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人羊膜间充质干细胞对松木屑烟雾溶液染毒大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖、凋亡及炎症因子影响的研究
1
作者 朱秀连 崔培 +6 位作者 詹球 李榕生 蒙凤姬 朱富军 杨福旺 童亚林 辛海明 《解放军医学院学报》 CAS 2024年第5期528-534,共7页
背景烟雾吸入性肺损伤在烧伤患者中较为常见,吸入的有毒气体、颗粒等易引起急性肺损伤(acute lung injury,ALI),目前无特异性治疗方法。目的研究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对松木屑烟雾溶液染... 背景烟雾吸入性肺损伤在烧伤患者中较为常见,吸入的有毒气体、颗粒等易引起急性肺损伤(acute lung injury,ALI),目前无特异性治疗方法。目的研究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对松木屑烟雾溶液染毒大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar typeⅡepithelial cells,AT-Ⅱ)增殖、凋亡及炎症因子的影响。方法采用酶消化法分离培养hAMSCs和AT-Ⅱ,采用流式细胞术和免疫荧光分别鉴定hAMSCs和AT-Ⅱ;松木屑烟雾溶液染毒AT-Ⅱ复制烟雾诱导的细胞损伤。实验细胞分为对照组(无血清DMEM/F12)、致伤组(0.75‰松木屑烟雾溶液染毒)和治疗组(0.75‰松木屑烟雾溶液染毒,hAMSCs与AT-Ⅱ共培养)。采用CCK-8检测细胞的增殖活性;Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;Elisa检测炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6和IL-10的表达。结果与对照组比较,致伤组AT-Ⅱ的活性降低(P<0.01),经hAMSCs治疗后,与致伤组比较,AT-Ⅱ细胞活性增加(P<0.01);致伤组细胞的凋亡率在12 h和24 h均增加(P<0.01),hAMSCs治疗后细胞凋亡率降低(P<0.01);细胞致伤后炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的含量增加(P<0.05),经hAMSCs共培养12 h和24 h后,促炎因子TNF-α和IL-6的表达均下调(P<0.05),IL-10含量增加(P<0.05)。结论hAMSCs可以促进松木屑烟雾溶液诱导的AT-Ⅱ增殖和抑制细胞凋亡,可能与调节炎症因子的表达有关,为探究hAMSCs治疗烟雾引起的急性肺损伤提供理论依据。 展开更多
关键词 羊膜间充质干细胞 肺泡Ⅱ型上皮细胞 增殖 凋亡 炎症因子
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羊膜上皮细胞促进共培养神经干细胞存活及分化 被引量:6
2
作者 孟晓婷 陈东 +1 位作者 刘佳梅 路来金 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期184-187,F002,共5页
目的 :探讨羊膜上皮细胞是否能在体外促进胚胎脑神经干细胞的存活及分化。方法 :Neurosphere法分离、克隆 E1 2~ 1 4 d Wistar大鼠脑组织的神经干细胞 ,同时从羊膜中分离羊膜上皮细胞。将神经干细胞与羊膜上皮细胞在不同条件下共培养 ... 目的 :探讨羊膜上皮细胞是否能在体外促进胚胎脑神经干细胞的存活及分化。方法 :Neurosphere法分离、克隆 E1 2~ 1 4 d Wistar大鼠脑组织的神经干细胞 ,同时从羊膜中分离羊膜上皮细胞。将神经干细胞与羊膜上皮细胞在不同条件下共培养 ,通过免疫组织化学法对羊膜上皮细胞及神经干细胞的分化进行检测。结果 :羊膜上皮细胞表达神经干细胞及神经元、神经胶质细胞表面抗原 ;与羊膜上皮细胞共培养的神经干细胞克隆的分化细胞总数、分化为神经元的百分率及神经元初级突起长度明显高于对照组。结论 :羊膜上皮细胞与神经干细胞具有一定的同源性 ;羊膜上皮细胞能促进体外培养的神经干细胞的分化 ,且主要向神经元分化 ,并促进神经元初级突起的生长。 展开更多
关键词 神经干细胞 羊膜 上皮细胞 细胞分化
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人羊膜上皮细胞的干细胞特性 被引量:7
3
作者 金玲 陈剑 +3 位作者 吴静 徐锦堂 周清 刘小勇 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期3555-3558,共4页
背景:研究发现人羊膜上皮细胞具有类似胚胎干细胞或多能干细胞的多向分化潜能,说明其可能是未来组织工程重建的一种新型种子细胞。目的:研究体外培养的人羊膜上皮细胞的干细胞特性。方法:取足月剖宫产的人羊膜组织,经酶消化法和差异黏... 背景:研究发现人羊膜上皮细胞具有类似胚胎干细胞或多能干细胞的多向分化潜能,说明其可能是未来组织工程重建的一种新型种子细胞。目的:研究体外培养的人羊膜上皮细胞的干细胞特性。方法:取足月剖宫产的人羊膜组织,经酶消化法和差异黏附法获得纯度高的人羊膜上皮细胞,接种于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行原代和传代培养,用免疫荧光法和流式细胞仪检测法检测人羊膜上皮细胞表面胚胎干细胞的表面标记蛋白OCT-4和干细胞表面分子标记CD29、CD34、CD44、CD45、CD105的表达。结果与结论:人羊膜上皮细胞在体外培养条件下呈上皮细胞特有的铺路石样外观,其胞浆中有OCT-4免疫荧光表达,其干细胞标记分子CD29、CD34的表达是阳性,但干细胞标记分子CD44、CD45、CD105的表达为阴性。结果表明人羊膜上皮细胞具有干细胞的某些特性,其可能是未来组织工程重建的一种新型种子细胞。 展开更多
