传代再培养在孕中晚期孕妇羊水穿刺产前诊断中的应用价值

目的探讨传代再培养在孕中、晚期孕妇羊水穿刺产前诊断中的应用价值。方法选取2019年6月至2021年6月于遂宁市中心医院产前接受羊水穿刺并经胎儿染色体核型分析的134例孕中、晚期孕妇羊水标本,每名孕妇羊水标本分为2份,分别采用羊水原瓶培养和羊水传代再培养方式。分析孕妇孕龄及羊水穿刺适应证分布情况,比较不同培养方式的羊水培养结果(羊水细胞培养成功率、总培养时间)、核型制备质量(细胞克隆数、可制片数、可分析分裂相数),分析羊水核型结果和妊娠结局。结果134例孕中、晚期羊水穿刺孕妇中,穿刺时间以孕23~24^(+6)周(47.01%)为主,超声异常(63.43%)为羊水穿刺最常见适应证。羊水传代再培养方式羊水细胞培养成功率为100.00%,高于羊水原瓶培养方式的70.90%,总培养时间长于羊水原瓶培养方式,细胞克隆数、可制片数和可分析分裂相数均多于羊水原瓶培养方式,差异有统计学意义(P<0.05)。134例孕妇羊水核型中,正常核型120例,异常核型8例,染色体异常检出率为5.97%,染色体多态性6例;除3例47,XN,+21和2例47,XXY孕妇终止妊娠,其他孕妇均继续妊娠。结论孕中、晚期羊水传代再培养方式可提高羊水细胞培养成功率和核型制备质量,对预防出生缺陷具有重要意义。

羊水原位培养法联合染色体微阵列分析在产前诊断中的应用

目的评估羊水原位培养法联合染色体微阵列分析(CMA)技术在产前诊断检出胎儿染色体异常中的应用价值。方法回顾性分析2018年10月至2023年2月于怀化市妇幼保健院因不同产前诊断指征而行羊水穿刺术的3133例孕妇,比较羊水原位培养法和CMA法在胎儿染色体异常方面的检出率和差异。结果在3133例样本中,双指征组的异常检出率均较单指征组分别增加0.95%(羊水原位培养法)和2.36%(CMA);两种技术联合检测共检出796例异常(检出率25.41%),其中羊水原位培养法检出300例(9.58%),CMA法检出706例(22.53%)。两者均能检出145例非整倍体异常和31例染色体结构异常,但CMA另增加检出169例提示致病或可能致病的染色体拷贝数变异(CNV)、杂合性缺失(LOH)、杂合性不存在(AOH)/纯合区域(ROH)及单亲体二倍体异常(UPD),而羊水原位培养法增加检出11例染色体结构异常。两者联合检出嵌合体23例(0.73%)。结论羊水原位培养法与CMA技术互为补充,联合应用可显著提高胎儿染色体异常的检出率,可为产前遗传咨询提供更详细准确的信息,有助于孕妇决策是否终止妊娠。

羊水细胞培养与染色体制备的方法探讨

目的:探讨产前诊断中羊水细胞的培养与染色体的制备方法。方法:选取2021年1—12月桂林市妇幼保健院产科门诊进行产前诊断的孕妇羊水标本928例,进行羊水细胞培养及染色体制备。结果:928例标本全部培养并且染色体制备成功,羊水培养成功率为100.00%。共发现异常核型(不包括染色体多态性改变)38例(4.09%),其中常染色体数目异常15例(1.62%),性染色体数目异常8例(0.86%)、染色体结构异常8例(0.86%)、嵌合体7例(0.75%)。结论:羊水细胞的培养与染色体制备与实验人员操作经验和实验条件密切相关,应制定适合的操作规则,以提高产前诊断结果的准确性和工作效率.

