一起因加工食用羊胎盘发现的布鲁氏菌病暴发疫情处置

采用布病个案调查表调查一起由加工食用羊胎盘而陆续发现的人间布鲁氏菌病(布病)暴发疫情,再根据调查线索通过“主动搜索”的方式进行可疑病例搜索调查和实验室采样检测,综合病例临床表现、流行病学调查以及实验室检测结果,确定本起疫情为布病暴发疫情,引起原因为加工、食用羊胎盘及日常饲养、配种病羊。疫情提示羊只买卖、饲养、附属物出售均需加强监管,降低布病发病风险。

响应面法优化超声辅助酶解制备藏系羊胎盘肽工艺及抗氧化能力分析

以藏系羊胎盘为原料,选取水解度、肽得率和抗氧化能力为指标,在蛋白酶种类筛选、双酶组合方案确定的基础上,通过单因素试验和响应面试验优化超声波辅助复合酶解制备羊胎盘肽的工艺条件,并分析其氨基酸组成和分子质量分布。结果表明,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶同步复合酶解效果优于其他蛋白酶组合,水解度和肽得率分别为37.24%和13.54%。响应面优化结果显示各因素对水解度影响的主次顺序为:超声时间>超声温度>酶解时间>超声功率;优化后的最优工艺参数为超声时间16.5 min、超声温度25.5 ℃、超声功率438 W、酶解时间4.9 h,该最优条件下的水解度为55.22%,肽得率为18.52%,抗氧化能力(Trolox当量)为1.08 mmol/L。藏系羊胎盘肽中富含谷氨酸、甘氨酸和天冬氨酸等,分子质量低于2 000 Da的肽比例为95.02%,绝大多数为小分子低聚寡肽。可见,超声波辅助酶解制备羊胎盘肽的工艺不仅能有效改善酶解效果,还能制得具有良好抗氧化能力的小分子肽。

羊胎盘活细胞素微量元素和氨基酸组成的分析

通过ICP和HPLC对羊胎盘活细胞素的微量元素和氨基酸组成进行了定量分析 ,证明它含有 14种微量元素 ,其中 8种是人体必需的微量元素 ;含有 16种氨基酸 ,其中必需氨基酸 7种 ,约占总氨基酸的 33 .5 % .表明羊胎盘活细胞素的有效成分种类齐全 ,含量高 ,具有良好的营养价值 ,值得进一步开发应用 .

羊胎盘免疫调节因子对^(60)Co-γ射线辐射损伤小鼠免疫功能影响的研究

目的:研究羊胎盘免疫调节因子对60Co-γ射线辐射损伤小鼠免疫功能的影响。方法:采用60Co-γ射线辐射致免疫损伤模型,MTT法检测羊胎盘免疫调节因子对ConA、LPS诱导的脾淋巴细胞的增殖效应,耳廓增重法检测迟发超敏反应(delayedtypehypersensitivity,DTH),酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedsorbentassay,ELISA)法检测血清IgG的生成能力。结果:羊胎盘免疫调节因子可显著促进脾淋巴细胞的增殖,提高小鼠DTH反应和血清IgG的生成。结论:羊胎盘免疫调节因子促进免疫损伤小鼠特异性免疫功能的恢复,提高小鼠抗辐射损伤的能力。

羊胎盘多肽的制备及其清除自由基能力的研究

利用黑曲霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌作为发酵羊胎盘菌种,筛选出黑曲霉作为发酵羊胎盘的菌株,制备羊胎盘活性肽.通过单因素试验研究了料液pH、碳源含量、发酵时间对制备羊胎盘抗氧化肽工艺的影响,在此基础上,以DPPH自由基的清除率为指标,通过响应面法优化得到了最佳发酵工艺条件为pH值4.61、葡萄糖添加量2.79％、发酵时间76.38h,此条件下的DPPH清除率为83.78％;对发酵液进行超滤处理得到6组分,其中60％的产物分子质量均＜10 000u,不同组分的抗氧化活性大小为分子质量为3 000～10 000u的产物高于分子质量＜3 000u的产物,并得出了发酵液中不同分子质量段的多肽含量分布曲线.

羊胎盘肽对小鼠非特异性免疫功能的影响

目的探讨羊胎盘肽对小鼠非特异性免疫功能的影响。方法采用60Coγ射线照射的方法建立免疫抑制小鼠动物模型,利用巨噬细胞吞噬鸡红细胞和小鼠碳粒廓清实验,评价羊胎盘肽对免疫抑制状态小鼠非特异性免疫功能的影响。结果羊胎盘肽有促进巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的作用(P<0.05),并能显著提高机体碳粒廓清的能力(P<0.01)。结论羊胎盘肽对小鼠具有一定非特异性免疫增强作用。

采用不同蛋白酶制备羊胎盘抗氧化肽的研究

选取羊胎盘为实验材料,以水解度、多肽含量和DPPH自由基清除率为考察指标,采用生物酶法对羊胎盘酶解制备抗氧化肽进行了研究。采用8种蛋白酶,在最优的酶解条件下对羊胎盘进行酶解制备抗氧化活性肽。结果表明,风味蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解产物对DPPH清除的IC50分别为0.6420、0.7120和0.6781mg/m L。说明该三种酶对羊胎盘酶解制备抗氧化肽的效果比较好。