关键词 羊膜上皮细胞 细胞培养 胚胎干细胞 OCT-4 CD29 CD34
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经角膜基质细胞诱导的大鼠骨髓间充质干细胞在人羊膜上构建角膜上皮移植片 被引量:8
4
作者 戢维颖 蔡莉 +1 位作者 惠延年 姜廷帅 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第4期683-686,共4页
目的:研究将骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)诱导分化后在羊膜表面培养构建角膜上皮移植片的可行性。方法:取SD大鼠骨髓间充质干细胞和角膜基质细胞,分别培养并传2代后进行共培养,取共培养7d后的MSC覆载于新鲜人羊膜,再培... 目的:研究将骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)诱导分化后在羊膜表面培养构建角膜上皮移植片的可行性。方法:取SD大鼠骨髓间充质干细胞和角膜基质细胞,分别培养并传2代后进行共培养,取共培养7d后的MSC覆载于新鲜人羊膜,再培养7d。对MSC及诱导后MSC进行免疫荧光染色和扫描电镜检查;对覆载细胞的羊膜进行HE染色及免疫荧光染色。结果:MSC在体外培养条件下贴壁生长,免疫荧光染色CD29和CD44阳性,CK12阴性。经角膜基质细胞诱导分化后,MSC细胞CK12染色转为阳性。诱导后MSC接种到羊膜表面,迅速贴壁生长,组织学特性无明显改变,CK12染色仍为阳性。结论:经角膜基质细胞诱导的MSC表现出角膜上皮细胞特征,在羊膜上生长后保持不变。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 上皮细胞 羊膜 角膜上皮移植片
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兔骨髓间充质干细胞及人羊膜上皮细胞移植治疗兔角膜缘干细胞缺损的研究 被引量:7
5
作者 卢建民 吕秀丽 马翔 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期786-792,共7页
背景角膜缘干细胞缺乏可引起致盲性眼病,但传统的治疗方法疗效欠佳。最近的研究表明,骨髓间充质干细胞(BMSCs)和人羊膜上皮细胞(AECs)有分化成多种细胞的能力,但其对角膜缘于细胞缺乏的疗效仍有待研究和评价。目的观察和对比兔BM... 背景角膜缘干细胞缺乏可引起致盲性眼病,但传统的治疗方法疗效欠佳。最近的研究表明,骨髓间充质干细胞(BMSCs)和人羊膜上皮细胞(AECs)有分化成多种细胞的能力,但其对角膜缘于细胞缺乏的疗效仍有待研究和评价。目的观察和对比兔BMSCs和人AECs移植治疗兔角膜缘干细胞缺损的治疗效果。方法将18只新西兰白兔采用随机数字表法分为羊膜基质(AS)移植组、兔BMSCs移植组和人AECs移植组,每组6只。将浸有NaOH溶液的滤纸贴附于角膜表面建立碱烧伤角膜缘干细胞缺损的动物模型。抽取兔髂窝处骨髓并收集人胎盘组织分别分离、制备兔BMSCs和人AECs,通过密度梯度离心加贴壁培养法及胰蛋白酶多次分步消化法获取兔BMSCs和人AECs,采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法对培养细胞进行鉴定,再接种于人去上皮AS上,按照动物的分组分别将上述材料缝合至动物模型的角膜表面。术后28d,对各组动物的角膜新生血管(CNV)评分以及角膜混浊度评分进行对比,对角膜组织行组织病理学检查并针对角膜上皮细胞特异性标记物细胞角蛋白3(CK3)行免疫组织化学染色。结果第3代兔BMSCs接种于AS载体上12h后贴附生长,第1代人AECs接种于AS载体上48h后呈单层膜状生长,传代细胞经RT—PCR鉴定符合目标细胞的特征。兔BMSCs移植组术后28d,免疫组织化学染色结果显示,兔BMSCs移植组和人AECs移植组的角膜表面细胞CK3均呈阳性表达,而AS组CK3表达阴性。与AS移植组比较,兔BMSCs移植组和人AECs移植组CNV评分以及角膜混浊度评分明显降低,差异均有统计学意义(BMSCs:Z=-2.983,P=0.003;Z=-2.844,P=0.004;AECs:Z=-2.817,P=0.005;Z=-2.041,P=0.041)。组织病理学检查显示,AS组兔角膜组织有较多的炎性细胞生长,胶原纤维排列紊乱。兔BMSCs组术后角膜表层形成了角膜上皮样的复层结构,无明显杯状细胞,角膜基质内无新生血管生长,炎性细胞减少,胶原纤维排列更加规则,且兔BMSCs移植组角膜透明度明显优于人AECs移植组,差异有统计学意义(Z=-2.091,P=0.037),而2组间CNV评分的差异无统计学意义(Z=-0.267,P=0.789)。结论移植至兔角膜缘干细胞缺损角膜表面的兔BMSCs和人AECs均能分化为角膜上皮细胞样细胞,可抑制CNV,减轻角膜混浊。在改善角膜透明度方面,兔BMSCs优于人AECs。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 羊膜上皮细胞 角膜缘干细胞 角膜新生血管 干细胞移植
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羊膜上皮细胞的体外培养及干细胞特性研究 被引量:5
