六妹羊肚菌子实体多肽分离纯化及抗氧化活性

采用碱提酸沉法获得六妹羊肚菌(Morchella sextelata)子实体蛋白质粗提物,以蛋白质酶解的水解度和粗多肽对DPPH自由基的清除率为指标,筛选蛋白酶进行酶解,所得粗多肽依次采用超滤法、DEAE-52纤维素层析法和Sephadex G-25层析法得到多肽,测定其抗氧化活性,通过二级质谱鉴定其氨基酸序列及相对分子质量,并测定不同温度、pH体外模拟胃液和肠液条件下多肽对DPPH自由基清除率的影响。结果表明:羊肚菌子实体蛋白质粗提物提取率为32.94%,其中蛋白质含量为78.3%;碱性蛋白酶酶解效果最好,纯化得到的SE-1对DPPH、ABTS和·OH自由基清除率分别为(86.7±1.75)%、(95.3±1.21)%和(80.6±1.35)%,具有较强的抗氧化活性;SE-1的氨基酸序列为Gly-Gly-Pro-Pro-Gly-Gly-Glu-Asp-Gly-Gly-Phe-Gly-Gly-Met,相对分子质量为1206;分别在25~55℃、pH4~8、体外模拟胃液和肠液消化处理2 h内,多肽对自由基的清除率较高。

羊肚菌子实体组织细胞的低温冻存与复苏萌发现象的初步观察

为保存新鲜羊肚菌子实体组织细胞并观察其复苏后的细胞萌发情况及菌丝早期萌发形态;对采集的野生新鲜羊肚菌子实体进行处理、超低温冷冻保藏,对超低温保藏后的组织细胞快速解冻后进行培养板内4℃萌发培养,倒置显微镜下观察并记录羊肚菌子实体组织细胞萌发现象,挑取非孢子萌发的、无污染的、符合羊肚菌菌丝形态的培养孔内菌丝进行扩大培养,通过羊肚菌通用抗原的ELISA检测及18 s序列测序比对鉴定分离物;结果显示分离得到M10H3、M10H4两株分离物是羊肚菌子实体构成细胞复苏萌发的羊肚菌菌丝。