细胞刮刮细胞法和胰酶消化法在羊水培养中的效果比较

目的比较细胞刮刮细胞法和胰酶消化法在羊水传代和收获过程中的应用效果,选出合适的羊水培养法。方法选择100例羊水标本,每例同时用细胞刮刮细胞法和胰酶消化法传代细胞和收获细胞,比较两种方法在传代后到收获所需的培养时间、有效分裂象数和假性嵌合体发生率方面的区别。结果细胞刮刮细胞法处理的羊水标本在传代后到收获所需的培养时间比胰酶消化法短。细胞刮刮细胞法收羊水细胞获得的有效分裂象比胰酶消化法多。细胞刮刮细胞法处理的羊水标本检出2例假性嵌合体,而胰酶消化法处理的羊水标本未检出嵌合体。结论在羊水培养过程中传代和收获时用细胞刮刮细胞法处理羊水标本具有操作简单、对细胞损伤小、耗时少、有效分裂象多的优点,优于胰酶消化法。

产前诊断中羊水细胞培养技术的改良及应用体会

目的 寻找一种简便、快速、成功率高且较为稳定的羊水细胞培养方法。方法 采用改良的羊水细胞培养技术 :改变培养液成份、建立收获标准及改良收获方法。结果 提高了羊水培养成功率 (97 1% ) ,缩短了培养时间 (9～ 10d)。结论 改良的培养技术培养羊水细胞成功率高 ,培养时间短 ,可分析核型多 。

荧光原位杂交在未培养羊水细胞产前诊断中的临床应用研究

目的:建立稳定的荧光原位杂交(FISH)技术,探讨FISH技术在未培养羊水细胞产前诊断的临床应用价值。方法:应用国产5条染色体探针(13、18、21、X、Y)对411例有产前诊断指征的孕妇进行未培养羊水细胞的FISH检测,同时进行细胞染色体核型分析,对两者检测结果进行比较。结果:411例中,正常核型398例,非整倍体核型5例(均为21-三体),结构异常4例(平衡易位2例、倒位2例),染色体多态4例。其中正常核型及5例非整倍体核型能被FISH检测出,而染色体结构异常和染色体多态未能检测出;FISH检测时间为48～72小时,较传统核型分析时间(14～21天)大大缩短;FISH检测一次成功率97.3%,并且不受孕周的限制;FISH检测与细胞培养核型分析相符;FISH检测没有受到羊水性状的影响;染色体非整倍体的诊断准确率达100%。结论:应用国产探针对未培养羊水细胞进行FISH分析,实验方法简便快速,可用于染色体非整倍体的产前诊断,有较大的临床应用价值。

荧光原位杂交技术在未培养羊水细胞产前诊断中的应用研究

目的:探讨运用荧光原位杂交(FISH)技术对未培养羊水细胞的染色体非整倍体进行快速诊断的临床应用价值。方法:对符合产前诊断要求的孕妇于孕18～24周抽取羊水,用13、21、18及X、Y号染色体探针对其未培养羊水细胞进行诊断,并与核型分析结果比较。结果:125例标本的核型分析中,成功培养123例,其中117例为正常核型,6例为异常核型,异常核型为21-三体2例,9号染色体臂间倒位3例,6号和7号染色体平衡易位1例;与核型分析相比,FISH只检测出2例非整倍体核型,其余染色体结构异常未能检出,FISH检测时间为24～48小时,较传统核型分析时间2～3周大大缩短,且同核型结果一致,特异性100%。结论:荧光原位杂交技术具有简便、准确等优点,可快速地辅助核型分析,缓解患者及家属情绪,有临床推广价值。

2679例羊水细胞培养及染色体核型结果分析

目的探讨羊水细胞培养及染色体核型分析中的若干问题,以及穿刺指征对于染色体病产前诊断的意义。方法对于成功培养的2671羊水标本的染色体结果进行分析,分析检出异常核型的类型、不同穿刺指征的异常检出率以及异常核型分布的特点。结果与结论2671例成功分析的标本,检出异常核型101例,检出率为3.78%,其中常染色体三体33例,性染色体三体8例,性染色体单体2例,易位24例,倒位14例,部分缺失4例,嵌合体8例,其他染色体结构异常8例。

