半制备高压液相色谱法制备罗汉果苷Ⅴ标准品

目的:通过半制备高压液相色谱分离技术,建立一种快速、稳定、高效制备高纯度罗汉果苷Ⅴ标准品的方法。方法:先采用树脂吸附脱色技术进行前处理,再通过半制备高压液相色谱分离制备罗汉果苷Ⅴ,色谱条件为Eclipse XDB-C18色谱柱(9.4mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水,采用梯度洗脱,流速4mL/min,检测波长210nm,进样量36mg,柱温38℃。结果:分离得到的罗汉果苷Ⅴ的纯度为99.1%。结论:本方法具有操作简单、快速、稳定和产品纯度高等优点,可应用于实际样品的检测。

罗汉果苷Ⅴ对地卓西平诱导的小鼠精神分裂症样行为的影响

目的:探讨罗汉果苷Ⅴ(MogⅤ)对地卓西平马来酸盐(MK801)建立精神分裂症小鼠模型行为学影响。方法:40只8周龄C57BL/6雄性小鼠均分为对照组、MogⅤ组、模型组(MK801)和治疗组(MK801+MogⅤ);分别对各组动物进行旷场试验和前脉冲抑制(PPI)测试,评估并比较各组小鼠自发活动量和感觉运动门控功能。结果:与对照组比较,模型组小鼠表现出活动量明显增加[运动总距离(1324±197.7)cm vs(5209±476.4)cm;自发性运动次数(136±17.50)次vs(292.6±18.31)次;P均<0.001]和PPI受损[78 d B:(33.574±1.726)vs(10.311±2.317);84 d B:(43.260±5.008)vs(18.615±3.781);P均<0.01];与模型组比较,治疗组活动量明显降低[(3155±831.9)cm、(202.3±16.63)次],PPI异常明显改善[(34.871±1.633)、(43.816±5.900)](P<0.05或P<0.01)。结论:MogⅤ对MK801所致精神分裂症小鼠模型的高活动量和PPI受损具有一定的调节作用。

罗汉果苷V调控高糖状态巨噬细胞M1极化促进骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:糖尿病微环境会造成巨噬细胞过度M1极化,这种高糖炎症状态会抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而影响糖尿病骨缺损的愈合。研究表明罗汉果苷Ⅴ具有抗炎、抗氧化、降血糖的作用,但其能否调节高糖炎症状态下巨噬细胞M1极化及骨髓间充质干细胞的成骨分化尚不清楚。目的:探讨罗汉果苷Ⅴ在高糖炎症状态下调节巨噬细胞M1型极化对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:构建糖尿病C57BL/6小鼠模型,从正常和糖尿病小鼠分离骨髓来源巨噬细胞,分别培养于低糖和高糖培养基。使用脂多糖和干扰素γ作为炎症刺激诱导骨髓来源巨噬细胞的M1型极化,同时以160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,用流式细胞术检测F4/80^(+)CD86^(+)细胞比例,qRT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素1β、白细胞介素6的mRNA表达水平,ELISA检测骨髓来源巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α水平。分离C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,分别使用低糖或高糖成骨诱导液诱导成骨分化,添加M1型巨噬细胞条件培养基作为炎症刺激,以及320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,成骨诱导14 d后采用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关因子2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达水平,成骨诱导21 d后进行茜素红染色及定量分析。结果与结论:①流式细胞术结果显示320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的F4/80^(+)CD86^(+)细胞比例明显低于高糖炎症对照组(P<0.05);②qRT-PCR结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素6的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05),320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组白细胞介素1β的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);③ELISA结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的肿瘤坏死因子α分泌水平较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);④320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预后,高糖炎症状态下骨髓间充质干细胞的钙盐沉积增加(P<0.05),且碱性磷酸酶、Runt相关因子2和骨桥蛋白的mRNA相对表达量增加(P<0.05)。结果表明,罗汉果苷Ⅴ可通过抑制高糖炎症状态下骨髓来源巨噬细胞的M1型极化及炎症因子表达,促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

