羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后半数致死量(LD_(50))的测定

目的测定羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后的LD50。方法将感染羊瘙痒因子263K的仓鼠脑组织用生理盐水制成10%(w/v)脑组织匀浆,梯度稀释后感染仓鼠,观察仓鼠的发病情况。以Reed-Muench公式计算LD50,用West-ern blot方法检测观察期结束后发病及仍存活的仓鼠脑组织、脾组织中抵抗蛋白酶K的PrPSc。结果当颅内接种稀释度由低到高变化时,仓鼠发病的潜伏期及病程同时也由短到长发生变化。发病仓鼠脑组织中可以检测到PrPSc,但是PrPSc的量在不同的组之间无太大差别。观察期结束后,仍存活的仓鼠脑组织中未检测到具有PK抗性的PrP信号。结论本实验室保存的羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠的LD50为9.2-log10LD50i.c.units/0.001g brain,即当对仓鼠颅内接种10μl羊瘙痒因子263K的10-9.2稀释液时,50%的仓鼠会死亡。

羊瘙痒因子263K感染的金黄仓鼠脑中PrP^(Sc)的动态沉积特点

目的 观察羊瘙痒因子 2 63K感染的金黄仓鼠脑中PrPSc的沉积特点。方法 颅内接种羊瘙痒因子 2 63K感染金黄仓鼠 ,分别于接种后第 2 0天、40天、50天、60天和 70天取脑组织 ,用免疫组化法检测PrPSc的沉积 ,HE染色观察病理变化 ,Westernblot检测蛋白酶抗性PrPSc。结果 颅内接种 2 63K后第 2 0天 ,脑组织中即可检测到耐热和耐蛋白酶K的PrPSc的沉积 ,呈散在分布 ;第 40天可见细胞内PrPSc的沉积 ,第 50天脑组织中出现灶性、颗粒状、细胞内PrPSc的沉积 ,累及部位扩大 ,第60 - 70天可见弥漫性呈桑葚状、斑块状沉积物。PrPSc主要沉积于大脑皮质Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层 ,海马锥体细胞层 ,小脑皮质颗粒层。HE染色结果显示大脑皮质海绵样病变在接种后 40天出现 ,随着接种时间的延长而加剧。Westernblot检测显示PrPSc在接种后 40天即可检出 ,PrP总量和PrPSc含量随着接种时间的延长而增加。结论 随着接种时间延长 ,羊瘙痒因子 2 63K感染的金黄仓鼠脑中PrPSc沉积累及的范围、程度扩大 ,IHC检测脑组织中PrPSc的沉积早于临床症状的出现 ,甚至其它检测方法的检出。