罗汉果醇通过TREM-1/NLRP3通路介导的细胞焦亡对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的影响

目的探讨罗汉果醇对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的影响及其可能的作用机制。方法采用胰胆管逆行注射4%牛磺胆酸钠构建重症急性胰腺炎大鼠肺损伤模型,造模后分为模型组、罗汉果醇低、中、高剂量组(15、30、60 mg·kg^(-1)),另设置假手术组,每组12只。腹腔注射给药,每天1次,共2次。HE染色检测大鼠胰腺及肺组织病理学变化;生化法检测大鼠血清淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)水平;ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液中炎症因子白介素1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;比色法检测大鼠肺组织中Caspase-1活性;Western blot检测大鼠肺组织中髓样细胞触发受体-1(TREM-1)蛋白和焦亡相关蛋白NLRP3、Caspasse-1、Gasdermin D(GSDMD)等蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠胰腺和肺组织出现明显的病理学损伤,血清AMS和LPS水平、炎症因子IL-1β、IL-18及TNF-α水平、Caspase-1活性以及肺组织中TREM-1、NLRP3、Caspasse-1、GSDMD等蛋白表达水平均显著性升高(P<0.05);与模型组比较,不同剂量罗汉果醇干预可改善大鼠胰腺及肺组织病理学损伤,同时显著降低血清AMS、LPS,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α,Caspase-1活性和肺组织中TREM-1、NLRP3、Caspasse-1、GSDMD等蛋白表达水平。结论罗汉果醇可能通过抑制细胞焦亡改善重症急性胰腺炎大鼠肺损伤,其作用机制可能与调控TREM-1/NLRP3信号通路有关。

罗汉果醇通过激活AMPK信号通路调控肝细胞癌HepG2细胞的脂代谢

目的:研究罗汉果醇(MO)对肝细胞癌HepG2细胞脂代谢的调控作用及其分子机制。方法:采用油酸(OA)诱导肝细胞癌HepG2细胞脂肪累积,建立脂肪变性细胞模型。运用CCK-8法检测MO对HepG2的细胞毒性,筛选其无明显细胞毒性的实验工作浓度。不同工作浓度MO作用后运用油红O染色法观察模型细胞内脂质累积情况,测定细胞内甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)含量。运用高通量转录组测序方法筛选参与脂代谢的关键基因,运用qPCR检测模型及给药细胞SREBP-1c、FASN mRNA的表达、WB法检测p-AMPKα、SREBP-1c、FASN等蛋白的表达水平。结果:运用OA诱导的模型HepG2细胞内脂质大量累积,TG、TC含量显著升高。OA诱导后参与肝癌细胞脂代谢的关键基因SREBP-1c、FASN mRNA表达升高;p-AMPKα蛋白表达降低,SREBP-1c、FASN等蛋白的表达显著升高。工作浓度MO干预后,细胞内脂质累积显著减少、TG和TC含量降低,SREBP-1c、FASN mRNA表达降低,p-AMPKα蛋白表达升高而SREBP-1c、FASN等蛋白的表达明显降低。结论:MO能够通过激活HepG2细胞中AMPK信号通路相关因子SREBP-1c、FASN的表达抑制脂肪酸合成,从而发挥调节脂代谢的作用。

罗汉果醇的制备及大鼠体内代谢研究

为了制备得到高纯度的罗汉果醇以及阐明罗汉果醇的代谢特点,采用酸水解法从粗罗汉果皂苷V(含量50%)制备得到高纯度的罗汉果醇,用大鼠灌胃给药(100mg·kg-1)方法以及通过HPLC-ESI-IT-TOFMSn研究罗汉果醇的代谢特点。结果表明:在粪便中能发现较多氧化产物,在血浆中也能检测到代谢产物。说明罗汉果醇灌胃给药后,能经过吸收和代谢进入血液从而发生作用。

应用2D NMR技术研究罗汉果醇及其苷的结构

从传统中药罗汉果中分离得到一系列三萜皂苷类化合物,其苷元为罗汉果醇,应用1D和2D NMR脉冲梯度场反相技术(gCOSY,gNOESY,gHMQC,gHMBC)研究了罗汉果醇及其苷的结构,对其碳氢NMR信号进行了全归属,应用gNOESY技术研究了罗汉果醇的立体构型,并探讨了取代基对苷元质子和碳化学位移的影响.

