罗汉果花叶病病原病毒鉴定

从典型病株上分离到 1种大小为 12 nm× (6 0 0～ 80 0 ) nm的线状病毒 ;该病毒可通过汁液摩擦和棉蚜(Aphis gossypii)传播 ,人工接种可侵染罗汉果 (Siraitia grosvenorii)、西葫芦 (Cucurbita pepo)、南瓜 (C.moschata)、黄瓜 (Cucumis sativus)、西瓜 (Citrullus vulgaris)、毛节瓜 (Citrullus vulgaria)和瓠瓜 (L agenariasiceraria)等葫芦科植物引起花叶症状 ,侵染苋色藜 (Chenopodium amaranticolor)引起局部褪绿斑点 ,接种番木瓜(Carica papaya)、普通烟草 (N icotiana tabacum)、心叶烟 (N .glutinosa)、曼陀罗 (Datura stramonium)、洋酸浆(Physalisf loridana)、番杏 (Tetragonia tetragonioides)、豇豆 (Vigna sinensis)未见有任何症状 ;病毒的致死温度为5 5℃～ 6 0℃ ,稀释终点为 10 - 3～ 10 - 4 ,在 17℃～ 2 5℃下放置 10 d还有侵染活力 ;EL ISA测定结果表明 ,该病毒与西瓜花叶病毒 - 2 (WMV- 2 )有密切的血清学关系。上述结果表明 ,引起广西罗汉果花叶病的病原病毒是 WMV-2的一个株系。本研究还表明 ,罗汉果花叶病毒与番木瓜环斑病毒 (PRSV)、马铃薯 Y病毒 (PVY)、烟草蚀纹病毒 (TEV)、大豆花叶病毒 (SMV)及莴苣花叶病毒 (L MV)

罗汉果花叶病毒(WMV-2-Luo)抗血清制备及ELISA检测技术研究

用西葫芦作为罗汉果花叶病毒 (WMV 2 Luo)的繁殖寄主 ,通过差速离心和PEG二次沉淀法得到WMV 2 Luo的提纯液 ,用该病毒提纯液免疫日本大白兔 ,获得了WMV 2 Luo兔抗血清。经ELISA测定 ,其效价为 1/5 12 0 ,以 0 1mol/L磷酸盐缓冲液 (pH7 8,含 1 5 %NaDIECA)作为样品制备缓冲液 ,用间接ELISA法检测WMV 2 Luo的灵敏度为 1/32 0 0。用此方法检测罗汉果组培苗带毒情况和田间病株均获得成功。

罗汉果组培苗脱毒方法研究

采用热处理结合茎尖技术对罗汉果组培苗进行脱毒培养，并用间接酶联免疫法和电镜观察法对脱毒效果进行检测．结果表明．组培苗经38．5℃热处理10d后，剥取0．2～0．5mm微茎尖培养或切取1．0～1．5mm茎尖进行二次茎尖脱毒培养，茎尖苗的脱毒率均为100％，建立了两种有效的罗汉果组培苗脱毒方法。

罗汉果茎尖脱毒技术研究

以罗汉果组培苗为试材,在高温热处理不同天数后剥取茎尖,进行罗汉果花叶病毒脱毒技术研究,同时采用间接ELISA法和电镜观察法检测其脱毒效果。结果表明:适合罗汉果热处理的时间为7～15d,试管苗的成活率可达90%～100%;38.5℃热处理10d剥取0.2～0.5mm的茎尖进行培养,脱毒率为100%。