罗非鱼皮胶原蛋白水解产物的体外抗氧化活性和体内抗衰老作用

对罗非鱼皮胶原蛋白水解制备水解产物(tilapia skin gelatin hydrolysate,TSGH),分离得到3个肽组分(TSGH-1、TSGH-2和TSGH-3),分析肽组分氨基酸组成,并对TSGH-3的体外抗氧化活性和体内抗衰老能力进行评价。结果表明:TSGH-3的分子质量低,疏水性氨基酸含量高,从自由基清除和金属螯合两个方面证实了TSGH-3具有很好的体外抗氧化活性。TSGH-3能显著增加由D-半乳糖诱导衰老大鼠的血清、肝脏和肾脏组织的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,并且能显著降低丙二醛的含量。此外,TSGH-3的摄入可以保护大鼠的肝脏和肾脏指数。因此,TSGH-3在抗氧化、抗衰老方面具有较好的应用潜力。

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。

罗非鱼皮胶原蛋白改变菌体形态和细胞壁完整性实现抑菌作用研究

目的探讨罗非鱼皮酶溶性胶原蛋白(Pepsin soluble collagen peptide from Tilapia skin,PSCPT)、罗非鱼皮酸溶性胶原蛋白(Acid soluble collagen peptide from Tilapia skin,ASCPT)的制备及抗菌性能。方法罗非鱼皮经浸提、离心、透析和冷冻干燥等步骤获得干燥的PSCPT、ASCPT。采用含有PSCPT或ASCPT的胰蛋白胨大豆肉汤培养基振荡培养大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌,定时测定细菌培养液的吸光度值、菌数、菌体细胞液电导率和细菌的形态特征。结果以牛胶原蛋白(Bovine skin collagen,BSC)为对照,PSCPT、ASCPT对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌均有不同程度的生长抑制作用,抑制率从22.97%±2.35%到65.21%±6.42%,其中PSCPT抑制铜绿假单胞菌作用显著,抑制率达到65.21%±6.42%;ASCPT抑制大肠杆菌作用微弱,抑制率只有22.97%±2.35%。血球计数板法得到的抑菌效果类似吸光度值得到的结果,但是抑制率存在差别。PSCPT、ASCPT造成大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌的菌体细胞液电导率从36.42±1.35μs/cm变化到185.80±4.70μs/cm,其中PSCPT使铜绿假单胞菌的电导率低至36.42±1.35μs/cm,ASCPT使白色念珠菌的电导率达到185.80±4.70μs/cm。电镜下观察到抑菌率高和电导率低的菌株出现菌体变形和细胞壁破裂等现象。结论与BSC相比,PSCPT、ASCPT从细菌抑制率、菌体细胞液电导率和细菌的形态特征体现出一定的抑菌特性。

罗非鱼皮抗氧化肽联合维生素C对皮肤损伤的愈合作用

该研究利用秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)皮肤损伤模型,研究了罗非鱼皮抗氧化肽(Tilapia SkinAntioxidant Peptide,TSAP)单独或联合维生素C(Vitamin C,Vc)饲喂线虫对其伤口愈合、生存率、体内活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)以及过氧化氢酶(CAT)的影响,并利用分子对接技术解析TSAP与Vc的协同作用机理。结果表明,与皮肤损伤模型组相比,TSAP单独或联合Vc均能显著提高线虫的伤口愈合率和生存率(P<0.05)。其中,TSAP与Vc联合饲喂的线虫在伤口损伤6 h后的愈合率(21.84%)和损伤后144 h的生存率(43.33%)显著高于TSAP或Vc单独饲喂组(其中TSAP组的伤口愈合率为14.11%,生存率为20.00%;Vc组的伤口愈合率为14.40%,生存率为20.00%,P<0.05)。与皮肤损伤模型组、TSAP组和Vc组相比,TSAP与Vc联合饲喂线虫的细胞内ROS(34.28%)和MDA含量(44.47%)显著降低(P<0.05),SOD(45.24%)和CAT活力(106.57%)显著增加(P<0.05);分子对接结果表明,TSAP与Vc通过Gly3、Arg8与烯二醇的氢键作用形成复合物,对线虫损伤愈合产生协同作用。综上所述,TSAP和Vc联合饲喂可调控线虫的氧化应激水平,协同促进其伤口愈合。