罗曼鹤鸡骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定

目的建立鸡骨髓间充质干细胞（BMSCs）的分离培养和鉴定体系。方法从1～14天龄罗曼鹤鸡骨髓中分离骨髓细胞，差速贴壁法纯化、扩增BMSCs。倒置显微镜下观察细胞形态特征，MTY法绘制生长曲线，流式细胞仪检测细胞标志物，并分别进行成骨、成脂诱导分化能力检测。结果分离培养的细胞呈成纤维细胞样或长梭形，生长状态良好；CD29阳性表达率为92．10％，CD34阳性表达率仅为0．80％；经成骨诱导分化，出现明显的钙化结节，茜素红染色阳性；经成脂诱导分化，油红O染色阳性，细胞内出现明显的脂质小滴。结论建立了操作简单、高效的鸡BMSCs分离培养和鉴定体系，为鸡BMSCs的进一步研究和应用提供了良好的基础。

利用层粘连蛋白扩增罗曼鹤鸡骨髓间充质干细胞

背景:鸡骨髓间充质干细胞是胚胎发育学、免疫学和肿瘤学研究重要的细胞模型,但如何大规模扩增并使其保持良好的未分化潜能是鸡骨髓间充质干细胞应用中亟待解决的难题。目的:建立扩增鸡骨髓间充质干细胞的层粘连蛋白培养体系。方法:将体外分离得到的鸡骨髓间充质干细胞分别接种在包被层粘连蛋白培养皿和传统二维培养皿上。经过体外扩增,比较两种培养体系下,鸡骨髓间充质干细胞的形态特征、表面标志物、扩增性能和成脂分化潜能。结果与结论:层粘连蛋白培养体系和常规培养体系中骨髓间充质干细胞的形态学特征和表面标志物表达没有显著差异,但层粘连蛋白培养体系获得的骨髓间充质干细胞增殖能力和分化潜能都明显优于传统培养体系。可见层粘连蛋白培养体系能快速地扩增出大量增殖能力强和未分化性能良好的鸡骨髓间充质干细胞,为鸡骨髓间充质干细胞的进一步深入研究和应用提供生物学基础。

三邻甲苯磷酸酯暴露鸡大脑总蛋白双向电泳图谱差异表达分析

目的:筛选三邻甲苯磷酸酯(tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)暴露鸡大脑总蛋白中的差异表达蛋白,为蛋白质谱分析提供依据。方法:成年罗曼鹤母鸡12只随机分成TOCP染毒组和对照组,染毒组按1000mg/kg经口1次给予TOCP,对照组给予生理盐水。染毒后24d处死动物,冷环境下分离大脑,匀浆后高速离心提取总蛋白。通过双向凝胶电泳获得完整的全蛋白质图谱,运用图像分析软件(Image Master2D)对银离子染色的电泳图谱进行分析。结果:在鸡大脑总蛋白中,对照组和染毒组分别检测到1332和1008个蛋白点,能相互匹配的占77.78%。与对照组比较,染毒组的蛋白表达谱中差异表达蛋白有262个,其中蛋白差异表达达到4倍以上的蛋白点数有43个。结论:TOCP暴露可导致鸡大脑多种蛋白差异表达,其中一些蛋白的差异表达可能与TOCP诱发迟发性神经毒性有关。