罗汉果品质受气候因子影响及其分子调控机制

为了探讨气候因子对不同季节授粉罗汉果品质影响及其分子作用机制,该文以主栽“青皮果”品种夏季与秋季授粉果实为研究对象,采用不同发育时间气候因子监测、形态大小测量、罗汉果苷代谢检测和基因表达qRT-PCR分析方法,统计分析二者生境气候因子、品质性状和基因表达差异。结果表明:(1)秋季授粉果实与夏季授粉果实相比,生境平均温度和有效积温35 d以后明显降低,昼夜温差65 d以前明显增加,并且平均温度、有效积温差异大于昼夜温差,光照强度和空气湿度则相近。(2)横径、纵径和单果重均增加,但是差异不显著。(3)罗汉果苷Ⅴ和11-O-罗汉果苷Ⅴ合成积累速度滞后10 d左右,含量从55 d开始均显著降低并且成熟时分别降低了40.66%和46.07%。(4)罗汉果苷Ⅴ合成酶基因55 d协同表达的一致性差,上调数目和幅度少,而且负责最后一步合成反应的葡萄糖基转移酶基因SgUGT94-289-3均下调表达。综上所述,夏季与秋季授粉罗汉果形态大小未受气候因子影响,而罗汉果苷Ⅴ品质则受温度影响显著,温度可能通过调控罗汉果苷Ⅴ合成酶基因协同表达的一致性和水平致使春季和秋季的罗汉果苷Ⅴ品质具有差异性。该研究结果为罗汉果优质栽培和遗传育种提供了理论依据。

HPLC法测定罗汉果中罗汉果苷V和11-氧化罗汉果苷V

目的建立HPLC法测定不同产地、不同栽培品系的罗汉果药材中罗汉果苷Ⅴ和11-氧化罗汉果苷Ⅴ。方法采用ODS（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，体积流量：0．75mL／min，检测波长：210nm，柱温：40℃。结果罗汉果苷Ⅴ在0．8046～20．1150μg线性关系良好（r=0．9998），平均回收率为104．6％，RSD为3．28％（n=6）。11-氧化罗汉果苷Ⅴ在0．5985～14．9625μg线性关系良好（r=0．9984）。结论本方法简便、快速、准确，可作为罗汉果药材的质量控制方法。

百部新碱与罗汉果皂苷Ⅴ联用对小鼠的镇咳、祛痰作用研究

目的:研究百部新碱与罗汉果皂苷Ⅴ联用后对小鼠镇咳、祛痰作用的影响,并筛选其最优配比。方法:各实验均选70只小鼠随机分为7组,分别为溶剂组(生理盐水)、可待因(15 mg/kg)或氨溴索(30 mg/kg)组(阳性对照)、百部新碱组(30 mg/kg)、罗汉果皂苷Ⅴ组(30 mg/kg)和质量比分别为2∶1、1∶1、1∶2的百部新碱-罗汉果皂苷Ⅴ联用组(30 mg/kg),ig给药,每天1次。分别进行氨水致咳实验(阳性药物为可待因)和气管酚红排泌实验(阳性药物为氨溴索),以咳嗽潜伏期、咳嗽次数和气管酚红排泌量为指标,比较各组药物的镇咳、祛痰作用。结果:与溶剂组比较,各给药组小鼠的咳嗽潜伏期明显缩短、咳嗽次数明显减少、气管酚红排泌量明显增加(P<0.05或P<0.01);与罗汉果皂苷Ⅴ组比较,百部新碱-罗汉果皂苷Ⅴ不同配比组小鼠的咳嗽潜伏期明显缩短、咳嗽次数明显减少(P<0.05),且以2∶1、1∶1配比组效果较好;与百部新碱组比较,百部新碱-罗汉果皂苷Ⅴ不同配比组小鼠的气管酚红排泌量明显增加(P<0.05),且以1∶1、1∶2配比组效果较好。结论:百部新碱与罗汉果皂苷Ⅴ联用后对镇咳、祛痰具有协同作用,可以百部新碱-罗汉果皂苷Ⅴ质量比为2∶1、1∶1作为该组合配比优选的参考。