6
作者 耿娟娟 崔勇 邱书奇 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第2期172-174,共3页
目的:体外分离培养人羊膜上皮细胞(hAECS)并探讨其生物学特性。方法:取足月产胎儿胎盘,无菌条件下将胎盘的羊膜层与绒毛膜层分离。将洗净的羊膜组织用眼科剪剪成约1mm×1mm大小,加入0.05%的含有0.53mMEDTA4Na的胰酶制备羊膜上皮细... 目的:体外分离培养人羊膜上皮细胞(hAECS)并探讨其生物学特性。方法:取足月产胎儿胎盘,无菌条件下将胎盘的羊膜层与绒毛膜层分离。将洗净的羊膜组织用眼科剪剪成约1mm×1mm大小,加入0.05%的含有0.53mMEDTA4Na的胰酶制备羊膜上皮细胞并进行培养。用免疫荧光、Westernblot等方法检测干细胞相关表面标记物(0CT-4、Nanog、SSEA-4)等的表达情况。结果:根据免疫荧光组织化学,Westernblot的结果显示,羊膜上皮细胞0CT-4、Nanog、ssea-4、Nestin表达阳性。结论:羊膜上皮细胞表达类似胚胎干细胞的表面标志物,可以作为干细胞的新来源。 展开更多
关键词 羊膜 上皮细胞 干细胞 生物学特性
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人羊膜间充质干细胞体外构建组织工程角膜上皮层的实验研究 被引量:3
7
作者 肖盼 陈剑 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期991-995,共5页
背景目前角膜移植手术是治疗严重角膜病变的主要方法,角膜供体来源的匮乏限制该疗法的应用。组织工程角膜为角膜疾病的治疗开辟了新的途径。目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)构建组织工程角膜上皮层的可能性。方法新鲜羊膜组织剪... 背景目前角膜移植手术是治疗严重角膜病变的主要方法,角膜供体来源的匮乏限制该疗法的应用。组织工程角膜为角膜疾病的治疗开辟了新的途径。目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)构建组织工程角膜上皮层的可能性。方法新鲜羊膜组织剪成6cm×6cm大小的组织块后用胰蛋白酶+EDTA消化液消化,将人羊膜上皮细胞(AECs)刮除干净,然后将羊膜组织剪碎,用胶原酶Ⅱ进行消化,分离原代hAMSCs并进行培养。分离新西兰白兔的角膜基质片后按随机数字表法分为2个组,实验组将培养至第3代的hAMSCs以1×10^5/ml的密度种植于去角膜上皮细胞的兔角膜基质片上进行培养,空白对照组为不种植细胞的空白角膜基质片。待细胞达80%~90%融合时再将兔角膜基质片移至插入式培养皿中进行气液界面诱导分化培养,培养至14d时将兔角膜基质片在质量分数4%多聚甲醛中固定,制备组织切片,行苏木精一伊红染色,观察兔角膜基质片的形态。采用免疫组织化学染色和免疫荧光技术检测兔角膜基质片上诱导分化的hAMSCs中细胞角蛋白3(CK3)和CK12的表达。结果实验组hAMSCs种植于去角膜上皮细胞的兔角膜基质片上气液界面培养14d后可形成3~5层的复层细胞,可见兔角膜基底膜的hAMSCs细胞核呈椭圆形,表层的hAMSCs细胞核呈长梭形,形态与正常角膜上皮层相似;而空白对照组兔角膜基质上无细胞生长。免疫组织化学染色显示兔角膜基底膜上的hAMSCs对CK3、CK12呈阳性反应,为细胞质中棕黄色染色,而阴性对照组未见CK3、CK12染色。免疫荧光检测显示兔角膜基底膜上的hAMSCs细胞质中可见CK3、CK12呈绿色荧光,而阴性对照片细胞质荧光缺失。结论hAMSCs在兔角膜基质片气液界面上可成功诱导分化为角膜样上皮细胞。 展开更多
关键词 羊膜 间充质干细胞 细胞培养 组织工程 角膜上皮 分化
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生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植在难治性翼状胬肉中的疗效研究 被引量:4
8
作者 荣瑜 童翀 +2 位作者 汤代文 罗建勋 程海利 《临床眼科杂志》 2011年第4期355-356,共2页
目的探讨生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植术在治疗难治性翼状胬肉中的疗效。方法对31例(31只眼)难治性翼状胬肉患者实施了生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植术,术后随访3~8个月。结果植片无排斥反应发生,术后2周左右溶解吸收... 目的探讨生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植术在治疗难治性翼状胬肉中的疗效。方法对31例(31只眼)难治性翼状胬肉患者实施了生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植术,术后随访3~8个月。结果植片无排斥反应发生,术后2周左右溶解吸收,角巩膜创面修复好、光滑。无1例复发。结论生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植术对难治性翼状胬肉是一个简易、安全、有效的手术方式。 展开更多
关键词 生物羊膜 角膜缘上皮干细胞 移植 难治性翼状胬肉
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羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞构建组织工程皮肤 被引量:2
