羊脱细胞真皮基质微粒异种移植的动物研究

目的:探讨羊脱细胞真皮基质微粒与自体微粒混合移植对创面愈合质量的影响。方法:在30只Wistar大鼠背部制作4.0 cm×4.0 cm大小的全层皮肤缺损创面,并将之随机分为3组,A组以自体微粒皮+羊脱细胞真皮基质微粒按5:1的比例混合,涂布于创面,覆盖交联型羊脱细胞真皮基质;B组以自体微粒皮+羊脱细胞真皮基质微粒按2:1的比例混合,涂布于创面,覆盖交联型羊脱细胞真皮基质;C组以单纯的自体微粒皮涂布于创面,覆盖异体皮。连续4周观察大鼠创面愈合的进展和局部反应,并对比3组的创面收缩率。结果:3组的创面愈合时间基本相仿,3组自体微粒皮扩展时间和速率基本一致。A组羊脱细胞真皮基质微粒被分散包裹,逐渐与周边组织融合,有新生血管长入,基质渐被取代,与自体微粒皮相混合,肌肉表面形成点状或斑片状的真皮组织,愈后创面收缩率最低。B组羊脱细胞真皮基质含量较高,部分基质被包裹难以吸收,虽也有少量新血管长入,但不利于基质的降解,后期基质微粒仍与周边组织游离,影响创面的愈合,肌肉表面形成较少的点状或斑片状真皮组织,愈后创面收缩率较大。C组愈合较快,愈后皮下缺少真皮组织,创面收缩率最大。结论:自体微粒与羊脱细胞真皮基质微粒按5:1的比例混合移植,有利于真皮组织的再生,可使创面愈合质量提高。

羊脱细胞真皮基质在体内转归的动物实验研究

目的了解羊脱细胞真皮基质(ADM)在受体体内的转归情况。方法健康雄性绵羊活杀扒皮、拔毛,反削为断层皮片,经胰蛋白酶溶液消化、TritonX-100溶液振荡清洗制成符合组织学要求的ADM,一部分置于0.04%的戊二醛溶液中制成交联型ADM,另一部分不做交联。将40只大白鼠随机分为交联组与未交联组,各组20只。交联组每只大白鼠背脊位置设计切口、沿游离出的组织间隙包埋入交联型ADM,未交联组用同样的方法包埋入未交联型ADM。术后对比观察交联与未交联组术区的外观变化、埋植物及周围组织形态结构的变化。结果埋植羊交联和未交联型ADM后,大鼠埋植区均无明显的炎症反应,未出现明显的排斥反应,交联型和未交联型羊ADM被周围组织包裹,包裹组织血运正常,无异常分泌物,镜下交联型和未交联型羊ADM周围均被炎性细胞浸润,以单核细胞和中性粒细胞为主,羊ADM被周围组织吸收逐渐缩小直至消失。结论羊ADM在体内转归过程中无明显的排斥反应,显示了较低的免疫原性。

肝素化羊脱细胞真皮基质对深Ⅱ度烧伤创面组织中血管内皮生长因子和层粘连蛋白的影响

目的研究肝素化羊脱细胞真皮基质(ADM)促进深Ⅱ度烧伤创面愈合的作用机制。方法制作大鼠深Ⅱ度烧伤模型,随机分为碘伏纱布组、猪ADM组、羊ADM组和肝素化羊ADM组,每组40只。在伤后不同时间段,观察各组创面愈合率,同时在各个时间段处死大鼠8只,取创面组织标本做RT-qPCR和蛋白质印迹法检测各组创面组织中血管内皮生长因子(VEGF)和层粘连蛋白(LN)的mRNA与蛋白表达情况。对数据行单因素方差分析和t检验。结果肝素化羊ADM组深Ⅱ度创面的愈合率优于碘伏纱布组。RT-qPCR检测发现,VEGF的mRNA在各组伤后3 d的创面组织中表达较对照组高,各组间的比较发现,伤后7 d,肝素化羊ADM组的VEGF的mRNA表达量明显高于碘伏纱布组(t=80. 83,P <0. 05),羊ADM组和猪ADM组在伤后7 d也较碘伏纱布组的表达量高(t=60. 80、53. 42,P值均小于0. 05);蛋白质印迹法检测肝素化羊ADM组伤后3 d时VEGF蛋白表达量较多,随后便逐渐减少,伤后21 d时蛋白表达较少。伤后3 d,碘伏纱布组LN在创面的表达明显下降,在之后的治疗过程中,LN的表达逐渐恢复,伤后14 d的表达量明显高于伤后3 d(t=19. 5,P <0. 001),伤后21、28 d的表达量与伤后14 d相差不明显。蛋白质印迹法检测发现肝素化羊ADM组LN在伤后3 d便开始出现表达量逐渐增多,伤后21 d时出现蛋白表达较多。结论肝素化羊ADM能够保护创面及促进创面组织中VEGF和LN的表达,进而促进创面愈合。

微孔化羊ADM复合hUCMSC促进创面修复的机制研究

目的探讨微孔化羊脱细胞真皮基质(ADM)复合人脐带间充质干细胞(hUCMSC)促进全层损伤皮肤创面愈合的治疗机制。方法将hUCMSC种植于微孔化羊ADM上共培养,形成复合生物敷料。选用72只裸鼠制作成皮肤全层损伤模型,按随机数字表法分为3组,每组24只,hUCMSC种植于微孔化羊ADM上治疗全层损伤创面组(hUCMSC+微孔化羊ADM组);羊ADM治疗全层损伤组(羊ADM组);碘伏纱布治疗全层损伤创面组(碘伏纱布组)。术后14、21、28 d检测各组裸鼠创面愈合率,运用qRT-PCR技术检测创面组织中Bax和Bcl-2的mRNA的表达,免疫组织化学染色检测创面愈合相关蛋白细胞胶原蛋白Ⅰ和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。数据比较采用单因素方差分析和t检验。结果术后14 d,hUCMSC+微孔化羊ADM组的愈合率为(65.34±14.72)%,明显高于碘伏纱布组[(37.54±10.21)%],也高于羊ADM组[(49.08±11.16)%],差异均有统计学意义(t=19.52、14.72,P<0.05)。随着损伤创面的逐步愈合,术后28 d,hUCMSC+微孔化羊ADM组的愈合率为(98.63±15.41)%,明显高于羊ADM组[(81.74±16.27)%]和碘伏纱布组[(63.47±14.80)%],差异均有统计意义(t=-16.42、20.35,P<0.05)。Bax在hUCMSC+微孔化羊ADM组的创面组织中的表达显著降低,尤其在术后21 d的表达量为0.25±0.06,明显低于碘伏纱布组(0.53±0.16)和羊ADM组(0.41±0.12),差异均有统计学意义(t=3.52、-2.83,P<0.05)。Bcl-2在hUCMSC+微孔化羊ADM组的表达显著高于其他2组,尤其是在术后21 d的表达量为0.63±0.19,明显高于碘伏纱布组(0.34±0.09)和羊ADM组(0.46±0.13),差异均有统计学意义(t=5.31、-6.07,P<0.05)。免疫组织化学技术检测发现hUCMSC+微孔化羊ADM组胶原蛋白Ⅰ和VEGF的表达深棕色细胞虽然比羊ADM组和碘伏纱布组稍微有所增多,但是效果并不显著。结论hUCMSC+微孔化羊ADM复合敷料,通过携带hUCMSC更能促进皮肤全层损伤的愈合并减少凋亡细胞的产生。