罗汉果醇抗肿瘤活性及其作用机制研究

罗汉果醇是罗汉果皂苷的苷元,有研究报道罗汉果皂苷V具有防癌抑癌作用。该研究采用噻唑蓝实验(MTT法)检测罗汉果醇对不同肿瘤细胞增殖的抑制情况,以及不同浓度的罗汉果醇对CNE1细胞的增殖抑制率;应用细胞克隆形成实验进一步验证罗汉果醇对CNE1细胞增殖的抑制作用;采用Annexin V/PI双染法检测罗汉果醇对CNE1细胞凋亡的影响;以实时定量PCR技术检测罗汉果醇对CNE1细胞中Caspase-3、Survivin、Bax和Bcl-2基因的mRNA表达水平的影响。结果表明:罗汉果醇能显著抑制DU145、HepG2、A549、CNE1、CNE2细胞的增殖,其中对CNE1细胞增殖的抑制作用最为显著,并呈剂量依赖性,其半数抑制浓度IC50为(81.48±4.73)μmol·L^(-1);通过对CNE1细胞进一步的克隆形成实验,也验证了这一点;Annexin V/PI双染法可见随着浓度的增加,凋亡比例增加;实时定量PCR技术检测显示罗汉果醇处理后,促凋亡基因Caspase-3、Bax的表达增加,抗凋亡基因Survivin、Bcl-2的表达减少。因此,罗汉果醇可能是通过促进Caspase-3、Bax等促凋亡基因和抑制Survivin、Bcl-2等抗凋亡基因的表达,来诱导肿瘤细胞凋亡,进而发挥抗肿瘤活性。

3种植物生长调节剂对罗汉果苷和罗汉果醇积累的影响

为了探讨茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(SA)和脱落酸(ABA)对罗汉果苷IIE、III、IV、V和罗汉果醇积累的影响,利用不同浓度(50~400μmol/L)的MeJA、SA和ABA喷施人工授粉后50 d的罗汉果果实,48 h后取样,采用高效液相色谱测定罗汉果苷IIE、III、IV、V和罗汉果醇的含量。结果表明,在一定浓度范围内,MeJA、SA和ABA对罗汉果苷IIE、III、IV、V和罗汉果醇的积累均有促进作用。罗汉果苷IIE、IV和罗汉果醇随MeJA浓度增加呈现先升后降的趋势,而罗汉果苷III呈现相反趋势。罗汉果苷IIE和IV随SA浓度增加而上升,罗汉果苷III则呈现先升后降趋势。罗汉果苷V随ABA浓度增加而上升,罗汉果苷IIE、III、IV和罗汉果醇则呈现先升后降的趋势。

罗汉果醇对实验性肺-肠轴损伤的保护作用研究

探究天然产物罗汉果醇(Mogol, MG)对肺-肠轴的保护作用。方法:连续注射博来霉素(bleomycin,BLM,1 mg·kg-1)复制小鼠长期肺纤维化模型,MG(10 mg/kg)连续灌胃给药41天,考察MG对小鼠肺纤维化及其引起的结肠损伤的保护作用。采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)建立小鼠慢性溃疡性结肠炎模型,MG(5 mg/kg)连续灌胃给药70天,考察MG对小鼠慢性溃疡性结肠炎及造成的肺损伤的保护作用。结果:MG给药后显著改善了肺纤维化及溃疡性结肠炎小鼠的生存状态,病理组织切片结果显示MG给药后改善小鼠肺组织及结肠组织的炎性细胞浸润及胶原沉积。MG给药后显著降低IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-17、IL-1β等促炎因子的表达并且抑制小鼠肺组织中胶原及α-SMA的表达。结论:本文证实MG 可明显改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化症状,减轻 DSS 诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎,并且对于肺纤维化导致的结肠组织损伤及慢性溃疡性结肠炎导致的肺组织损伤也具有明显保护作用。这些研究结果为开发新型肠肺疾病药物提供可靠的科学理论依据。

酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧代罗汉果醇

使用酶水解-氧化裂解联用法,以罗汉果皂苷为起始原料,制备罗汉果醇(3)和11-氧代罗汉果醇(4)。本法将罗汉果皂苷先用酶水解去除部分糖基,降低糖链长度和复杂度,再进行氧化裂解制备苷元。该方法可弥补单一氧化裂解收率低以及酶水解无法制备苷元的缺点,大幅提高2种罗汉果皂苷元的收率。经试验条件优化,确定方法如下:罗汉果皂苷经β-葡萄糖苷酶水解1次,再以过量100%的高碘酸钠于60℃氧化裂解制备苷元,总收率约52%。本法可根据实际情况和需要进行调整,方案灵活,适合大量样品的制备。