罗汉果皂苷Ⅴ在人工胃液中的稳定性和体外代谢研究

为了研究罗汉果皂苷Ⅴ在胃肠道中的稳定性及体外代谢特征,该研究首先考察罗汉果皂苷Ⅴ在人工胃液中的稳定性,然后在体外模拟人肠内环境,研究人肠内细菌对该成分的代谢作用,并采用LCMS/IT-TOF液质联用仪分析了培养液中的化学成分,考察了罗汉果皂苷Ⅴ在人工胃液和人肠道菌群培养液中的变化。结果表明:罗汉果皂苷Ⅴ在人工胃液条件下,迅速发生酸水解反应,分别脱去3个糖苷、4个糖苷、5个糖苷及2个氢转化为二糖苷、一糖苷与脱氢苷元,其脱糖反应随着时间的延长而反应越完全,反应4 h后就只剩下苷元;该化合物在人的肠道菌群作用下经过脱糖反应转化为四糖苷、三糖苷、二糖苷、一糖苷,经过糖苷化反应转化成六糖苷。通过体外实验,初步了解罗汉果皂苷Ⅴ在胃液和肠道环境中的降解规律,该研究结果为今后探讨罗汉果皂苷在人体内的代谢与生物转化规律提供了物质和技术基础。

罗汉果皂苷Ⅴ通过PI3K/Akt通路抑制过氧化氢诱导的MIN6细胞氧化损伤

目的探讨罗汉果皂苷Ⅴ(mogroside V,MV)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞氧化损伤的保护作用,其机制是否与PI3K/Akt信号通路有关。方法MV预处理后,用500μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理MIN6细胞,MTT法检测MIN6细胞活力。流式细胞术检测各组活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及细胞凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、PCNA以及PI3K/Akt信号通路中Akt和p-Akt蛋白表达情况。结果H_(2)O_(2)能够明显抑制MIN6细胞增殖,诱导ROS产生和细胞凋亡,降低Bcl-2、PCNA、Akt和p-Akt的表达。MV预处理后,Bcl-2、PCNA以及Akt和p-Akt的表达增加,MIN6细胞活力增加。此外,MV可部分逆转Akt抑制剂MK2206(5μmol·L^(-1))对MIN6细胞的凋亡和氧化应激作用。结论MV对H_(2)O_(2)诱导的MIN6细胞氧化损伤具有保护作用,其机制是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的。

HPLC测定特殊医学用途电解质配方食品中罗汉果甜苷Ⅴ含量

目的建立测定特殊医学用途电解质配方食品中罗汉果甜苷Ⅴ含量的高效液相色谱法(HPLC)。方法采用HPLC,Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%磷酸溶液:乙腈=76:24,流速1.0ml/min,检测波长203 nm。结果罗汉果甜苷Ⅴ在0.05~1.0μg质量范围内呈良好线性关系,r=0.9997;平均加样回收率(n=9)为101.23%,RSD为1.59%。结论本法简便,结果准确,重现性好,可为特殊医学用途电解质配方食品的质量控制提供参考依据。

新型载体罗汉果苷V对紫杉醇的增溶作用

目的考察罗汉果苷V作为新型载体对难溶性药物的增溶作用。方法以罗汉果苷V为载体,紫杉醇为模型药物,采用溶剂法制备紫杉醇-罗汉果苷V固体分散体。采用高效液相色谱(HPLC)法测定紫杉醇的含量,考察固体分散体中紫杉醇的饱和溶解度和体外溶出性能的变化。同时,用差示热扫描法(DSC)进行物相鉴别,评价药物在固体分散体中晶型变化。结果紫杉醇-罗汉果苷Ⅴ固体分散体的饱和溶解度比紫杉醇增加约375倍;与紫杉醇比较,固体分散体的体外溶出速率和累积溶出度明显提高;差示热扫描法结果表明,紫杉醇在固体分散体内以无定形存在。结论罗汉果苷V能明显增加难溶性药物的溶解度和体外溶出度,且该载体安全、无毒,有望成为难溶性药物增溶的新型载体。

