不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景:许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。目的:观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞(RSC96)生长的影响。方法:使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数(0,10,15,20,25%)分组。结果与结论:人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为(470.625±2.546),(4.121±0.026)和(0.172±0.002)ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组(P<0.05);10%、15%人羊膜匀浆上清液组显示出促进细胞增殖的作用,而20%、25%人羊膜匀浆上清液组显示出抑制细胞增殖的作用;各实验组的细胞活力与对照组接近(P>0.05)。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时(10%和15%)具有促进RSC96增殖作用,高浓度时(20%和25%)抑制RSC96增殖。

人羊膜匀浆上清液治疗兔角膜碱烧伤的病理研究

目的:观察人羊膜匀浆上清液促进兔角膜碱烧伤后角膜上皮和基质修复的作用,为临床上应用人羊膜匀浆上清液点眼治疗眼碱烧伤提供理论依据。方法:将制备的羊膜匀浆上清液点眼治疗兔角膜碱烧伤,并对治疗后的角膜照相观察角膜上皮愈合和基质修复情况。结果:羊膜匀浆上清液治疗角膜碱烧伤后眼充血明显减轻,角膜上皮愈合较快,角膜上皮细胞排列整齐,基质中炎症细胞浸润减轻且胶原纤维排列整齐。结论:早期应用羊膜匀浆上清液能促进兔角膜碱烧伤后角膜的愈合及膜基质有序修复。

人羊膜匀浆上清液对兔角膜碱烧伤后上皮愈合的影响

目的:观察人羊膜匀浆上清液对兔角膜碱烧伤后角膜上皮愈合的影响。方法:将制备的不同浓度的羊膜匀浆上清液点眼治疗兔角膜碱烧伤,筛选出最佳浓度的羊膜匀浆上清液,同时设立羊膜匀浆上清液组、bFGF(贝复舒眼液)组和对照组,对治疗后的角膜愈合照相并行角膜上皮愈合率的比较。结果:羊膜匀浆上清液治疗角膜碱烧伤后角膜上皮愈合较快。结论:羊膜匀浆上清液能促进兔角膜碱烧伤后角膜上起愈合,早期应用即能发挥作用。

人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤的大鼠肺微血管内皮细胞增殖及分泌炎症因子的影响

目的：探讨人羊膜匀浆上清液（hAHS）对脂多糖（LPS）致伤的大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVECs）增殖及其分泌促炎因子的影响。方法：用新鲜人羊膜制备hAHS,用考马斯亮蓝法和ELISA法分别测定hAHS中总蛋白和表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、白介素-4（IL-4）、IL-10、血管生成素-1（Ang-1）、人β-防御素2（HBD2）的含量。MTT法检测不同体积分数hAHS（0、10%、15%、20%、25%）作用于RPMVECs后细胞增殖活性的变化,确定hAHS促进RPMVECs增殖的最佳浓度。根据共培养条件不同,将RPMVECs随机分为4组：N组（10%FBS＋DMEM/F12）,A组（10%FBS＋DMEM/F12＋15%hAHS）,B组（10%FBS＋DMEM/F12＋LPS）和C组（10%FBS＋DMEM/F12＋15%hAHS＋LPS）。各组细胞在干预后0、12、24、48、72h用MTT法测定吸光度值（A值）,并分别于培养6、8、10、12、24h时用ELISA法测定RPMVECs培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的含量。结果：hAHS中总蛋白浓度为（725.125±12.625）mg/L,其中EGF、bFGF、VEGF、IL-4、IL-10、Ang-1、HBD2的浓度分别为（504.785±4.665）、（4.426±0.138）、（0.185±0.006）、（25.650±4.104）、（13.733±2.197）、（15.561±0.496）和（4.763±0.714）ng/L。hAHS的体积分数在10%~20%时均具有促进RPMVECs增殖的作用且以15%hAHS培养后第7、9天的增殖率最佳,而25%hAHS在第7、9、11天使RPMVECs增殖率小于0%hAHS组（P〈0.05）。A组48和72h细胞增殖活性较N组显著增加,B组24、48和72h的增殖活性较N组显著降低;C组24、48和72h的增殖活性较B组显著升高（P〈0.05）。ELISA结果显示,B组各时间点的IL-6和TNF-α的含量以及8、10、12和24h的IL-8含量均显著高于N组（P〈0.05）;C组10和12h的IL-6含量,8、10、12和24h的IL-8含量及各时间点的TNF-α含量均显著低于B组（P〈0.05）。结论：hAHS含有促进组织修复、调节免疫反应、降低血管通透性及杀伤致病微生物的多种生长因子、细胞因子,对LPS致伤的RPMVECs增殖具有促进作用,并减少致伤后炎症因子分泌。

人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤条件下肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及炎症因子分泌的影响

目的观察人羊膜匀浆上清液（human amniotic homogenate supernatant,hAHS）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致伤条件下大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar typeⅡepithelial cell,AT-Ⅱ）增殖及肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）和白细胞介素1β（interleukin1 beta,IL-1β）分泌的影响。方法 1取健康胎盘来源的新鲜人羊膜制备hAHS,配制含hAHS体积分数不同的5组培养基（对照组、10%hAHS组、20%hAHS组、40%hAHS组、80%hAHS组）对大鼠AT-Ⅱ行分组培养,四甲基偶氮唑盐（microculture tetrazolium,MTT）法测不同时间点OD630值。2对对照组、LPS致伤组、40%hAHS干预组大鼠AT-Ⅱ行分组培养,MTT法和酶联免疫吸附剂测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法测不同时间点OD630值和培养液中大鼠TNF-α和IL-1β含量。结果 1对数期内前4组间各时间点比较,hAHS体积分数相对较高组别的OD630值也相对较高（即40%hAHS组〉20%hAHS组〉10%hAHS组〉对照组）,且第3-5天均有统计学差异（P〈0.05）,而hAHS含量更高的80%hAHS组,各时间点均低于40%hAHS组,且第3-5天有统计学差异（P〈0.05）。2 hAHS干预组在24 h后各时间点的OD630值不仅均高于LPS致伤组,也均高于对照组,且均有统计学差异（P〈0.05）。与此同时,hAHS干预组各时间点大鼠TNF-α和IL-1β含量均低于LPS致伤组,且二者均分别于前6 h各时间点组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 hAHS可显著促进体外正常培养条件下AT-Ⅱ的增殖,且对LPS致伤条件下AT-Ⅱ的增殖和TNF-α、IL-1β等促炎因子分泌具有保护和抑制作用。

羊膜匀浆液对兔小梁切除术后滤过泡及TGFβ1、CTGF表达的影响

目的研究羊膜匀浆提取液在兔实验性小梁切除术后对滤过泡及TGFβ1、CTGF表达的影响。方法将30只新西兰大白兔随机平均分为实验组和对照组,选右眼行标准小梁切除术。实验组于术后当天开始每天用羊膜匀浆液点眼,对照组单纯用氯霉素滴眼液点眼。在不同时间点分别作临床及病理观察。结果共22眼形成功能性滤过泡,其中实验组14眼,对照组8眼(P<0.05)。眼压除术前与术后2d差异无统计学意义(P>0.05)外,其余观察点差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组成纤维细胞(Fb)数目较对照组少(P<0.05)。免疫组化染色观察TGFβ1、CTGF的表达,实验组低于对照组(P<0.05)。结论羊膜匀浆上清液点眼无并发症发生,且能增强滤过泡滤过功能及降眼压效果,对滤过泡TGFβ1、CTGF表达有抑制作用。