁殖迅速,可以用作益生菌生产菌种。

表达乳铁蛋白肽的猪源罗伊氏乳酸杆菌对断乳仔猪抗霍乱沙门菌感染的效果分析

旨在分析表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗猪霍乱沙门菌感染的作用。将该重组菌连续饲喂28日龄断乳仔猪21 d,并设立空菌组、对照组以及抗生素组。第21天时对断乳仔猪连续口服感染猪霍乱沙门菌3 d,并设置7 d的观察期;仔猪感染后采集试验组与对照组血清、肠黏液及肠组织。检测结果显示重组菌组仔猪平均日增重与免疫器官指数均显著提高(P<0.05),料重比极显著降低(P<0.01)。感染猪霍乱沙门菌后,相对于对照组,重组菌组仔猪日增重提高,腹泻率降低;重组菌组仔猪血液中IgG以及肠黏液中IL-4、sIgA的量极显著提高(P<0.01),IL-2、IL^(-1)2、IL-6的量显著降低(P<0.05);重组菌组仔猪肠道紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1的基因转录水平和TLR4、Myd88和MLCK的基因转录水平极显著提高(P<0.01),仔猪肠道内猪霍乱沙门菌的数量极显著降低(P<0.01);重组菌组与抗生素组无明显差异(P>0.05)。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21可以提高断乳仔猪的生长性能、促进肠道形态发育、增强肠道屏障功能,并且在一定程度上可以保护仔猪免受猪霍乱沙门菌的感染,表明重组菌作为微生态制剂替代断乳仔猪的饲用抗生素具有一定的应用前景。

重组猪源罗伊氏乳酸杆菌分泌表达牛乳铁蛋白肽对新生仔猪生长性能的影响以及抗腹泻病毒感染的保护作用研究

本试验旨在研究分泌表达牛乳铁蛋白肽(LFCA)的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌对新生仔猪生长性能的影响以及对引起仔猪腹泻的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染的保护作用。试验1:选取36头1日龄、体重约为1.5 kg的新生杜长大仔猪,随机分为3组,分别为重组菌组、空载菌组和对照组,每组12头仔猪,分别口服表达LFCA的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA/LR-CO21、含有空载体质粒的重组猪源罗伊氏乳杆菌pPG/LR-CO21和磷酸盐缓冲液(PBS)各4 mL,连续口服3 d,口服后观测时间为14 d。期间仔猪自由采食,记录各组仔猪体重变化和腹泻情况。试验2:选取30头1日龄、体重约为1.5 kg的新生杜长大仔猪,随机分为5组,分别口服1、3、6、9、12 mL半数组织培养感染剂量(TCID 50)为10-7.50/mL的TGEV。设置7 d时间为观察期,分析半数致死量的条件。试验3:另选取1日龄、体重约为1.5 kg的新生杜长大仔猪32头,随机分为4组,分别为重组菌组、空载菌组、对照组、TGEV感染组,每组8个重复,每个重复1头仔猪。试验组每天每头按照2×1010 CFU的剂量口服pPG-LFCA/LR-CO21、pPG/LR-CO21及等体积的PBS,连续口服饲喂1周,在8日龄按照半数致死量口服TGEV感染,感染7 d后进行样品采集。记录各组仔猪体重变化和腹泻情况;苏木精-伊红(HE)染色检测小肠绒毛高度及隐窝深度;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测仔猪血清中总免疫球蛋白G(IgG)和肠黏液总分泌型免疫球蛋白A(sIgA)抗体含量;实时荧光定量PCR检测紧密连接蛋白相关基因封闭蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)和紧密连接蛋白-1(ZO-1)以及炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及Toll样受体2(TLR2)的mRNA相对表达量;对仔猪盲肠内容物进行菌群结构分析。结果表明:口服重组猪源罗伊氏乳酸杆菌后,与对照组相比,重组菌组新生仔猪的平均日增重极显著提高(P<0.01),而腹泻率降低且差异极显著(P<0.01);与TGEV感染组相比,重组菌组仔猪平均日增重增加且腹泻率降低,差异显著(P<0.05);空肠和回肠绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度的比值显著增加(P<0.05);仔猪血清中总IgG和肠黏液总sIgA抗体含量显著升高(P<0.05);肠黏膜组织中紧密连接蛋白相关基因Claudin-1、Occludin、ZO-1 mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01),血清中细胞因子TNF-α含量极显著降低(P<0.01),血清IFN-γ、IL-6、IL-8、TLR2含量极显著升高(P<0.01),仔猪存活率提高。对仔猪盲肠内容物进行菌群多样性分析结果显示,TGEV感染仔猪后肠道正常菌群占比下降,相比于TGEV感染组,口服重组菌的仔猪肠道菌群致病菌拟杆菌属占比下降,差异显著(P<0.05),菌群多样性更接近对照组,肠道菌群的代谢、遗传信息处理等功能均有所增强。综上所述,本试验成功构建了分泌表达LFCA的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌菌株,经口服途径饲喂新生仔猪后,能够促进仔猪生长,降低新生仔猪的腹泻率,经口服途径饲喂感染TGEV的新生仔猪后,可以改善肠道环境,降低病毒对仔猪肠道的损伤,对仔猪抗TGEV感染提供有效保护。