9
作者 徐彪 李芳 +5 位作者 孙青 许云云 赵娟 梁含思 马树立 陈永珍 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第41期7213-7220,共8页
背景:由于人胎盘来源的间充质干细胞具有多方面的优点,近年来已成为干细胞研究的热点。目的:分析鉴定羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞的生物学特性,探讨其作为皮肤种子细胞在三维气液培养构建组织工程皮肤中的应用情况。方法:用胰酶胶... 背景:由于人胎盘来源的间充质干细胞具有多方面的优点,近年来已成为干细胞研究的热点。目的:分析鉴定羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞的生物学特性,探讨其作为皮肤种子细胞在三维气液培养构建组织工程皮肤中的应用情况。方法:用胰酶胶原酶多步消化法获取羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞,通过流式细胞术、反转录-聚合酶链反应和免疫荧光染色技术,鉴定两种细胞的表面分子标记、干细胞特性、与皮肤角质形成细胞的相似性,并利用两种细胞为种子细胞以鼠Ⅰ型胶原为基质进行三维气液培养。结果与结论:①流式细胞术检测体外培养羊膜间充质干细胞和羊膜上皮细胞均高表达CD90、CD73、CD105,不表达造血干细胞标志CD34以及MHC-Ⅱ类分子HLA-DR。②反转录-聚合酶链反应检测到羊膜间充质干细胞表达干细胞特性基因CMCY和NANOG,羊膜上皮细胞表达干细胞特性基因CMCY和KLF4,两种细胞均有干细胞特性。③反转录-聚合酶链反应检测羊膜间充质干细胞表达皮肤角质形成细胞特性基因K19、β1-integrin、K8,羊膜上皮细胞表达K19、β1-integrin、K5、K8,免疫荧光染色见羊膜上皮细胞表达与角质形成细胞增殖相关的的特性蛋白K14,说明羊膜上皮细胞与皮肤角质形成细胞更具相似性,在特定条件下更易于分化为皮肤角质形成细胞。④利用两种细胞成功构建组织工程皮肤,苏木精-伊红染色切片显示其具有一定的皮肤结构,且羊膜上皮细胞发生了初步分化。以上结果说明羊膜间充质干细胞与羊膜上皮细胞通过三维培养构建人皮肤组织是可行的。 展开更多
关键词 组织构建 皮肤组织构建 皮肤黏膜组织构建 羊膜间充质干细胞 羊膜上皮细胞 组织工程皮肤 流式细胞 反转录聚合酶链式反应 免疫荧光染色 其他基金
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人羊膜上皮干细胞对脓毒症患者血清诱导RAW264.7细胞炎症状态的影响 被引量:1
10
作者 张斌 李俊杰 +3 位作者 刘善收 虎晓岷 黄杨 尹文 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期778-782,I0002,共6页
目的评估人羊膜上皮干细胞分泌的细胞因子对脓毒症患者血清刺激巨噬细胞系RAW264.7炎症状态的影响,为人羊膜上皮干细胞在治疗炎症相关疾病的临床应用提供理论基础。方法通过机械法联合胰酶消化法分离人羊膜上皮干细胞,观察其细胞形... 目的评估人羊膜上皮干细胞分泌的细胞因子对脓毒症患者血清刺激巨噬细胞系RAW264.7炎症状态的影响,为人羊膜上皮干细胞在治疗炎症相关疾病的临床应用提供理论基础。方法通过机械法联合胰酶消化法分离人羊膜上皮干细胞,观察其细胞形态及增殖活力,用流式细胞技术对其干细胞标记物进行鉴定,同时评估其多向分化潜能。最后收集人羊膜上皮干细胞条件培养基作用于经脓毒症患者血清刺激的RAW264.7细胞,实时定量多聚酶链反应(RT—PCR)检测各组细胞经典激活的巨噬细胞(M1macrophage)相关的促炎基因及旁路活化的巨噬细胞(M2macrophage)相关的抑炎基因表达情况;同时用免疫荧光检测各组RAW264.7细胞经典激活的巨噬细胞M1、M2相关蛋白表达情况。结果①人羊膜上皮干细胞呈典型的鹅卵石样,细胞倍增时间约为3d。②人羊膜上皮干细胞表达间充质干细胞标记物CD29、CD90、CDl05,胚胎干细胞标记物SSEA-3、SSEA-4;不表达内皮祖细胞标记CD31,造血干细胞标记CD34,免疫标记物HLA—DR。人羊膜上皮干细胞具有良好的成骨和成脂分化能力。③与对照组相比,脓毒症患者血清能激活巨噬细胞M1相关促炎基因TNF-α、CCR7、IL-6的表达,而人羊膜上皮干细胞条件培养基可以促进脓毒症患者血清诱导RAW264.7细胞抑炎基因Arg-1、CD206和IL-10的表达。④免疫荧光实验表明,脓毒症患者血清能激活巨噬细胞M1相关蛋白TNF-α、CCR7的表达,而人羊膜上皮干细胞条件培养基可以促进脓毒症患者血清诱导巨噬细胞M2相关蛋白的Arg-1和CD206的表达。结论人羊膜上皮干细胞可以促进脓毒症患者血清诱导RAW264.7细胞M1型向M2型分化。 展开更多
关键词 羊膜上皮干细胞 脓毒症 血清 M1型巨噬细胞 M2型巨噬细胞
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与羊膜上皮细胞共培养对羊膜间充质干细胞生物学特性的影响 被引量:3
11
作者 冉黎婧 曾云 +7 位作者 王少春 张递思 依香为 洪敏 李少遊 董坚 杜明钰 史明霞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期574-581,共8页
