罗汉果甜苷V人工抗原免疫原性检测法的建立与评价

目的制备罗汉果甜苷V(mogroside V,MogV)-载体蛋白复合物人工抗原及抗血清,建立抗血清与MogV特异性反应的检测方法,为进一步制备MogV的单克隆抗体、建立快速检测MogV的ELISA法提供技术基础。方法将MogV与丁二酸酐、载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HSA)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,通过紫外扫描光谱计算出结合的半抗原数目;以此抗原免疫Balb/c小鼠,制备抗血清,并通过ELISA法检测效价和特异性。结果合成的人工抗原MogV-HS-BSA结合比约为44∶1,MogV-HS-HSA结合比约为64∶1;通过免疫小鼠得到特异性针对MogV的抗血清,血清效价较高。结论 MogV人工抗原有较好的免疫原性,建立的免疫原性检测方法简便可行。

HPLC测定罗汉果中罗汉果甜苷V的含量

[目的]建立HPLC法测定罗汉果药材中罗汉果甜苷V的含量。[方法]用Nucleosil 100-5 NH2（5μm，4．6mm×250mm）色谱柱，以乙腈-水-2．5％四氢呋喃（77：22：1）为流动相，流速为1ml／mln，检测波长为203nm，柱温30℃。[结果]罗汉果甜苷V进样量在0．2136～21．3600μg线性关系良好（r=0．99993），平均回收率为96．96％，RSD为0．72％（n=5）。[结论]本方法简便、快速、准确，可作为罗汉果药材的质量控制方法。

罗汉果甜苷V对持续光照小鼠脂肪积累的缓解作用

【目的】探究罗汉果甜苷V(MV)缓解持续光照导致小鼠脂肪积累的作用,为罗汉果在畜禽健康养殖中的应用提供参考依据。【方法】以15周龄雄性C57BL/6小鼠为研究对象,随机分为对照组(12 h光照∶12 h黑暗)、持续光照组(24 h光照)及持续光照添加MV处理组(每日灌胃100 mg/kg的MV),试验周期为5周。试验期间监测小鼠体质量和采食量,并检测其体脂率和能量代谢水平;试验结束后处死小鼠,采集腹股沟白色脂肪(iWAT)和附睾白色脂肪(e WAT)进行称重,通过苏木精—伊红(H-E)染色观察脂肪细胞形态学特征,并以实时荧光定量PCR检测脂肪组织中脂肪代谢及能量代谢相关基因的表达情况。【结果】在整个试验过程中,各处理组小鼠的体质量与采食量均无显著差异(P>0.05),但持续光照能导致小鼠体脂率极显著升高(P<0.01,下同),而氧气消耗量、二氧化碳排出量及产热量等基础代谢参数均极显著降低,iWAT和eWAT的百分比及细胞直径均极显著增大;iWAT和eWAT中的脂肪合成相关基因(Fabp4、Pparg2和Zfp423)相对表达量极显著上调,脂肪分解相关基因Lpl相对表达量极显著下调,能量代谢基因(Sirt1和Ppargc1a)相对表达量显著(P<0.05)或极显著下调,炎症反应相关基因Nfkb1相对表达量极显著上调。经MV处理后能使持续光照小鼠上述变化指标均恢复至正常水平,即MV能有效改善持续光照导致的小鼠能量代谢紊乱、缓解脂肪累积,以及缓解脂肪代谢、能量代谢及炎症反应相关基因的异常表达。【结论】持续光照会在不改变能量摄入的情况下导致机体脂肪积累,影响机体的正常代谢和健康。MV通过调控Sirt1、Ppargc1a等重要代谢相关基因表达,改善机体代谢紊乱,并通过促进脂肪分解和抑制脂肪合成相关基因表达,有效缓解持续光照导致的小鼠脂肪积累。

利用RP-HPLC法研究罗汉果采后贮藏期甜苷V的含量变化趋势

以RP-HPLC法检测罗汉果中甜苷V的含量,研究罗汉果采后不同贮藏期内甜苷V的含量变化趋势。结果表明：所检测的罗汉果在采后第1天甜苷V含量为0.3232%,第7天为0.3643%,第14天为0.3818%。由此可见,罗汉果在采后1-14 d的贮藏期间甜苷V含量依然会逐步增加,但前7 d增加较快,后7 d增加较慢。