表达猪圆环病毒2型cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌在小鼠诱导的免疫应答分析

旨在构建表达猪圆环病毒2型(PCV2)cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri,L.reuteri),并评价其在小鼠体内诱导的免疫应答效果。利用PCR扩增实验室分离保存的PCV2b型毒株的cap蛋白基因,以猪源L.reuteri为宿主菌,构建表达cap蛋白的重组菌株pPG-T7 g10-PPT-cap/L.reuteri,通过口服免疫BALB/c小鼠。采用间接ELISA方法测定免疫后小鼠血清中抗原特异性IgG抗体水平,粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中抗原特异性sIgA抗体水平,小鼠血清中各细胞因子水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平;流式细胞技术检测小鼠脾淋巴细胞中CD4^+T细胞、CD8^+T细胞的水平;荧光定量PCR检测免疫后攻毒的小鼠体内器官的病毒载量。结果显示,口服免疫重组乳酸菌组小鼠血清IgG抗体水平显著高于对照组(P<0.01);小鼠粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中sIgA抗体水平显著高于对照组(P<0.01);小鼠血清中细胞因子水平和对照组相比,IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-12水平升高,IL-10水平降低,IFN-α无显著变化;体外孵育PCV2和小鼠脾淋巴细胞结果表明,重组乳酸菌组小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数显著高于对照组(P<0.01);流式细胞技术检测结果显示,口服免疫重组乳酸菌组小鼠脾细胞中CD4^+T细胞、CD8^+T细胞含量高于对照组;荧光定量PCR结果显示,相比于对照组,口服免疫重组乳酸菌组小鼠体内的病毒载量明显低于对照组。综上所述,本研究成功构建了表达PCV2 cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌,经口服途径免疫动物,构建的重组乳酸杆菌能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,且具有一定的免疫保护效果。

罗伊氏乳酸杆菌对非小细胞肺癌患者免疫细胞功能的影响

目的研究罗伊氏乳酸杆菌对非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫细胞功能的影响,探讨其潜在的抗肿瘤能力。方法通过密度梯度离心法从使用靶向药物治疗的NSCLC患者血液中提取外周血单个核细胞(PBMCs),提取罗伊氏乳酸杆菌培养上清与PBMCs共培养24 h,收集细胞,提取细胞中总RNA,应用荧光定量聚合酶链反应检测细胞中白介素-10(IL-10)、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)的相对表达量;酶联免疫吸附试验检测培养分泌到上清中相关细胞因子的含量。结果本实验从健康婴儿粪便中成功筛选出来一株罗伊氏乳酸杆菌菌株,该菌株上清可刺激NSCLC患者的PBMCs产生具有抗肿瘤作用的细胞因子IL-10、IL-12、IFN-γ。结论该研究分离得到一株罗伊氏乳酸杆菌,其上清中的代谢产物具有激活免疫系统、协助免疫细胞产生抗肿瘤细胞因子的潜力。

