罗西格列酮对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的作用及机制

目的:观察罗西格列酮对脊髓损伤(SCI)大鼠后肢运动功能恢复的作用,探讨其作用机制。方法:75只成年SD大鼠,应用Allen改良法制作大鼠T10SCI模型,随机分为A、B、C三组,每组25只,B、C组于损伤后5min、6h、24h腹腔注射罗西格列酮,C组在腹腔注射罗西格列酮前1h给予G3335,A组于相应时间点腹腔注射等体积生理盐水作为对照组。每组取6只大鼠于伤后1d、7d、2w、4w、6w时对后肢运动功能进行BBB评分;伤后3d每组取4只动物脊髓组织行免疫组织化学染色法检测核转录因子κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)的表达;伤后1、3、5、7d和2w每组取3只应用Westernblot法检测脊髓组织中凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的表达。结果:伤后1d、7d时3组大鼠BBB评分均为0分,伤后2w开始B组BBB评分高于A组和C组,4w和6w时与A、C组比较有显著性差异(P<0.05);伤后3d时三组NF-κB表达均为阳性,但B组平均光密度值明显低于A、C组(P<0.05),B组与C组比较无显著性差异(P>0.05);伤后各时间点B组caspase-3表达量均低于A组和C组(P<0.05),而Bcl-2表达均高于A组和C组(P<0.05),其差异均在伤后5d达到高峰,A组与C组同时间点比较无显著性差异(P>0.05)。结论:罗西格列酮可促进SCI大鼠神经功能恢复,其机制可能与抑制炎症反应及细胞凋亡有关。

罗西格列酮对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响

目的探讨过氧化物增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂罗西格列酮对大鼠脊髓损伤后下肢运动恢复的影响。方法选择68只雌性SD大鼠采用改良Allen法制造脊髓损伤模型。(1)8只按照随机数字表法分为阴性对照组和罗西格列酮组,每组4只。采用免疫组化染色检测各组伤后7 d大鼠脊髓中天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)的表达。(2)48只按照随机数字表法分为阴性对照组、罗西格列酮组、罗西格列酮+壳梭孢菌素[核因子-κB(NF-κB)激活剂]组、罗西格列酮+单钠尿酸盐[寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)激动剂]组,每组12只。各组伤后1,3,14,21,28 d行后肢运动功能BBB评分;伤后28 d采用ELISA检测各组白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白表达量。(3)12只用于大鼠脊髓小胶质细胞的提取,培养7 d后小胶质细胞随机分为阴性对照组(不加药物处理)、罗西格列酮组(1μmol/L罗西格列酮处理)、罗西格列酮+壳梭孢菌素组(1μmol/L罗西格列酮+20μmol/L壳梭孢菌素处理)、壳梭孢菌素组(20μmol/L壳梭孢菌素处理)和壳梭孢菌素+MCC950(NLRP3拮抗剂)组(20μmol/L壳梭孢菌素+100 nmol/L MCC950)。采用Western blot检测小胶质细胞中caspase-1、NF-κB和NLRP3的蛋白表达量。采用ELISA检测小胶质细胞培养的上清液中IL-1β和TNF-α的蛋白表达量。结果与阴性对照组比较,罗西格列酮组脊髓损伤区域caspase-1表达减少[灰质区:(5.1±0.8)∶(6.9±1.1),白质区:(5.6±0.9)∶(7.5±1.1)](P<0.05)。伤后28 d,罗西格列酮组BBB评分[(14.7±1.6)分]效果最佳,罗西格列酮+壳梭孢菌素组为(10.5±2.1)分,优于罗西格列酮+单钠尿酸组的(7.2±1.3)分(P<0.05)。伤后28 d,罗西格列酮组IL-1β和TNF-α的表达低于其他各组(P<0.05)。在体外小胶质细胞中,罗西格列酮组caspase-1、NF-κB、IL-1β及TNF-α的表达量均低于阴性对照组(P<0.05);罗西格列酮+壳梭孢菌素组caspase-1、NLRP3、IL-1β及TNF-α的表达量均高于罗西格列酮组(P<0.05);壳梭孢菌素组caspase-1及IL-1β的表达均高于壳梭孢菌素+MCC950组(P<0.05),而两组间的TNF-α表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论罗西格列酮促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复可能与其抑制NF-κB表达,进而减少小胶质细胞内NLRP3炎症小体的激活并最终抑制炎症的发生有关。