罗汉果甜苷V特异性抗血清的制备与应用

目的制备罗汉果甜苷V（MogV）特异性抗血清，建立MogV含量竞争性抑制酶联免疫检测法。方法用罗汉果甜苷V-丁二酸酯一牛血清蛋白（MogV-HS－BSA）结合比约为44：1为免疫抗原制备抗血清，用罗汉果甜苷V-丁二酸酯一人血清蛋白（MogV-HS-HSA）结合比约为64：1为包被抗原，建立MogV含量竞争性抑制酶联免疫检测法。结果包被抗原工作浓度为1gg·mL-1，血清最佳稀释倍数为1：8000，在此工作浓度下，MogV浓度在1×10-4 －1gg·mL－1内回归方程仁－0．158X＋0．298，r=0．9910。结论成功制备了MogV抗血清，MogV浓度在1×10-1 -lgg·mL-1。内对抗血清的OD（405nm）值抑制作用呈良好的线性关系。

罗汉果甜苷V的合成生物学研究进展

罗汉果甜苷V是罗汉果甜苷中含量和甜度均较高的成分,具有止咳祛痰、抗癌、抗氧化、调节血糖等诸多药理活性,成为兼具治疗功能的天然非糖甜味剂,具有广阔的市场前景。然而目前有限的生物资源和较高的提取成本,限制了它的广泛应用。合成生物学的快速发展为植物天然产物的生产提供了一种新思路,通过构建罗汉果甜苷V的微生物细胞工厂,将实现其低成本、规模化生产。文中介绍了罗汉果甜苷V的结构及药理活性,重点综述了罗汉果甜苷V的合成生物学研究进展,并探讨了当前研究所面临的挑战,以期为罗汉果甜苷V生物合成的进一步研究提供参考。

高效液相色谱法测定白酒中罗汉果V的含量

采用高效液相色谱法测定白酒中罗汉果甜苷V的含量,从而达到检测白酒中添加罗汉果浸泡液的目的。检测条件为:Welch Materials Column-XB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(77∶23)为流动相,流速为1mL/min,检测波长为203nm,柱温25℃。罗汉果甜苷V进样量在0.4～20μg之间线性关系良好(R2=0.9983),回收率范围在97.5%～105.5%,RSD为2.56%(n=6)。该方法操作简便、测定快速、结果准确,同时具有良好的精密度、重复性和稳定性,可作为白酒中添加罗汉果浸泡液的检测方法。

罗汉果冲泡方式对其口感的影响研究

本文以罗汉果为原料,对其冲泡条件进行初步研究。通过单因素试验确定在冲泡条件为水温100℃,浸泡时长7.5 min,液料比1∶150,果仁∶果壳=3.5∶1.5时,罗汉果茶的口感最佳。同时本文还通过高效液相色谱对优化所得罗汉果茶水进行了罗汉果甜苷V的含量测定,其中罗汉果甜苷V的含量为16.82 mg/L。

酶法提高罗汉果提取物中甜苷V含量的工艺研究

以罗汉果干果为原料,采用超声波辅助提取得到罗汉果甜苷物提取液,加入α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase),在单因素试验基础上进行正交试验研究罗汉果提取物中苷类物质转化为苷V的工艺条件。结果表明,转化的最佳工艺条件为:pH5.5,酶与葡萄糖反应温度45℃、反应时间10 min、酶与提取液的比1∶1、料液比1∶14g/mL。经测定,得到的反应产物中苷V的质量浓度为0.051 mg/100 mL,比初始提高约2.25倍。

罗汉果法呢基焦磷酸合成酶基因的克隆及其序列分析

目的对罗汉果甜苷V生物合成途径的关键酶法呢基焦磷酸合成酶(Farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS)基因的全长cDNA序列进行克隆,为研究罗汉果甜苷V生物合成与基因调控奠定基础。方法根据植物FPPS基因保守功能域设计简并引物,通过PCR和RACE方法克隆罗汉果FPPS基因的全长cDNA。结果获得罗汉果FPPS(SgFPPS)基因的全长cDNA序列共1 354个核苷酸,包含一个1 026核苷酸的开放阅读框架(open reading frame,ORF),cDNA编码的蛋白包含342个氨基酸,推断蛋白质相对分子质量为3.92×104。NCBI Blastx结果显示,SgFPPS基因编码的蛋白与苹果树来源FPPS具有最高同源性,氨基酸一致度达85.1%。SgFPPS具有异戊烯基转移酶的5个典型保守功能域。进化树分析结果显示,SgFPPS基因与苹果树的FPPS具有较近的亲缘关系。结论首次克隆SgFPPS基因的全长cDNA序列,为分析SgFPPS基因表达特性及其在罗汉果甜苷V生物合成中的功能奠定基础。