罗伊氏乳酸杆菌LR1对猪蛋白消化酶基因表达、肌肉抗氧化指标及氨基酸组成的影响

试验旨在研究长期饲喂罗伊氏乳酸杆菌LR1(Lactobacillus reuteri 1)对猪胃及胰腺蛋白消化相关酶的基因表达、肌肉抗氧化指标及冰鲜肉氨基酸谱的影响。选用144头(杜×长×大)21日龄断奶仔猪(平均体重6.49 kg±0.04 kg),随机分为3组。对照组饲粮为基础饲粮,抗生素组饲粮为添加抗生素的基础饲粮(仔猪阶段添加100 mg/kg喹乙醇和75 mg/kg金霉素,生长肥育猪阶段添加75 mg/kg金霉素),LR1组饲粮为添加5×1010 CFU/kg LR1的基础饲粮,试验期175 d。结果表明:与对照组相比,①抗生素组猪胰腺中弹性蛋白酶的表达降低(P<0.05);LR1组胃窦、胃贲门及胃底黏膜中胃蛋白酶A的表达提高(P<0.05),同时也高于抗生素组(P<0.05)。②抗生素组猪背最长肌(longissimus dorsis muscle,LDM)总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)及总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活力增加(P<0.05);LR1不影响LDM中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,T-AOC、T-SOD及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力(P>0.05)。③饲粮添加抗生素及LR1不影响冰鲜肉水解氨基酸含量及组成(P>0.05);抗生素组24 h冰鲜肉中甲硫氨酸(苦味氨基酸)含量、甜味氨基酸总量及游离氨基酸总量降低(P<0.05),而LR1降低24 h冰鲜肉中甲硫氨酸含量(P<0.05);饲粮中添加抗生素及LR1均降低48 h冰鲜肉中甜味氨基酸、苦味氨基酸、必需氨基酸及总游离氨基酸(P<0.05),同时,抗生素组48 h冰鲜肉中鲜味氨基酸含量降低(P<0.05)。综上,与对照组相比,长期饲喂LR1可提高猪胃对蛋白质的消化功能,改善24 h冰鲜肉的风味;而长期饲喂抗生素降低猪胰腺的消化功能,提高肌肉抗氧化能力,但降低24及48 h冰鲜肉的风味。

长期饲喂罗伊氏乳酸杆菌对猪皮下脂肪及肝脏脂肪代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究长期饲喂罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri 1,LR1)对猪皮下脂肪及肝脏脂肪代谢相关基因表达的影响。试验选用144头21日龄三元(杜×长×大)杂交断奶仔猪,随机分为3组,每组8个重复,每个重复6头猪。对照1组饲粮基础饲粮,对照2组饲喂在基础饲粮中添加抗生素的试验饲粮,LR1组饲喂在基础饲粮中添加5×10^(10) CFU/kg LR1的试验饲粮,试验期175 d。结果表明:1)与对照1组相比,对照2组的腹脂胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)及甘油三酯脂酶(ATGL)基因相对表达量显著增加(P<0.05),肉毒碱棕榈酰转移酶-1β(CPT-1β)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、脂肪酸转运蛋白-1(FATP-1)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因相对表达量无显著差异(P>0.05);LR1组腹脂FATP-1基因相对表达量显著增加(P<0.05),SREBP、ACC、CPT-1β、FAS、PPARα、SCD、PPARγ及ATGL基因相对表达量无显著差异(P>0.05);与对照2组相比,LR1组SREBP、ACC及SCD基因相对表达量显著降低(P<0.05)。2)与对照1组相比,对照2组背脂SCD及ATGL基因相对表达量显著增加(P<0.05),而LR1组背脂SCD基因相对表达量显著降低(P<0.05);与对照2组相比,LR1组背脂ACC、FAS及SCD基因相对表达量显著降低(P<0.05);与对照1、2组相比,LR1组背脂PPARγ基因相对表达量显著提高(P<0.05)。3)与对照1组相比,对照2组及LR1组肝脏SREBP、ACC、FAS及SCD基因相对表达量均显著降低(P<0.05),而CPT-1β、PPARα、FATP-1、PPARγ及ATGL基因相对表达无显著变化(P>0.05)。综上所述,LR1促进猪皮下脂肪的脂肪酸转运,较抗生素显著降低了猪背脂及肝脏脂肪合成代谢。此外,LR1不影响肝脏的转运及分解代谢。