目的:研究与羊膜上皮细胞(amniotic epithelial cells,AEC)共培养对羊膜间充质干细胞(amniotic mesenchymal stem cells,AMSC)生物学特性的影响,并探讨基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)/CXCR4轴在AMSC归巢、迁... 目的:研究与羊膜上皮细胞(amniotic epithelial cells,AEC)共培养对羊膜间充质干细胞(amniotic mesenchymal stem cells,AMSC)生物学特性的影响,并探讨基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)/CXCR4轴在AMSC归巢、迁移过程中的作用。方法:从人羊膜中分别分离、培养AMSC和AEC,进行扩增及鉴定。实验设AMSC与AEC共培养组、无血清AMSC培养组以及血清AMSC培养组,培养24、48、72 h后,通过CCK-8及锥虫蓝实验检测AMSC细胞增殖活性,免疫荧光流式细胞术和Real-time PCR检测CXCR4 m RNA的表达水平,细胞迁移实验检测AMSC细胞体外迁移能力。结果:48、72 h共培养组及血清培养组细胞增殖活性及增殖率均高于无血清培养组(P<0.05);共培养组与无血清培养组AMSC细胞的CXCR4 m RNA和蛋白表达明显高于血清培养组(P<0.05),两组AMSC细胞依赖迁移能力明显高于血清培养组(P<0.05)。结论:与AEC共培养的AMSC细胞仍具备间充质干细胞的基本生物学特性,且能保持良好的增殖活性,共培养能上调AMSC表面CXCR4,并在体外增强其迁移能力。 展开更多
关键词 羊膜间充质干细胞 羊膜上皮细胞 CXCR4 归巢 迁移
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羊膜上皮细胞体外培养条件的优化及其干细胞标志的表达 被引量:3
12
作者 陈宥艺 陆琰 +5 位作者 王科 王琰 吴东颖 刘兵 杨瑛 吕双红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期464-468,共5页
本研究优化人足月胎盘羊膜上皮细胞(human amniotic epithelium cells,hAEC)的体外培养方法并观察hAEC的干细胞标志的表达情况。取健康产妇足月剖宫产术后的羊膜,采用胰酶多次消化获取hAEC,分别应用10%FBS的DMEM、类似胚胎干细胞的培养... 本研究优化人足月胎盘羊膜上皮细胞(human amniotic epithelium cells,hAEC)的体外培养方法并观察hAEC的干细胞标志的表达情况。取健康产妇足月剖宫产术后的羊膜,采用胰酶多次消化获取hAEC,分别应用10%FBS的DMEM、类似胚胎干细胞的培养条件及添加表皮细胞生长因子(epidermal growth factor,EGF)的类似胚胎干细胞的培养条件对其进行原代和传代培养,观察培养后细胞形态,并通过流式细胞术检测、细胞免疫荧光染色等方法对培养细胞的干细胞多能性标志进行鉴定。结果表明:在类似胚胎干细胞培养条件的基础上添加10 ng/ml EGF可提高hAEC原代细胞的贴壁率和增殖能力,与广泛应用的10%FBS的DMEM培养条件相比,在此培养条件下细胞传代能力显著增强,传至5代仍保持上皮细胞表型,细胞形态在传代过程中改变不明显,并且表达胚胎干细胞全能性的表面标志SSEA-4,同时细胞免疫荧光染色显示培养后的hAEC表达波形蛋白(vimentin)。结论:采用类似胚胎干细胞的培养条件有利于hAEC在体外的扩增和传代,EGF对其增殖和传代有促进作用,培养的hAEC表达胚胎干细胞多能性标志。 展开更多
关键词 羊膜上皮细胞 体外培养 干细胞标志 表皮生长因子
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人羊膜不同位置上皮细胞的类胚胎干细胞性质差异研究 被引量:3
13
作者 冯小倩 陈连凤 方全 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期701-705,共5页
目的了解足月人羊膜上皮不同位置上皮细胞在类胚胎干细胞性质方面的异质性。方法分层消化收集人羊膜上皮近表层与近基底层细胞,运用流式细胞术、免疫荧光、免疫组织化学等方法观察测定其干细胞表面抗原及分子标记物Nanog、Oct4、Sox2、S... 目的了解足月人羊膜上皮不同位置上皮细胞在类胚胎干细胞性质方面的异质性。方法分层消化收集人羊膜上皮近表层与近基底层细胞,运用流式细胞术、免疫荧光、免疫组织化学等方法观察测定其干细胞表面抗原及分子标记物Nanog、Oct4、Sox2、SSEA1、SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81、CD73的表达情况;同时将足月人羊膜全层及经胰酶消化去上皮后的人羊膜行组织学染色,测定SSEA3、TRA1-60、TRA1-81表达情况。结果人羊膜上皮近基底层细胞表达Nanog、Oct4、Sox2、SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81普遍高于近表层细胞;表达SSEA4最强、最显著的细胞主要为较小的近圆形细胞,分布于羊膜上皮近基底层处。结论人羊膜上皮不同位置细胞的干细胞特性不同,近基底层细胞比近表层细胞具有更强的类胚胎干细胞性质,因而有望成为临床干细胞的来源。 展开更多
关键词 羊膜 上皮细胞 干细胞
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人羊膜上皮细胞分泌神经营养因子诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞的分化:可能性验证 被引量:3