羊胎盘提取剩余物发酵制备活性肽工艺及产物生物活性

为实现羊胎盘提取剩余物的高值化利用，该文以超速冻冻藏羊胎盘提取剩余物为原料，利用枯草芽孢杆菌对其进行生物降解制备生物活性肽。通过对发酵过程监控研究了发酵过程中蛋白酶活、产物的平均肽链长度、产物的抗氧化和免疫活性的变化，实现了可控制发酵羊胎盘提取剩余物制备免疫活性肽。研究结果表明：随着发酵时间的延长，蛋白酶活、水解度逐渐升高；平均肽链长度逐渐变小；产物的抗氧化活性和免疫活性均呈现先升高后降低的趋势。在发酵时间35 h下产物具有较好的抗氧化活性和免疫活性，产物的免疫活性与抗氧化活性均随浓度的增大而升高，发酵产物对淋巴细胞的刺激指数最高可达23.37%，发酵产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH：1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl ）自由基清除率为0.667 mg/mL。超滤结果表明：不同分子量组分的发酵液生物活性有较大差异，其中〉3～10 kDa组分的免疫活性最高，≤3 kDa 组分的抗氧化活性最高。各组分之间的生物活性与原样品相比不具有加和性但是具有明显的协同作用。研究结果为实现可控制发酵制备羊胎盘生物活性肽提供了参考。

羊胎盘提取残余物免疫肽制备工艺的优化

在羊胎盘提取功能活性物质后,测定残余物主要生化组分的基础上,以酶解免疫肽对小鼠脾细胞的单独刺激指数(SI)为评价指标,通过单因素优化、响应面法优化复合酶解羊胎盘提取残余物制备免疫活性肽的酶解工艺。结果显示:在酶添加量2 500 U/g蛋白,中性蛋白酶和风味蛋白酶复配比1.75∶1,酶解时间4 h,酶解温度45℃,p H 7.0和料液比1∶50(g∶m L)条件下,酶解产物的SI值达到0.261 2,较阳性对照增加494%。

羊胎盘免疫调节因子对小鼠体液免疫的影响

目的:探讨羊胎盘免疫调节因子对机体的体液免疫调节作用。方法:BALB/c小鼠为实验对象,MTT法测定脾B淋巴细胞的增殖,溶血空斑实验(PFC)测定IgM,酶联免疫吸附法(ELISA)测定体外培养B淋巴细胞培养上清IgG、体内血清抗体IgG。结果:羊胎盘免疫调节因子对免疫抑制小鼠分泌抗体能力具有显著改善(P<0.01),并具有剂量效应(P<0.01);直接作用于脾淋巴细胞,可显著促进细菌脂多糖诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖,显著提高脾B淋巴细胞产生抗体的能力(P<0.01),剂量效应不显著。结论:羊胎盘免疫调节因子能增强小鼠体液免疫功能,可促进免疫抑制小鼠的体液免疫能力恢复。

羊胎盘复方制剂对小白鼠免疫功能和缺氧耐受力的影响

目的以山羊胎盘为主要原料配制成胎盘复方制剂,研究其对小白鼠免疫功能与缺氧耐受力的影响。方法雌性小鼠40只随机等量分成羊胎盘复方制剂高(1 g/kg.体重)、中(0.5 g/kg.体重)、低(0.1 g/kg.体重)3个剂量组和1个对照组(生理盐水),灌胃30 d后测定各指标(免疫器官指数、耳重差、中毒与缺氧的存活时间)。结果免疫功能试验中,与对照组相比,高、低剂量组有显著差异(P<0.05),中剂量组有极显著水平(P<0.01)。小鼠脾脏指数与对照组相比,高、低剂量组能显著影响小鼠的脾脏指数(P<0.05)。迟发型变态反应试验中只有高剂量组耳重差与对照组耳重差相比差异极显著(P<0.01);在缺氧耐受力试验中,除中毒存活试验的中剂量组存活时间与对照组相比差异不显著(P>0.05)外,其它剂量组存活时间与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。结论羊胎盘复方制剂具有提高小鼠机体免疫功能和增强机体缺氧耐受力的作用。

羊胎盘免疫调节因子对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的探讨羊胎盘免疫调节因子(GPIF)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响。方法采用巨噬细胞体外培养的方法。分3个实验组,对腹腔巨噬细胞分别给予0 .0 5 ,0 .1和0 .5mg/mlGPIF进行体外培养,培养结束后,测定腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力、对溴化四唑蓝(MTT)的还原能力,以及分泌一氧化氮(NO)和白细胞介素 1(IL-1)的量。结果与对照组比较,各浓度GPIF均有促进腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力作用,且能显著提高腹腔巨噬细胞对MTT的还原能力,增加NO和IL-1的分泌量(P <0 .0 5 )。