产前诊断中羊水细胞培养方法的研究

目的：探讨产前诊断中羊水细胞培养方法及不同羊水量对培养结果的影响。方法：155例羊水标本，以不同羊水量分为两组，分别以平皿盖玻片法和培养瓶法进行培养，比较两种培养方及不同羊水量的培养结果。结果：平皿盖玻片联合培养瓶法培养一次成功并获满意核型151例，成功率97.4％；两种培养方法比较，两组中均以平皿盖玻片法成功率高于培养瓶法；平皿盖玻片法6～8mL与15～20mL羊水的培养成功率无显著差异。结论：羊水细胞培养中，平皿盖玻片法优于培养瓶法，前者具有成功率高、收获时间早、容易区分真假嵌合型的优点，更适用于羊水量少、孕周偏大者；产前诊断中推荐以培养瓶法联合平皿盖玻片法行羊水细胞培养。

羊水细胞染色体培养的操作分析

目的探讨羊水细胞染色体检查的适宜操作方法,研究羊水细胞染色体异常与疾病的关系。方法无菌条件下,取羊水细胞培养,常规收细胞G显带,镜下核型分析。结果符合产前诊断指征成功培养100例,培养成功97例,成功率97%;羊水染色体中异常核型4例,检出率为4%,其中三体综合征1例,占25%,倒位1例,占25%。染色体多态性2例,占50%,结论对具有产前诊断指征的孕妇行羊膜腔穿刺,取羊水进行细胞染色体培养是十分必要的,羊水细胞染色体检查是目前安全、有效的诊断胎儿染色体的方法。本文由于样本例数少,异常检出率与报道差别比较大,只是作为检查的一个统计,而本文着重讨论羊水细胞检查的操作方法。

改良羊水原位培养技术在产前诊断中的应用

目的探索改良羊水细胞原位培养细胞在染色体疾病、地中海贫血产前诊断中的应用价值。方法抽取有产前诊断指征孕妇孕中期羊水,采用改良羊水细胞原位培养;对双方为同型地中海贫血,有母体血污染的标本,采用培养后细胞提取DNA,进行产前诊断,采用未培养标本作为对照。结果3 000例标本培养成功率为99.7%,检出异常核型175例;43例标本,未培养前检出α-地贫28例,β-地贫13例;培养后检出α-地贫23例,β-地贫9例;培养前后结果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用改良羊水细胞原位培养,成功率较高,利用培养后羊水细胞进行地中海贫血诊断,避免了母血污染而造成误诊,准确性好。

不同孕期羊水间充质干细胞体外培养方法的比较

背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB（-）,ACP、PAS、AENE（＋）,而NAP有1%为（＋）,不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈＂S＂形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB（-）,ACP、PAS、AENE（＋）,而NAP有1%为（＋）,不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈＂S＂形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。

孕中晚期羊水细胞培养联合FISH诊断胎儿染色体异常的临床价值

目的:分析孕中、晚期羊水细胞培养联合荧光原位杂交(FISH)诊断胎儿染色体异常的临床价值。方法:选取2904名妊娠中、晚期孕妇,采用羊水细胞培养联合FISH诊断胎儿染色体异常,分析诊断结果并总结两种诊断方式各自的优缺点。结果:2904份羊水标本中2815份培养成功(96.9%),标本自接种、培养至核型分析均分为两组,两组分析2815例羊水染色体结果均一致。在成功培养的2815份标本中发现异常核型139例(4.94%)。2904份羊水标本FISH检测均成功,成功率100.00%。FISH检测共检出染色体数目异常90例,与羊水细胞染色体核型分析结果一致,染色体核型检出的3例染色体缺失重复、44例结构异常及2例嵌合异常未被FISH检出。结论:孕中、晚期羊水细胞培养的成功率值得肯定,结合FISH实验能够实现染色体数目异常的快速、早期判断,是传统细胞遗传学方法的有效补充。