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作者 张晓明 孙海梅 +1 位作者 杨慧 季凤清 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期973-978,共6页
背景:课题组前期实验已证实人羊膜上皮细胞条件培养液可以诱导人脐血间充质干细胞分化为多巴胺能神经元样细胞,在此过程中人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子及其受体可能起到了重要作用。目的:探讨人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子对... 背景:课题组前期实验已证实人羊膜上皮细胞条件培养液可以诱导人脐血间充质干细胞分化为多巴胺能神经元样细胞,在此过程中人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子及其受体可能起到了重要作用。目的:探讨人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子对人脐血间充质干细胞神经分化的作用。方法:将P1代人脐血间充质干细胞按2×108L-1密度接种,分为3组:对照组加入HG-DMEM培养基;诱导组加入人羊膜上皮细胞条件培养液;阻断剂组预先加入阻断剂K252a工作液,36℃孵育40min后更换为羊膜上皮细胞条件培养液。免疫荧光化学检测诱导后人脐血间充质干细胞神经元特异性烯醇化酶及多巴胺转运体的表达,实时定量PCR法检测诱导后人脐血间充质干细胞中神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体及酪氨酸羟化酶的表达。结果与结论:人羊膜上清中有神经生长因子和脑源性神经营养因子的表达,且P1代人脐血间充质干细胞表达神经营养因子高黏附性受体Trka及Trkb。诱导48h后与对照组比较,诱导组及阻断剂组神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体阳性细胞数均明显增加(P<0.05),且诱导组阳性细胞数最多(P<0.05)。诱导组、阻断剂组神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体及酪氨酸羟化酶mRNA含量均显著高于对照组(P<0.01),且诱导组各基因mRNA含量明显高于阻断剂组(P<0.01)。结果证实人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子对人脐血间充质干细胞的神经分化有重要作用,其促神经分化作用是通过酪氨酸激酶受体介导的。 展开更多
关键词 神经营养因子 人脐血间充质干细胞 羊膜上皮细胞 诱导 阻断 干细胞
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大鼠羊膜上皮细胞体外诱导可分化为类神经干细胞 被引量:3
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作者 郭兵 许家军 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第19期3503-3507,共5页
背景:以往研究发现修复神经损伤的细胞来源主要有许旺细胞、嗅鞘细胞、神经干细胞、激活的巨噬细胞等,但这些细胞存在着来源困难、有成瘤性、异体排斥等缺点。而羊膜上皮细胞不存在以上缺陷,且具有多向分化潜能,经诱导后可向心肌样细胞... 背景:以往研究发现修复神经损伤的细胞来源主要有许旺细胞、嗅鞘细胞、神经干细胞、激活的巨噬细胞等,但这些细胞存在着来源困难、有成瘤性、异体排斥等缺点。而羊膜上皮细胞不存在以上缺陷,且具有多向分化潜能,经诱导后可向心肌样细胞、神经干细胞、肝细胞、成骨和软骨细胞等分化。目的:体外培养大鼠羊膜上皮细胞,并诱导其向类神经干细胞方向分化。方法:取妊娠晚期大鼠,采用胰酶消化法获得羊膜上皮细胞,用无血清的神经干细胞条件培养基对细胞进行诱导分化,并用免疫细胞化学法和RT-PCR对诱导前后的细胞相关标志物进行鉴定。结果与结论:形态学观察结果显示,条件培养基诱导后的羊膜上皮细胞胞体回缩,胞核部分折光性增强,出现类似于树突及轴突样结构,这些突起可交织成网状,细胞贴壁牢靠。免疫细胞化学检测结果显示,与诱导前相比,条件培养基诱导后的羊膜上皮细胞中巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白荧光强度较强,而特异性胚胎抗原4、波形蛋白荧光强度较弱。RT-PCR检测显示,与诱导前相比,条件培养基诱导后的羊膜上皮细胞的巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白mRNA的表达增强,而平滑肌22α、Sox-2及NanogmRNA的表达减弱。说明体外诱导的大鼠羊膜上皮细胞可成功分化为类神经干细胞。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞培养与分化 羊膜上皮细胞 诱导 分化 类神经干细胞 巢蛋白 胶质纤维酸性蛋白 微管相关蛋白 973项目 干细胞图片文章
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人羊膜上皮细胞与人羊膜间充质干细胞生物学特性对比 被引量:3
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作者 甘文婷 孙新 陆琰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期1120-1124,共5页