罗汉果醇对脂多糖诱导急性肺损伤的作用及机制研究

目的通过脂多糖刺激小鼠以及人单核细胞THP-1诱导的急性炎症模型, 探索罗汉果醇促进AMPK磷酸化后靶向调控炎症通路的作用以及相关机制, 为罗汉果醇(MO)能否对急性肺损伤的临床治疗中得到应用提供研究证据。方法动物实验:取用24只6~8周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠, 采用随机(随机数字法)法将小鼠分为对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组, 每组各分配6只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水(30 mL/kg),MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg),脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(10 mg/kg), 脂多糖+MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg), 30 min后另一侧腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)。经过12 h后, 处死小鼠取材, 并进行病理学、分子生物学检测。细胞实验:取用状态良好的THP-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养24 h后, 用100 ng/mL PMA诱导分化成巨噬细胞, 设置对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组。药物刺激结束后收集各组细胞悬液, 所得细胞及培养基上清液用于后续检测。结果与对照组相比, 脂多糖组的损伤程度明显, 组织切片的H&E染色结果中可见肺泡腔结构破坏, 炎症细胞浸润增多, 且有出血以及肺泡腔间隔明显增厚;在加入MO干预下, 小鼠肺组织的损伤程度大幅度改善, MPO、肺湿/干重比等也有了显著的降低。肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也同样在MO的干预下显著下调[(2.96±0.10)vs. (5.53±0.14), (8.62±0.17)vs. (12.31±0.09), (3.01±0.09)vs.(4.85±0.36)]。在脂多糖组小鼠肺组织中炎性小体的主要成分蛋白NLRP3、caspase-1 p20、GSDMD-N、ASC表达量显著高于对照组,而脂多糖+MO组中AMPK磷酸化水平提高, 焦亡相关蛋白的表达均得到有效地抑制[(0.58±0.09)vs.(0.89±0.15)、(0.19±0.08)vs. (0.93±0.16)、(0.65±0.09)vs. (0.86±0.14)、(0.30±0.12)vs. (0.47±0.10), 均P<0.05];同时通过ELISA法测得在组织中焦亡的主要标志物炎症因子IL-1β、IL-18的分泌同样可以被MO缓解。而细胞实验中MO同样促进了AMPK的磷酸化, 抑制NLRP3炎症小体相关成分蛋白表达, 同时明显提高了细胞活力。结论 MO通过促进AMPK的磷酸化抑制NLRP3介导的细胞焦亡, 进而缓解脂多糖诱导的急性肺损伤。

罗汉果醇在大鼠血浆中代谢产物鉴定及药代动力学研究

罗汉果醇是七种罗汉果皂苷和赛门苷I的苷元,因其具有抗白血病和糖尿病的活性,日益受到关注。本文采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)法鉴定了大鼠灌胃给予100 mg·kg^(-1)罗汉果醇后血浆主要代谢产物,并建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定血浆中主要成分浓度,以评价其药代动力学。大鼠灌胃给予罗汉果醇后,血浆以原形药物为主,检测到13种代谢产物,主要为单氧化和脱氢代谢产物。定量分析时,为提高灵敏度,采用锂加合离子作为前体离子。测定大鼠血浆中罗汉果醇线性范围为5.00~1 000 ng·m L^(-1)。质控样品的日内、日间精密度(RSD)小于9.3%,准确度(RE)在-4.5%~2.9%之间。大鼠灌胃给予罗汉果醇后,吸收迅速,达峰时间大约为1.67 h,血浆清除半衰期约2.34 h,绝对生物利用度仅为3.5%。

罗汉果醇及其衍生物的药理作用研究进展

罗汉果中特有成分罗汉果醇及其衍生物罗汉果皂苷是一类葫芦烷型三萜糖苷。近年来,罗汉果醇及其衍生物罗汉果皂苷的药理作用引起了研究人员的广泛关注。对罗汉果醇及其衍生物罗汉果皂苷在保肝作用、神经保护作用、抗炎作用、抗肿瘤作用、治疗糖尿病及其并发症方面的研究进行综述。

药用植物罗汉果活性成分的抗运动性疲劳作用

罗汉果[Siraitia grosvenorii (Swingle)]是一种主要产于广西壮族自治区的多年生草本藤本植物,罗汉果醇(mogrol, MO)是罗汉果甜苷的生物代谢物。为了探讨药用植物罗汉果活性成分罗汉果醇(mogrol, MO)的抗运动性疲劳作用及机制,本研究通过负重力竭游泳实验建立疲劳大鼠模型,使用相应的试剂盒检测肝糖原和肌糖原含量、血清指标水平和骨骼肌中抗氧化指标水平。通过Western blot检测骨骼肌中磷酸化-AMP依赖的蛋白激酶α (p-AMPKα)、AMPKα、过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)共激活因子α (PGC-1α)和线粒体转录因子A (TFAM)的蛋白表达水平。结果显示,罗汉果醇延长了疲劳大鼠的力竭游泳时间(P<0.05),升高了肝糖原和肌糖原含量(P<0.05),降低了血清乳酸(LA)、尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平(P<0.05)。罗汉果醇升高了疲劳大鼠骨骼肌中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平,降低了丙二醛(MDA)水平(P<0.05)。罗汉果醇升高了疲劳大鼠骨骼肌中p-AMPKα/AMPKα、PGC-1α和TFAM的蛋白相对表达量(P<0.05)。本研究表明罗汉果醇可能通过增加糖原储备、提高抗氧化活性、激活AMPK信号通路发挥抗疲劳作用。