提高羊水细胞培养成功率的方法

目的提高羊水培养的成功率。方法正常羊水保留换液标本,以备复查;异常羊水采用细胞分离技术提取羊水中的有效细胞成分;及时发现污染羊水并进行抗菌处理。结果提高了羊水培养的成功率(99.4%)并缩短异常羊水的培养时间,解决了部分污染羊水的污染问题(2/3)。结论保留换液标本可有效解决因收集不当而导致无法诊断的问题;细胞分离技术可提高异常羊水细胞培养的成功率并缩短培养时间,污染的羊水也可抗菌后培养成功。

羊水细胞培养用于产前细胞遗传学诊断177例分析

目的:应用羊水细胞培养对孕中期孕妇进行产前诊断,预防染色体病。方法:采用羊水细胞培养、常规染色体制备、G显带技术,对177例具有产前诊断指征的孕妇进行染色体核型分析。结果:6例21三体,1例45,X,3例平衡易位,诊断结果与随访情况一致。结论:羊水细胞培养进行产前诊断是十分安全而可靠的。

羊水细胞培养及染色体制备方法的探讨

目的:探讨羊水细胞培养及染色体制备方法。方法:孕15～29周具有产前指征的50例孕妇,抽取羊水细胞培养6～7天,换液第二天取出观察,见有许多大而亮圆的分裂期细胞时,加入秋水仙素继续培养1小时后收获、低渗、固定、制片、消化、染色。结果:50例羊水细胞培养全部成功,成功率100%。有49例获得满意的染色体分裂相。结论:该方法细胞培养成功率高、有效分裂相多、实验稳定、易于操作、成功率高。

500例羊水细胞培养染色体核型分析在产前诊断中的应用

本文运用羊水细胞培养染色体G显带核型分析方法 ,对 5 0 0例具有不良生育史、高龄孕妇、孕早期有明显致畸因素接触史、夫妇一方为染色体平衡易位携带者、曾生育过染色体病患儿等孕妇进行了临床与染色体核型分析 ,发现异常核型 11例 ,并经脐血染色体核型分析证实。证明了羊水染色体核型分析在产前诊断中的重要作用。

提高不合格羊水标本细胞培养成功率的探讨

目的:探讨提高血性羊水等不合格羊水标本培养成功率的方法。方法:采用多次换液或传代方法改善培养内环境来确定合适的时间收获羊水细胞。结果:32例不合格标本中,成功25例,成功率为78%。结论:采用适当的措施可以提高对不合格羊水标本培养成功率。

产前诊断中羊水细胞培养与染色体核型分析的应用及对出生缺陷的预防价值

目的:探究产前诊断中羊水细胞培养与染色体核型分析的应用及对出生缺陷的预防价值。方法:选取2017年12月-2019年12月于本院分娩的182例产妇的临床资料进行回顾性分析。将91例行常规超声产前诊断的产妇作为对照组,将91例使用羊水细胞培养与染色体核型分析进行产前诊断的产妇作为研究组。以实际情况为金标准,对比两组产前诊断情况,分析出生缺陷者的临床特征。结果:以实际情况为金标准,共62例发生出生缺陷。研究组的漏诊、误诊率均低于对照组(P<0.05),且研究组的诊断准确率明显高于对照组(P<0.05);发生出生缺陷者的无创检查异常率、夫妻一方染色体异常率、唐氏筛查异常率、高龄产妇及不良孕产史占比均高于未发生出生缺陷者(P<0.05)。结论:将羊水细胞培养与染色体核型分析应用于产前诊断中可以降低出生缺陷的误诊率和漏诊率,进一步提高产前诊断准确率。分析异常染色体核型的检出情况,可为临床上优生优育提供重要依据,有效降低出生缺陷的发生率,值得推广应用。