目的:比较人羊膜上皮细胞(human amnion epithelial cells,h AECs)与人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cells,h AM SCs)的生物学特性。方法:从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,采用低速胰蛋白酶-胶原酶消化法,分别分离获... 目的:比较人羊膜上皮细胞(human amnion epithelial cells,h AECs)与人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cells,h AM SCs)的生物学特性。方法:从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,采用低速胰蛋白酶-胶原酶消化法,分别分离获取h AECs及h AMSCs,观察此两种细胞的增殖生长情况,采用免疫荧光染色、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、诱导分化染色等方法对两种细胞进行生物学特性鉴定及对比。结果:h AECs为圆形或椭圆形,呈铺路石样生长,最多传至5代;h AMSCs为成纤维细胞样的长梭形,呈放射状或漩涡状分布生长,可传至30代左右。h AECs表达上皮细胞标志角蛋白19(cytokeratin19,CK19),部分表达波形蛋白;h AM SCs表达波形蛋白,不表达CK19。两种细胞均表达CD29、CD44、CD73、CD90、OCT-4、Nanog。h AECs不表达CD105,成骨及成脂诱导阳性。结论:h AECs和h AM SCs均具有某些干细胞特性,h AECs不能无限增殖,其生长增殖及分化能力均低于h AM SCs。 展开更多
关键词 羊膜上皮细胞 羊膜间充质干细胞 生物学特性
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去上皮羊膜上培养兔角膜缘干细胞的实验研究
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作者 宋曲园 马雅玲 《宁夏医学院学报》 2008年第3期293-295,F0003,共4页
目的探讨去上皮羊膜上培养兔角膜缘干细胞的可行性。方法取小块兔角膜缘组织,采用组织块+细胞悬液共培养,待细胞长至对数生长期,分别传代于去上皮羊膜和完整羊膜,甲基偶氮蓝比色(MTT)法对比两组细胞增殖率,并行AE_5免疫鉴定。结果原代... 目的探讨去上皮羊膜上培养兔角膜缘干细胞的可行性。方法取小块兔角膜缘组织,采用组织块+细胞悬液共培养,待细胞长至对数生长期,分别传代于去上皮羊膜和完整羊膜,甲基偶氮蓝比色(MTT)法对比两组细胞增殖率,并行AE_5免疫鉴定。结果原代细胞接种7d左右,生长至对数生长期,细胞融合成单层。去上皮羊膜组细胞传代培养效果明显优于完整羊膜组。AE_5单克隆抗体染色强阳性。结论去上皮羊膜上培养出的兔角膜缘组织既有角膜上皮特性,又具有强的增殖潜力。 展开更多
关键词 角膜缘干细胞 细胞培养 上皮羊膜
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下调NF-κB信号通路促进人羊膜间充质干细胞上皮化
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作者 刘拟舟 毛艳华 +9 位作者 张文文 张应凤 王佳 李长江 陈秋宏 吴莎莎 王婷婷 黄玺玥 谢乐乐 孙聪聪 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第16期1712-1721,共10页
目的探讨NF-κB信号通路在诱导人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)上皮化的过程中发挥的作用。方法分离和培养hAMSCs,将hAMSCs分为对照组和诱导组(n=3),采用RT-qPCR检测上皮化标志物(CK-7、CK-19、E-cad... 目的探讨NF-κB信号通路在诱导人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)上皮化的过程中发挥的作用。方法分离和培养hAMSCs,将hAMSCs分为对照组和诱导组(n=3),采用RT-qPCR检测上皮化标志物(CK-7、CK-19、E-cadherin)、间质标志物(Vimentin)、NF-κB信号通路关键因子(IκBα、p65)和NF-κB信号通路靶基因cyclin D1的mRNA表达水平;采用免疫荧光检测CK-7、E-cadherin、Vimentin、IκBα、p65和p-p65的蛋白表达水平;为确认NF-κB信号通路在hAMSCs上皮化中的作用,将hAMSCs分为诱导组、抑制剂组、Ad-GFP组(空白腺病毒)、Ad-IκBα组(腺病毒过表达IκBα)、LV-GFP组(空白慢病毒)、LV-RELA-RNAi组(慢病毒沉默p65)(n=3)。RT-qPCR检测CK-7、CK-19、E-cadherin、Vimentin、IκBα和p65的mRNA表达水平,免疫荧光检测CK-7、E-cadherin、Vimentin和IκBα、p65、p-p65的蛋白表达水平。结果与对照组比较,诱导组中CK-7、CK-19、E-cadherin的mRNA表达升高(P<0.01),CK-7、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),Vimentin的mRNA表达降低(P<0.01),蛋白表达降低(P<0.05),IκBα、p65、cyclin D1的mRNA表达降低(P<0.001),IκBα、p65、p-p65蛋白表达降低(P<0.05);抑制剂组、Ad-IκBα组、LV-RELA-RNAi组中CK-7、CK19、E-cadherin的mRNA表达较诱导组明显升高(P<0.01),CK-7、E-cadherin蛋白表达较诱导组升高(P<0.05),Vimentin的mRNA表达明显下降(P<0.01),蛋白表达降低(P<0.05)。结论NF-κB信号通路参与hAMSCs上皮化的调控,下调NF-κB信号通路能有效促进hAMSCs上皮化。 展开更多