不同果龄罗汉果中甜苷含量分布研究

目的:研究不同果龄罗汉果中甜苷Ⅳ、甜苷Ⅴ的检测方法及含量分布。方法:以不同果龄罗汉果鲜果为原材料,采用超声波辅助提取,D101大孔树脂吸附纯化,得到罗汉果中甜苷提取液;采用HPLC法对罗汉果甜苷提取液进行含量测定,得到不同果龄罗汉果的甜苷Ⅳ、甜苷Ⅴ含量数值。结果:采用HPLC法检测罗汉果甜苷提取液,甜苷Ⅳ、甜苷Ⅴ吸收峰能明显分开,并且具有可读性;罗汉果甜苷Ⅳ的含量从30天到50天呈递增趋势,在50天之后含量骤减,70天以后苷Ⅳ的含量极低。罗汉果甜苷Ⅴ含量在30天到70天不断增加,而在70天之后,苷Ⅴ的含量趋于稳定。结论:HPLC法能同时检测出罗汉果苷Ⅳ、苷Ⅴ含量,得到了不同果龄罗汉果中甜苷Ⅳ、甜苷Ⅴ含量分布规律。

遮荫对桂南种植罗汉果净光合速率和品质的影响

通过大田栽培试验,探讨生育后期不同遮荫处理(遮荫率0、30%、50%和70%)对罗汉果净光合速率和罗汉果品质的影响。经过遮荫处理,罗汉果净光合速率日变化曲线由对照组(遮荫率为0)的双峰型转变为单峰型,曲线峰值出现在中午12:00时。遮荫率50%处理的曲线峰值、罗汉果苷Ⅴ含量和干果重比其它遮荫处理和对照组的高。结果表明,在桂南种植的罗汉果,生育后期给予遮荫率50%的处理对增加罗汉果的净光合速率,提高罗汉果苷Ⅴ含量和干果重较为有利。

超高效液相色谱法测定罗汉果中7种成分含量

目的建立超高效液相色谱法(UPLC)测定罗汉果中11-O-罗汉果苷Ⅴ、罗汉果皂苷Ⅴ、赛门苷Ⅰ、罗汉果苷Ⅳ、罗汉果苷Ⅲ、罗汉果苷Ⅲe、罗汉果苷Ⅱe的含量。方法采用Waters BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为水-乙腈溶液,梯度洗脱;柱温35℃;流速为0.3 mL·min^(-1);进样量为1μL;采用紫外检测器进行定量测定,检测波长203 nm;采用质谱检测器进行定性鉴别,检测模式为选择离子监测,监测离子的质荷比为1307.8,1309.8,1147.8,1147.8,985.7,985.7和823.7。结果11-O-罗汉果苷Ⅴ、罗汉果皂苷Ⅴ、赛门苷Ⅰ、罗汉果苷Ⅳ、罗汉果苷Ⅲ、罗汉果苷Ⅲe、罗汉果苷Ⅱe分别在0.50~20.10,5.03~201.20,0.51~20.24,0.52~20.63,0.51~20.22,0.51~20.56,0.50~19.92μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r≥0.999);平均回收率分别为100.7%,98.4%,100.4%,99.0%,100.4%,99.2%和99.2%,RSD分别为1.9%,1.0%,2.0%,1.9%,1.3%,0.8%和2.1%;质谱鉴别结果与紫外检出情况一致。结论该方法操作便捷、结果准确,重复性好,可用于同时测定罗汉果中的11-O-罗汉果苷Ⅴ、罗汉果皂苷Ⅴ、赛门苷Ⅰ、罗汉果苷Ⅳ、罗汉果苷Ⅲ、罗汉果苷Ⅲe、罗汉果苷Ⅱe的含量。

