我国羊种3型布鲁氏菌的多位点序列分型研究

目的对2004-2009年从病人标本中分离的羊种3型布鲁氏菌进行遗传多态性分析,了解菌株的遗传特征及遗传进化关系。方法采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)技术,对47株布鲁氏菌菌株的7个管家基因、1个外膜蛋白基因及1个基因间区的序列进行测定,将各个基因的序列与标准菌株的等位基因型进行比对,确定其等位基因谱型及菌株序列型(STS),分析与其它ST型间的遗传关系。结果 47株布鲁氏菌中,19株omp25基因与目前已有的等位基因型不同,被定义为1个新的等位基因型,即ST28。其余28株与已知的ST8型的各等位基因型一致。结论我国流行的羊种布鲁氏菌主要是羊3型菌株,国内的菌株与国外菌株遗传背景上有差异。MLST分型可以作为研究布鲁氏菌进化关系的重要手段之一。

全基因组测序用于宁夏羊种3型布鲁氏菌毒力基因筛选的研究

目的从3株布鲁氏菌分离株的全基因组序列中筛选出可能导致脑损害的关键毒力基因,为后续筛选布鲁氏菌致脑损害毒力基因的研究奠定基础。方法通过BCSP31PCR、传统生化实验对3株分离于布鲁氏菌病患者外周血中的布鲁氏菌进行鉴定分型。利用Illumina Hiseq2000平台对3株布鲁氏菌进行全基因组测序与比较基因组学分析,根据文献报道分析筛选出布鲁氏菌的经典毒力基因,通过检索NCBI核酸数据库查找出所选毒力基因的参考序列,利用所选参考序列分别与3株布鲁氏菌全基因组序列做BLAT比对分析。结果3株布鲁氏菌经BCSP31PCR、传统生化实验鉴定为羊种3型;比较基因组分析显示3株布鲁氏菌与标准株参考序列的同源性比例均达到99.02%。BLAT比对分析发现所选毒力基因wbkA、pgm、hemolysin、hemolysin III和Omp25在这3株布鲁氏菌全基因组序列中的比对分数均达到99%以上。结论本研究所选取的3株羊种3型布鲁氏菌的全基因组中存在经典的毒力基因序列。

羊种布鲁氏菌生物3型的分离和鉴定

本实验对新疆某羊场小尾寒羊5只流产胎儿进行布鲁氏菌病原分离、鉴定,结果从5只流产胎儿胃内容物中均分离到羊种布鲁氏菌生物3型。表明新疆羊群中存在羊种布鲁氏菌生物3型病原。

一例羊种3型布鲁氏菌感染病例的实验室检测分析

目的通过对布鲁氏菌的血清学和病原学检测,为研究布鲁氏菌病的流行特征及防治措施提供实验依据。方法采集一例柳江区疑似布病病例的血液标本进行虎红平板凝聚试验(Rose Bengal Plane Test,RBPT)和试管凝聚试验(Standard Tube Agglutination Test,SAT),采用双相血培养瓶进行血液培养。结果血清RBPT初筛阳性,SAT效价为1∶1 600(++),从血液中分离出1株布鲁氏菌,经鉴定为羊种3型布鲁氏菌。结论该病例为实验室确诊的羊种3型布鲁氏菌感染病例,建议临床上对长期不明原因的发热者及时进行布鲁氏菌血清学检测和血液培养,早发现、早诊断、早治疗。

羊种布氏杆菌3型Omp25基因序列及其表达蛋白生物信息学分析

为进一步研究外膜蛋白Omp25的结构和功能,以羊种布氏杆菌3型青海省海晏县自然株为研究对象,通过基因的克隆测序,采用生物信息学方法对外膜蛋白Omp25基因及其编码的氨基酸序列的理化性质、分子结构、分子表面可能性、柔韧性、亲水性、抗原指数、B细胞抗原表位进行了详细分析。结果显示:羊种布氏杆菌3型Omp25分子一级结构的氨基酸序列的各项参数存在5段共同区段,其中59~74、93~112、182~202位氨基酸的各项生物信息学参数尤为突出,是其B细胞表位优势区的可能性很大。