羊胎盘免疫活性小分子肽的分离纯化

目的:从羊胎盘中分离纯化出具有免疫活性的小分子肽。方法:采用常规方法制备羊胎盘超滤液,利用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)对羊胎盘提取液进行分离纯化及纯度分析,并利用E-玫瑰花环实验对各组分进行免疫活性评价,利用Edman降解法对其组分进行N端测序。结果:利用RP-HPLC工艺成功分离出纯度较高的3种小分子肽,并确定其中两者具有免疫活性;对活性较强的肽进行测序、检索,结果表明为未知组分。结论:RP-HPLC是分离、分析活性肽类较理想的手段之一,并证实了羊胎盘含有具有免疫活性的小分子肽。

牛和羊胎盘肽的制备及其生物活性的研究

目的探索一种新型的免疫调节剂,充分利用动物胎盘。方法利用超滤法从牛和羊胎盘中提取胎盘肽,采用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE法测定其相对分子质量;利用紫外光扫描其最大吸收峰;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用。结果从牛和羊胎盘中成功提取出了胎盘肽,其相对分子质量分别为4 785和4 386;其最大吸收峰分别为210.5和225.4 nm;牛和羊胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高,其中牛胎盘肽以1∶1×103、1∶1×1042组吸收度明显高于抑制组(P<0.05);羊胎盘肽以1∶1×102、1∶1×103和1∶1×1043组效果最为明显(P<0.01)。结论牛和羊胎盘中含有的胎盘肽可成功提取出来,其可明显提高淋巴细胞的转化率,是一种较为理想的免疫调节剂。

双酶水解法制备羊胎盘活性肽

采用现代生物酶解技术制备羊胎盘生物活性肽 ,以水解度 (DH)和酸溶性肽得率(YASP)为指标 ,在单酶水解的基础上探索更加有效的新工艺———双酶水解工艺。实验确定了木瓜蛋白酶 (Papain)与胰蛋白酶 (Trypsin)的等活力混合酶为水解羊胎盘的最佳双酶组合 ,其最佳酶解工艺条件为 :pH7 0、温度 5 2℃、酶活添加量 3 0 0 0u/ g(料 )、底物浓度 10 %、水解时间 3h ,酶解前最佳热处理条件为沸水浴 15min。

羊胎盘营养液的制备及其在化妆品中的应用

以妊娠早期羊胎盘为原料，制备了一种新型的化妆品天然添加剂，它不仅含有丰富的氨基酸、多肽，而且含有多种促进、改善组织新陈代谢的酶类。用其配成的营养性膏霜，具有明显的护肤、润肤和营养皮肤的功能，可起到延缓皮肤衰老的作用。

羊胎盘免疫调节因子E花环活性评价的优化

目的改进E花环实验方法,运用改进的实验方法评价羊胎盘免疫调节因子(GPIF)生物活性效果。方法2次将分离的T细胞(猪、山羊胸腺及其外周血和人外周血T细胞)45℃30min灭活,分别加入不同稀释度的GPIF和神经氨酸酶处理的绵羊血红细胞(SRBC),以观察在抑制(病理)条件下,GPIF对T细胞生物活性的影响。结果猪、山羊胸腺及其外周血和人外周血T细胞的E花环实验筛选显示猪胸腺效果最好,其阳性对照组与阴性对照组比差异显著(P<0.05),实验组与阴性对照组比差异极其显著(P<0.01),实验组在0.5mg/mL质量浓度与阴性对照组差异极其显著(P<0.01);使神经氨酸酶处理后的SRBCE花环结环率提高了7%左右。结论经过改进的E花环评价GPIF生物活性具有方法简便、可操作性强、重复性好的特点;实验室研制的GPIF对增强T细胞活性具有剂量效应。

超声波辅助复合酶法制备藏系绵羊胎盘肽的工艺优化

为实现羊胎盘深度开发利用,以肽得率和水解度为指标,筛选确定多种蛋白酶复合水解的最佳组合方案,并利用响应面法优化超声波辅助复合酶法水解制备羊胎盘肽的预处理参数。结果表明,响应面法优化后的超声预处理参数为超声时间18 min、温度28℃和功率420 W,超声波预处理后羊胎盘经木瓜蛋白酶和风味酶联合同步复合酶解制备羊胎盘肽的肽得率为39.89%,水解度为21.78%;该最优条件下平均肽链长度为4.59,分子量约500~600。结论:超声波辅助复合酶法制备藏系绵羊胎盘肽的工艺可行且有效。

超声提取羊胎盘水溶性活性蛋白

以淋巴细胞增殖率为主要指标,在单因素的基础上,采用响应面法优化了超声提取羊胎盘中水溶性活性蛋白质的工艺,建立了二次多项模型,研究超声功率、固液比、超声时间3个因素及其交互作用对提取工艺的影响。试验结果表明,对蛋白质提取率的影响次序为超声功率>固液比>超声时间;最优工艺参数是:超声功率为300W,固液比为1:30,超声时间25min,淋巴细胞增殖率达53.17%。