罗伊氏乳酸杆菌SL001对AD模型小鼠和C57BL/6小鼠肠道微生物的影响

本研究旨在调查阿尔茨海默症模型小鼠(APP/PS1双转基因小鼠,AD小鼠)与野生型小鼠(C57BL/6小鼠)肠道菌群的多样性差异,以及添食罗伊氏乳酸杆菌SL001 (Lactobacillus reuteri SL001)对两种小鼠肠道微生物菌群结构组成的影响,探讨其是否可对AD小鼠起到积极的改善作用。首先将雄性AD模型和野生型小鼠分别分成添食组和未添食组(每组5只),添食组小鼠每天用0.2 mL浓度为5×1011 CFU/mL的L. reuteri SL001菌悬液灌胃,未添食组则每天接受等量的无菌PBS,通过口服管饲法进行给物,周期为45 d。实验结束后,采集小鼠的粪便样本,通过高通量测序技术测定了16S rRNA V3–V4区序列,并对群落结构和多样性进行比较分析。结果显示4个处理组小鼠的肠道微生物OTUs总共包括19个门、40个纲、64个目、104个科和175个属。AD模型小鼠的α多样性大于野生型小鼠,但是两者之间的差异不显著。添食L. reuteri SL001后,两种小鼠的α多样性均增加,AD模型小鼠的增幅较小。在门水平上,4组小鼠的优势菌门均为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria),AD模型小鼠中的拟杆菌门丰度低于野生型,厚壁菌门的丰度高于野生型,添食L. reuteri SL001会降低小鼠的厚壁菌门/拟杆菌门的比例(F/B)。在目水平上,AD模型小鼠中的拟杆菌目(Bacteroidales)、乳酸杆菌目(Lactobacillales)、芽胞杆菌目(Bacillales)和双歧杆菌目(Bifidobacteriales)的相对丰度低于野生型小鼠。在属水平上,丰度较高的属有Allobaculum、毛螺旋菌属(LachnospiraceaeNK4A136group)、拟杆菌属(Bacteroides)、乳酸菌属(Lactobacillus)。AD模型小鼠的拟杆菌属、乳酸菌属、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、和拟普雷沃菌属(Alloprevotella)的相对丰度低于野生型小鼠,添食L. reuteri SL001会增加这些属以及拟杆菌目、乳酸杆菌目、芽胞杆菌目和双歧杆菌目在AD模型小鼠中的丰度。AD模型小鼠的丁酸弧菌属(Butyrivibrio)相对丰度也低于野生型,添食L. reuteri SL001后,其相对丰度在两种小鼠中均出现降低。野生型小鼠的优势菌种为杆菌纲(Bacilli)中的乳酸杆菌科(Lactobacillaceae),AD模型小鼠中未发现优势菌群,这一结果与不同比例物种分类树结果相符。文中结果揭示了AD模型小鼠与野生型小鼠肠道微生物多样性差异,也表明添食L. reuteri SL001可以改善小鼠肠道细菌群落结构组成,对AD模型小鼠能够起到一定程度的积极调整作用。

羧基修饰的超顺磁纳米粒子直接固定化罗伊氏乳杆菌

利用共沉淀法结合高锰酸钾氧化制备所得表面羧基修饰的超顺磁性纳米粒子吸附于罗伊氏乳酸杆菌表面,在磁场协助下实现细胞的固定化。吸附机理分析表明小尺寸相互作用和静电相互作用是磁性纳米粒子与细胞之间的主要作用。分别考察了菌体/磁性粒子质量比、pH、温度、时间等对固定化罗伊氏乳酸杆菌的影响,确定最佳固定条件为菌体与磁性纳米粒子相对质量比为2.25,在pH=3、温度25℃的条件下固定化0.5h,可实现91%的细胞固定化。最后,对固定化后的细胞进行再培养,与游离细胞相比,两者表现出类似的代谢特征,证实细胞经固定化后仍具有活性。因此,羧基修饰的超顺磁性纳米粒子可成功用于细胞固定化,在不影响细胞活性的情况下,通过磁分离实现细胞的重复利用。

猪用复合微生态制剂制备及保存期内活菌数研究

为了确定两种猪肠道益生菌的固体发酵效果,以及复合微生态制剂在不同保存条件下的活菌数变化。对猪肠道益生菌干酪乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌进行固体发酵,测定其活菌数,然后按照一定比例将两种益生菌与液体发酵的纳豆芽孢杆菌冻干菌粉混合制成复合微生态制剂;测定该制剂在4℃和室温保存状态下14 d内及半年内益生菌活菌数量的变化。保存14 d内的微生态制剂,室温条件下活菌数先增加后逐渐减少,而4℃保存的制剂活菌数缓慢减少。室温保存状态下的微生态制剂活菌数半年内迅速减少,4℃保存的微生态制剂益生菌死亡的速度比室温保存的略微缓慢,但差异不显著(p>0.05)。半年后对4℃和室温保存状态下保存的益生菌活菌数计数结果分别为1.3×109CFU.g-11、.5×109CFU.g-1,微生态制剂活菌数仍能超过3×108CFU.g-1,可以继续使用。研究表明复合微生态制剂中的乳酸菌在4℃和室温条件下均能保存活性半年以上。