羊布氏杆菌3型外膜蛋白Omp22基因的克隆及生物信息分析

为大量制备重组布氏杆菌外膜蛋白Omp22及其免疫原性和相关功能研究奠定基础,同时为布氏杆菌病的诊断、防治药物及疫苗研究提供参考,以羊种布氏杆菌3型青海省海晏县分离株为研究对象,对其外膜蛋白Omp22基因进行克隆,并利用相关软件系统对外膜蛋白Omp22的生物信息学进行分析。结果表明：在布氏杆菌Omp22基因两端加上BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,通过PCR方法获得海晏县分离羊种布氏杆菌3型菌株的Omp22基因,成功克隆入pMD19-T载体上。羊种布氏杆菌3型Omp22分子一级结构的氨基酸序列中存在4段可能的抗原表位区段,其中28～40aa、109～121aa和141～154aa的抗原指数和B细胞表位较高,成为抗原决定簇的可能性很大。

新疆牛羊布鲁氏菌流行株种及生物型鉴定

【目的】掌握新疆畜间布鲁氏菌病流行株的流行病学特征,为新疆制定切实可行的布鲁氏菌病综合性防控措施提供科学依据和技术支撑。【方法】应用传统分离病原方法从牛羊病料中获得疑似布鲁氏菌11株,应用分子生物学方法对分离菌株进行布鲁氏菌属与种型鉴定,应用常规生化试验对AMOS-PCR鉴定的羊种Brucella进行生物亚型鉴定。【结果】9株分离株均为布鲁氏菌,而且经AMOS-PCR分型方法鉴定均为羊种菌。进一步采用传统细菌分类鉴定,9株布鲁氏菌均为羊种生物3型。【结论】新疆近两年人感染布鲁氏菌的流行菌株为羊种生物3型,应用AMOS-PCR方法可以安全、快速对布鲁氏菌流行株进行种型鉴定而确定传染源,为新疆制定布鲁氏菌病的综合防制策略莫定基础。

内蒙古自治区呼伦贝尔地区羊种1型及3型布鲁菌感染的临床特征分析

目的了解内蒙古自治区呼伦贝尔地区羊种1型、3型布鲁菌感染致病后患者的临床特征。方法采用回顾性分析方法,收集2013年6月至2017年8月呼伦贝尔市人民医院收治的布鲁菌病患者的临床病历资料,选取其中血液细菌培养为布鲁菌阳性且经聚合酶链式反应(PCR)和AMOS-PCR方法进行菌种菌型鉴定的71例患者作为研究对象,根据鉴定结果分为羊种1型和羊种3型两组。比较两组患者的一般资料、流行病学特征、临床特征、实验室检查、并发症以及疗效情况。结果71例布鲁菌病患者中,羊种1型22例,其中男性16例、女性6例,年龄为(39.91±16.04)岁;羊种3型49例,其中男性34例、女性15例,年龄为(40.67±18.72)岁。两组间性别构成、年龄比较,差异均无统计学意义(χ^2=0.081,t=0.166,P均>0.05)。羊种1型患者生活在农区10例(45.5%)、牧区10例(45.5%)、城市2例(9.1%),羊种3型患者生活在农区40例(81.6%)、牧区7例(14.3%)、城市2例(4.1%),地区分布比较差异有统计学意义(χ^2=9.276,P<0.05)。羊种1型、3型患者出现睾丸肿痛症状比例[22.7%(5/22)、6.1%(3/49)]比较,差异有统计学意义(χ^2=4.187,P<0.05);其他临床特征比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。两组患者出现白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)减少,红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)升高情况比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。羊种1型、3型患者发生并发症例数分别为12例(54.5%)、14例(28.6%),组间比较差异有统计学意义(χ^2=4.413,P<0.05)。羊种1型患者治愈10例(45.5%)、好转12例(54.5%),羊种3型患者治愈34例(69.4%)、好转15例(30.6%),两组均无无效及复发患者,组间疗效比较差异有统计学意义(χ^2=3.690,P<0.05)。结论内蒙古自治区呼伦贝尔地区羊种1型、3型患者生活地区有差异,羊种1型患者易出现睾丸肿痛症状和布鲁菌病并发症。