复方罗汉果清肺糖浆HPLC特征图谱及主要成分含量测定

目的建立复方罗汉果清肺糖浆的特征图谱,并测定其中主要成分木犀草苷、罗汉果皂苷Ⅴ的含量。方法采用Waters Sunfire C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长210 nm,柱温25℃,进样量10μL。结果 15批复方罗汉果清肺糖浆HPLC特征图谱确立了10个共有峰,且相对保留时间的RSD均小于2.0%。木犀草苷、罗汉果皂苷Ⅴ分别在0.163 2～0.816 0μg、0.730 8～3.654 0μg范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为96.30%、95.11%,RSD分别为2.28%、2.87%。结论 HPLC特征图谱结合主要成分含量测定能更全面反映制剂内在质量,可用于复方罗汉果清肺糖浆综合质量评价。

罗汉果药用功能研究与进展

罗汉果为葫芦科多年生宿根性藤本植物罗汉果的果实,也是中国特有的地道药材和甜味植物。被列入国家发展重点项目后,对其研究日渐增多,在各种医疗领域的应用功能也渐渐被开发出来,在镇咳祛痰、糖尿病治疗、免疫调节作用、抗肿瘤作用、抗菌抗疲劳等的研究逐渐深入。罗汉果作为广西特色经济作物,在医疗方面具有很大的潜力,特别是在肿瘤和糖尿病的治疗中,能提供一定的治疗作用。

HPLC-ELSD测定复方罗汉果止咳冲剂中罗汉果皂苷Ⅴ的含量

目的 建立HPLC-ELSD测定止咳冲剂中的罗汉果皂苷复方罗汉果V的含量的方法。方法 色谱条件是AlltimaTM-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相乙腈-水（23∶77）,柱温30℃,ELSD检测条件,漂移管温度为105℃,气流流量为2.0 L.min 1。结果 罗汉果皂苷Ⅴ进样量在1.608--9.648μg内时,进样量的对数与峰面积的对数呈良好的线性关系,回归方程为Y=1.634 3X＋12.591（r=0.999 7）,平均回收率为101.36%,RSD为1.29%。结论 该方法准确、专属性强,可用于测定复方罗汉果止咳冲剂中罗汉果皂苷Ⅴ的含量。

中药调控氧化应激防治急性肺损伤的研究进展

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是临床常见的极危重症之一,其死亡率与发病率居高不下,早期以低氧血症、肺间质水肿及肺部炎症为主,后进一步发展成为急性呼吸窘迫综合症,表现为严重的缺氧性呼吸衰竭。氧化应激作为诱发ALI的作用机制之一,在其发生发展中扮演重要作用。中药可通过抑制炎症及氧化应激反应,减轻肺间质水肿,改善肺通气,恢复肺组织损伤等起到治疗ALI的作用。基于此,从氧化应激作用功能、调控ALI机制及中药干预机制等方面进行归纳总结,为ALI的临床研究及新药创新探索提供理论指导。

贝蒌止咳口服液薄层鉴别与含量测定

目的:建立贝蒌止咳口服液中罗汉果薄层鉴别及浙贝母含量测定方法以控制制剂质量。方法:以TLC法对制剂中罗汉果进行定性鉴别;采用HPLC测定贝母素甲的含量,乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03)为流动相,色谱柱选取Diamonsil XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)。结果:罗汉果的薄层鉴别方法专属性强,无阴性干扰;贝母素甲在0.7820~3.9100μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为100.04%,RSD=0.30%。结论:该方法可有效控制贝蒌止咳口服液的质量。

贝蒌止咳口服液薄层鉴别与含量测定

目的:建立贝蒌止咳口服液中罗汉果薄层鉴别及浙贝母含量测定方法以控制制剂质量。方法:以TLC法对制剂中罗汉果进行定性鉴别;采用HPLC测定贝母素甲的含量,乙腈-水-二乙胺(70:30:0.03)为流动相,色谱柱选取Diamonsil XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm)。结果:罗汉果的薄层鉴别方法专属性强,无阴性干扰;贝母素甲在0.7820~3.9100μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为100.04%,RSD=0.30%。结论:该方法可有效控制贝蒌止咳口服液的质量。