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人羊水祖细胞的分离和基因修饰
被引量:
1
1
作者
杨辰敏
范书玥
+4 位作者
唐汇祥
巩芷娟
龚秀丽
任兆瑞
曾凡一
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期492-503,共12页
探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等...
探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等方法检测hFIX的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样,倍增时间为39.05 h,该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子SSEA4,TRA1-60,在基因水平还可检测到NANOG,OCT4,SOX2mRNA的表达。羊水祖细胞导入hFIX cDNA后,能合成并分泌hFIX蛋白,传代后48 h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%,凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期,为50.35%±5.42%,凝血活性可达45.34%±4.67%。ELISA检测显示转染后的羊水细胞表达的hFIX蛋白的水平呈现基本稳定趋势,波动幅度较小;同时检测FIX凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞,转染了hFIX的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hFIX蛋白,为血友病B产前治疗的新方法提供了实验依据。
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关键词
血友病B
羊水祖细胞
人凝血因子IX
基因治疗
原文传递
题名
人羊水祖细胞的分离和基因修饰
被引量:
1
1
作者
杨辰敏
范书玥
唐汇祥
巩芷娟
龚秀丽
任兆瑞
曾凡一
机构
上海交通大学医学院附属瑞金医院妇产科
上海交通大学医学院医学科学研究院发育生物学研究室
上海交通大学医学院附属儿童医院上海医学遗传研究所
卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室及上海市胚胎与生殖重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期492-503,共12页
基金
国家杰出青年科学基金(No.81125003)
科技部国家重大研究计划(No.2014CB964700)
+2 种基金
上海市教委曙光跟踪项目(No.10GG10)
上海市重点学科建设项目(No.S30201)
上海市科委项目(No.12XD1406500)资助~~
文摘
探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等方法检测hFIX的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样,倍增时间为39.05 h,该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子SSEA4,TRA1-60,在基因水平还可检测到NANOG,OCT4,SOX2mRNA的表达。羊水祖细胞导入hFIX cDNA后,能合成并分泌hFIX蛋白,传代后48 h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%,凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期,为50.35%±5.42%,凝血活性可达45.34%±4.67%。ELISA检测显示转染后的羊水细胞表达的hFIX蛋白的水平呈现基本稳定趋势,波动幅度较小;同时检测FIX凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞,转染了hFIX的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hFIX蛋白,为血友病B产前治疗的新方法提供了实验依据。
关键词
血友病B
羊水祖细胞
人凝血因子IX
基因治疗
Keywords
hemophilia B, human coagulation factor IX (hFIX), human amniotic fluid derived progenitor cell (hAFPC), genetherapy
分类号
R554.1 [医药卫生—血液循环系统疾病]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人羊水祖细胞的分离和基因修饰
杨辰敏
范书玥
唐汇祥
巩芷娟
龚秀丽
任兆瑞
曾凡一
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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参考文献
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