置换肽对豚鼠银屑病样模型表皮增殖的治疗作用

目的观察置换肽(APL)对豚鼠银屑病样模型表皮增殖的治疗作用。方法采用心得安法制备豚鼠耳廓银屑病样模型,APL外涂给药,免疫组化法检测皮损中细胞增殖核抗原(PCNA)变化并评价疗效。结果APL组动物银屑病样改变的好转程度明显优于对照组(P<0.05)。结论提示APL具有促进豚鼠银屑病样模型康复的作用。

角蛋白17的置换肽的克隆表达及纯化

目的克隆角蛋白17的置换肽(APL),表达并纯化置换肽。方法将人工合成的置换肽DNA片段连接至表达载体pGEX4T1,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,分析鉴定表达蛋白,并纯化蛋白。结果①连接到载体的DNA序列,序列测定证实与已知序列一致;②成功构建了融合表达载体;③表达了pGEX4TS12E融合蛋白;④得到纯化的融合蛋白。结论人角蛋白17的置换肽的克隆成功及融合蛋白的表达与纯化,为进一步探索置换肽的功能打下了基础。

置换肽对豚鼠银屑病样模型血清IFN-γ的抑制作用

目的探讨置换肽(APL)对豚鼠银屑病样模型血清IFN-γ浓度的影响。方法采用心得安法制备豚鼠耳廓银屑病样模型,APL组和对照组皮损处分别外涂APL及对照药物,ELISA法检测血清IFN-γ变化,分析涂药前、后各组内及组间的差异。结果APL组动物血清IFN-γ表达量明显低于对照组(P<0.05),高浓度的APL对IFN-γ的抑制作用更强。结论提示APL对豚鼠银屑病样模型血清IFN-γ的表达具有抑制作用。

角蛋白置换肽配体对银屑病患者外周血T细胞的抑制作用

目的筛选下调银屑病患者T细胞功能的置换肽配体。方法分离和纯化寻常型银屑病患者和健康人外周血T细胞,通过MTT法和ELISA法分别检测T细胞增殖情况和IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10等细胞因子的变化,筛选得到抑制银屑病患者外周血T细胞功能的APL。结果APL 119R和355L可显著下调银屑病患者T细胞的增殖,分别与谷胱甘肽巯基转移酶和空白对照比较,在10μg/mL和100μg/mL浓度下,P<0.05;而对健康人T细胞无明显作用。同时二者可显著下调银屑病患者外周血T细胞的IFN-γ和IL-2,上调IL-4和IL-10的分泌表达,分别与相对应的野生型表位比较,在10μg/mL和100μg/mL浓度下,P<0.05。结论APL 119R和355L具有体外下调银屑病患者外周血T细胞增殖和增强Th2极化的作用。

真核表达的EF-1α-Flag蛋白对体外蛋白翻译的影响

目的:构建EF-1α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α(EF-1α),测定其对体外蛋白翻译的影响。方法:通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建的重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出的蛋白含量。结果:测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增的EF-1α-Flag基因序列正确,所构建的重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换的EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白的翻译。结论:从哺乳动物细胞中纯化的EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α的功能奠定了基础。