重组羊奇异变形杆菌ompA乳酸乳球菌的构建及其在小鼠体内的定植规律检测

构建了合羊奇异变形杆菌外膜蛋白A（ompA）编码基N的重组栽体pNZ8149-ompA，并将其电转入乳酸乳球菌NZ3900中。利用Westenblot检测目的蛋白的表达，流式细胞仪及间接免疫荧光技术检测目的蛋白在乳酸乳球菌中的定位。将重组乳酸乳球菌灌胃BALB／c小鼠，分别于口服后1，2，3，4，5，6，7d取其十二指肠、空肠、回肠、盲肠的肠道冲洗液，通过平板菌落计数法检测乳酸乳球菌在肠道的定植情况。Westernblot检测到目的蛋白于49000处出现特异性条带；流式细胞仪检测到重组乳酸乳球菌表面荧光强度明显强于空质粒对照组；间接免疫荧光试验检测到重组乳酸乳球菌菌体表面出现绿色荧光。灌服小鼠后，重组乳酸乳球菌在小鼠各肠段的定植比例不同，定植能力于口服后6d达到高峰，7d后在重组菌在十二指肠、空肠、回肠和盲肠的定植率分别占第1d的15．23％，24．19％，48．57％，40．07％。本试验证明羊奇异变形杆菌ompA能够稳定表达于乳酸乳球菌表面，且重组乳酸乳球菌在小鼠肠道内具有良好的定植能力，其定植能力为回肠〉盲肠〉空肠〉十二指肠。这为研究乳酸乳球菌作为羊奇异变形杆菌口服疫苗抗原递送栽体提供了试验基础。