关键词 NF-ΚB信号通路 羊膜间充质干细胞 宫腔粘连 上皮
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诱导骨髓间质干细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究 被引量:13
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作者 黄丹平 葛坚 +2 位作者 高楠 卢蓉 高前应 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期999-1003,共5页
目的:观察人骨髓间质干细胞(MSCs)移植到兔角膜基质后的分化发育情况,探讨MSCs分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:24只新西兰兔随机分为2组。实验组:将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4d,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植到兔角膜基质;... 目的:观察人骨髓间质干细胞(MSCs)移植到兔角膜基质后的分化发育情况,探讨MSCs分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:24只新西兰兔随机分为2组。实验组:将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4d,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植到兔角膜基质;对照组:采用保存羊膜移植到兔角膜基质。分别于移植后1、2、3、4、6和8周,摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查,检查移植到兔角膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况;免疫组织化学检测移植到角膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白K3/12(CK3/CK12)和角蛋白K13(CK13)的表达。结果:MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长,与羊膜共培养4d后,MSCs贴附羊膜生长迅速,组织学特征无明显改变。羊膜负载MSCs移植到兔角膜基质表面,术后免疫组织化学检测角膜上皮层CK3/CK12表达阳性,CK13表达阴性,在重建的角膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞并同时表达角膜上皮细胞特异性表面标志蛋白K3/K12,未发生免疫排斥反应,未见异常增殖细胞。结论:羊膜负载MSCs移植到兔眼表角膜基质后,MSCs能存活、增殖并向角膜上皮样细胞分化。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 羊膜 上皮 角膜 细胞分化
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羊膜对人脐血干细胞分化为多巴胺能神经元的作用 被引量:7
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作者 李荣平 季凤清 +4 位作者 孙海梅 王丹妮 曾小蓓 赵春礼 杨慧 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期790-794,共5页
目的探讨羊膜上皮细胞对人脐血干细胞定向分化为多巴胺能神经元的作用。方法体外分离、原代培养人羊膜上皮细胞,通过高速离心制备成条件培养液(CM)对P1代脐血干细胞进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,应用免疫荧光染色和免疫... 目的探讨羊膜上皮细胞对人脐血干细胞定向分化为多巴胺能神经元的作用。方法体外分离、原代培养人羊膜上皮细胞,通过高速离心制备成条件培养液(CM)对P1代脐血干细胞进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,应用免疫荧光染色和免疫印迹法检测其酪氨酸羟化酶(TH)及多巴胺转运体(DAT)蛋白的表达情况。结果P1代脐血干细胞经羊膜上皮细胞条件培养液诱导后,TH及DAT阳性细胞率明显高于对照组,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),免疫印迹分析结果与免疫荧光染色结果一致。结论羊膜上皮细胞能诱导人脐血间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元。 展开更多
关键词 干细胞 诱导分化 多巴胺能神经元 羊膜上皮细胞 免疫组织化学 人脐带血
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