自制羊膜载体复合物植入表皮细胞修复全层皮肤缺损

背景:利用组织工程和细胞培养技术研制的复合皮肤距理想的人工皮肤尚有一定的差距,如局部皮肤薄弱、抗拉及抗摩擦能力差、无皮肤附属器等。目的:观察含碱性成纤维细胞生长因子和维生素C的羊膜载体复合物对皮肤缺损局部真皮组织的修复作用,寻找真皮组织修复重建促进表皮生长的最佳时期。方法:取新西兰大耳白兔36只,在每只背部建立皮肤全层缺损模型3处,分别植入含有缓释碱性成纤维细胞生长因子和维生素C羊膜载体复合物、单纯羊膜载体复合物及油纱覆盖。随机分为3组,分别于术后21,14,7d植入自体表皮细胞混合液,1周后行大体、组织学、免疫组织化学、墨汁灌注等观察。结果与结论:术后21d植入表皮细胞组皮肤缺损局部新生皮肤瘢痕轻、形态结构较满意,创面愈合速度和质量均优于术后14,7d植入表皮细胞组,并且植入含碱性成纤维细胞生长因子和维生素C羊膜载体复合物组创面皮肤新生真皮组织完全被新生的表皮覆盖,而且表皮几乎均变为复层,其生长速度及质量优于单纯羊膜载体复合物移植组和油纱覆盖组。说明含有碱性成纤维细胞生长因子和维生素C的羊膜载体复合物植入皮肤全层缺损后,能加速真皮的修复和重建;真皮组织修复增生晚期和重建初期为促进表皮生长的最佳时期。

MSC复合含BMP的羊膜载体复合膜治疗骨髓炎的实验研究

目的实验研究间充质干细胞(MSC)复合含骨形态发生蛋白(BMP)的羊膜载体复合膜治疗骨髓炎的效果,为临床应用提供实验参考。方法选取30只纯种新西兰大耳白兔,制备成骨髓炎模型后随机分为A组(实验组)、B组(对照1组)和C组(对照2组),每组10只,A组将添加了MSC的含有抗生素及BMP的羊膜载体复合膜置入骨髓炎位置,B组一单纯置入含有抗生素及BMP的羊膜载体复合膜,C组仅进行扩创闭合创口,术后观察三组兔的骨髓炎愈合情况。结果 1大体观察:A组的外观接近正常骨组织,骨皮质缺损基本已填满,无明显的髓腔脓液及死骨。B组和C组骨皮质缺损均未能完全填满,形态各异,缺损与增生交替。2 X线检查:三组改良X线Norden评分分别为(0.9±0.5)、(3.2±1.1)、(5.3±1.4)分,A组显著优于B组和C组,B组显著优于C组,差异具有统计学意义(P均<0.05)。3组织学检查:A组修复新生骨厚度接近正常骨厚度活略厚于正常骨组织,且与临近的正常组织衔接较好,髓腔内的骨小梁结构粗大,骨小梁间的骨髓组织接近正常。B组修复新生骨厚度较正常的骨厚度增厚,与邻近的正常组织衔接较松,可见缝隙,髓腔内可见少量炎性细胞活脓肿,髓腔内骨小梁较少。C组未见修复骨组织增生,骨破坏严重,髓腔内可见大量炎性细胞、脓液及坏死骨,未见骨小梁形成。4细菌学检查:检测三组骨髓中的平均细菌数分别为(1.1±0.7)×102、(4.2±1.6)×105和(8.6±3.8)×107,A组细菌数明显小于B组和C组,B组细菌数明显小于C组,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论 MSC复合含BMP的羊膜载体复合膜治疗骨髓炎好,为临床慢性创伤后骨髓炎的治疗提供了新的思路和方法。

羊膜载体复合膜缓释系统的实验研究

目的研究羊膜载体复合膜缓释系统对骨髓炎的治疗作用。方法 30只纯种新西兰大耳白兔制成骨髓炎模型,随机分为对照组和观察组,各15只。对照组模型给予局部应用抗生素进行治疗,观察组模型给予羊膜载体复合膜缓释系统中应用抗生素进行局部治疗,对比观察两组模型的治疗效果。结果建立模型前两组兔体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);建立模型8周,对照组兔体质量下降较多,观察组兔体质量显著高于对照组(P<0.05)。两组兔骨培养感染细菌均为金黄色葡萄球菌,对照组兔骨培养细菌感染均为阳性,阳性率为100%,细菌计数为(8.4±3.7)×107;观察组中9只骨培养细菌感染为阳性,阳性率为60%,细菌计数为(4.2±2.8)×105。两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与局部应用抗生素相比,羊膜载体复合膜缓释系统对骨髓炎的治疗作用较好。