重庆市首起羊种布鲁氏菌病暴发疫情的调查

目的阐述重庆市首起羊种布鲁氏菌病疫情的传染源、传播途径及处置过程。方法通过流行病学调查,收集病例的临床、实验室资料。同时收集畜间疫情资料。结果畜间共检疫316头羊,布病血清学阳性率为33.86%（107/316）。共发现8例布病感染病例,男性7例,女性1例,男女性别比为7∶1;年龄主要分布在22～62岁之间,中位数为50.5岁;职业分布兽医3例,圈舍卫生2例,饲养员、羊场管理员、饲养员家属各1例;均在该羊场从事生产、管理等工种,在该场工作时间最短4个月,最长2年。2例发病,从1例患者血液中分离出羊种布鲁氏菌3型。结论这是一起因人间密切接触羊种布鲁氏菌引起的布病疫情,应加强人群监测和畜间源头监管,进行健康教育和行为干预。

桐乡市一起因本地湖羊引起的布鲁菌病疫情调查

目的调查处置1例湖羊养殖人员感染布病的疫情,分离和鉴定布鲁菌,确认传染来源,为进一步控制布鲁菌病疫情提供依据。方法以患者所在的湖羊养殖场和全市其他规模羊养殖场从业人员和湖羊为调查对象。无菌采集人和羊的静脉血,分离血清进行虎红平板凝集实验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)检测及布鲁菌培养分型;开展流行病学调查,进行疫情处置。结果检测197名羊养殖场从业人员和5 598头湖羊,患者所在羊养殖场70头湖羊布病血清学阳性,并分离到7株羊种3型布鲁菌,与患者体内分离的菌型一致。按规范进行治疗,无害化处置布病阳性羊只。结论患者是因接触本地湖羊感染布病所致,应加强输入动物布病检疫,防止本地湖羊布病疫情的扩散。

中山市一起人间布鲁菌病家庭聚集疫情调查

目的查清中山市一起布鲁菌病(布病)疫情的感染来源和传播危险因素。方法对病例、共同暴露者、暴露羊只开展流行病学调查和布鲁菌相关项目检测,采用描述性流行病学方法对疫情资料进行分析。结果本次疫情报告2例确诊病例,为母子关系,年龄分别为69岁和37岁。2例病例分别于1月、5月发病,主要临床表现不同,病例1主要为骨关节和造血系统受损,突出症状为腰痛、贫血;病例2反复出现发热、畏寒、多汗。2例病例均有7年的山羊养殖史,经常在无防护措施下接触山羊及其产物。病例血清学检测结果为1∶200,布鲁菌型别鉴定为羊种3型。病家6名共同暴露者血清学检测结果为阴性。病家养殖的羊只血清标本检出阳性。结论本次疫情由羊种3型布鲁菌引起,频繁直接接触病羊及其排泄物、阴道分泌物、流产羊胎盘是疫情发生的危险因素。为减少类似事件发生,应充分发挥联防联控机制,提高源头防控,加强重点场所的检疫、监管和高风险暴露人群的健康教育。

浙江省桐乡市首例布鲁氏菌病原学诊断病例调查

目的分离和鉴定布鲁氏菌,提高对布鲁氏菌病(布病)的认识,为病例的诊断和治疗提供依据。方法采集浙江省桐乡市疑似布病患者血液标本,进行虎红平板凝集试验(rose-bengal plate agglutination test,RBPT)和试管凝集试验(standard tube agglutination test,SAT),血清学阳性者采血接种双相血培养瓶增菌培养,获得纯培养者进一步采用布鲁氏菌属特异性PCR(BCSP31-PCR)和布鲁氏菌种型特异性PCR(AMOS-PCR)进行属和种/型鉴定。对患者进行个案流行病学调查和规范治疗。结果患者血清SAT为1∶3200(++),从血液中分离出羊种布鲁氏菌3型。患者用利福平、多西环素等联合6周治疗后痊愈。结论该病例为羊种布鲁氏菌实验室确诊病例,建议临床上对长期不明原因发热者应及时进行血培养,早发现并规范治疗。