羊膜载体复合膜负载骨髓间充质干细胞在促进创面愈合中的作用

目的研究羊膜载体复合膜负载骨髓间充质干细胞在促进创面愈合中的作用。方法取健康纯种成年新西兰家兔30只,以羊膜载体复合膜为载体,将自体来源骨髓间充质干细胞植入家兔背部左侧的全层皮肤缺损创面为观察组,另仅以羊膜载体复合膜植入右侧的皮肤缺损创面为对照组,对比观察两组的术后创面愈合时间及病理和Brd U免疫组织化学染色检测等。结果观察组创面收缩率显著优于对照组,P<0.05,差异具有统计学意义。观察组术后4周的病理切片显示表皮细胞数目显著增多,表皮层显著增厚;免疫组织化学染色检测,可见染色阳性细胞,与周围表皮细胞无明显差异。结论羊膜载体复合膜负载骨髓间充质干细胞可显著提高创面的愈合质量,为皮肤损伤的完美愈合提供了治疗的新思路。

羊膜为载体培养角膜细胞时去上皮方法比较

目的比较刀片法、玻璃棒法、消化液吹打法和自制刮匙四种方法祛除羊膜上皮细胞的效果。方法33片羊膜随机分为A、B、C、D四组,分别采用四种方法祛除上皮,置显微镜下观察,比较各组的去上皮效果及破损情况。结果A组刀片法和D组自制刮匙法的残留细胞率较低,分别为0和8.33%,A组刀片法的破损率为71.43%;B组玻璃棒法和C组消化液吹打法的残留细胞率较高,分别为66.67%和62.50%。结论自制刮匙祛除法和刀片法祛除羊膜上皮细胞的效果明显优于玻璃棒法和消化液吹打法,但刀片法的羊膜破损率高,故自制刮匙祛除法是较理想的去上皮方法。

共焦显微镜引导下取材行人角膜缘上皮干细胞的体外培养及鉴定

背景目前严重的致盲性眼表疾病的治疗方法主要是自体或异体角膜缘干细胞移植，但存在着供体材料来源有限、术后免疫排斥等问题。体外培养角膜缘干细胞用于成为研究热点，优化其培养方法是提高培养效率的前提。目的以共焦显微镜作为指导进行取材，对人角膜缘干细胞进行体外培养和鉴定，为构建人角膜缘干细胞植片奠定基础。方法应用激光扫描共焦显微镜对10例10眼白内障术前检查的患者行全角膜及角膜缘分区扫描，记录角膜及角膜缘上皮层、前弹力层图像，对所有检查资料进行研究分析。依据共焦显微镜对角膜缘上皮层的结构分析，对眼库提供的正常供体角膜缘组织进行取材，实验共分6批取组织进行培养，共接种103张组织块。用组织块培养法、以羊膜为载体进行体外培养，分别在培养的第5天、第10天利用免疫荧光技术检测p63蛋白、细胞角蛋白19（CKl9）和角蛋白3（K3）及involuerin蛋白的表达对培养细胞的表型进行鉴定。结果共焦显微镜扫描显示，角膜缘上皮层细胞聚集成细长条索，呈栅栏状外观，其间可见大量高反光颗粒状物质；在基底部扫描时观察到“细胞岛”样现象；角膜缘部位斜切面观察可见上皮层下有排列整齐的乳头状突起。接种的103块组织块中出膜生长74块，平均出膜率为（68．62±16．94）％，平均出膜时间为（5．83±2．04）d，第3批和第6批组织块的出膜率明显高于第2批和第4批，差异均有统计学意义（P〈O．05）。第4批和第6批组织块的出膜时间明显长于第1、2、3、5批，差异有统计学意义（P〈0．05）。在培养的第5天和第10天，角膜缘干细胞表达p63蛋白的阳性细胞比例分别为4．05％和36．52％，CK19阳性细胞比例分别为26．07％和40．55％，K3的阳性细胞比例分别为57．88％和40．81％，表达involucrin蛋白的阳性细胞比例分别为64．66％和59．19％。结论在共焦显微镜引导下选取角膜缘组织进行角膜缘干细胞培养结果可靠，羊膜作为载体可以使体外培养的人角膜缘干细胞良好生长。