羊踯躅的代谢组学研究

目的:鉴定羊踯躅花、茎、叶的全部代谢物和不同部位间含量有差异的代谢物,分析差异代谢物的代谢通路。方法:采用广泛非靶向代谢组学对羊踯躅不同部位的代谢物进行比较分析。结果:共鉴定出535个代谢物,其中包括金合欢素、落新妇苷、苔黑酚龙胆二糖苷、去甲蟛蜞菊内酯、补骨脂定、秦皮素、络塞维等49个在其他植物中分离鉴定出的具有药用活性的化合物;鉴定出差异代谢物202个,包括β-氰基丙氨酸、蜀黍苷和黄曲霉毒素G23个有毒代谢物,且这3个有毒代谢物分别在花、茎、叶中含量最高;鉴定出百里香酚、丹皮酚、欧芹酚、东莨菪内酯、异泽兰黄素、野鸢尾黄素、石蒜碱和豆甾醇8个有药用价值的化合物,其在花、茎、叶中含量差异有统计学意义;排名前4位的差异代谢物通路中,花、茎、叶共有的通路为精氨酸生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,以及氨酰基-tRNA生物合成通路,其中涉及花的通路还包括氰基氨基酸代谢通路。结论:羊踯躅中存在丰富的天然药用活性产物,使其药用价值并不限于毒性成分;氨基酸的合成与代谢是不同部位代谢物差异的主要原因。研究结果可为进一步筛选解析羊踯躅中药用价值较高的关键代谢物提供参考。

羊踯躅含药血清对TNF-α诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及炎症因子分泌的影响

目的探究羊踯躅含药血清对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)增殖和炎症因子分泌的影响和作用机制,为临床治疗RA提供理论及实验依据。方法将细胞分为空白组、模型组、雷公藤多苷组、5%和10%空白血清组及5%和10%羊踯躅含药血清组。RA-FLS经TNF-α(10 ng/mL)处理24 h以构建RA细胞模型。CCK-8检测细胞增殖情况。采用ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的含量。Western blot检测蛋白激酶B(protein kinase B,AKT1)、磷酸化AKT1(phosphorylated AKT1,p-AKT1)、原癌基因c-JUN、p-c-JUN、p65、p-p65、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白表达水平。结果与未用羊踯躅含药血清处理的正常RA-FLS相比,用5%和10%羊踯躅含药血清处理的细胞增殖活性在48 h内没有明显的变化(P>0.05),而用20%和30%羊踯躅含药血清处理的细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组的细胞增殖活性显著上升(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的细胞增殖活性均显著降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组的IL-1β、IL-17A、IL-6、IL-2和IFN-γ水平均明显升高(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的IL-1β、IL-17A、IL-6、IL-2和IFN-γ水平明显下降(P<0.05)。与空白组相比,模型组的EGFR表达量以及AKT1、c-JUN和p65的磷酸化水平均明显升高(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的EGFR表达量以及AKT1、c-JUN和p65的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。此外,10%羊踯躅含药血清的效果比5%羊踯躅含药血清更为显著(P<0.05)。结论羊踯躅含药血清能抑制TNF-α诱导的RA-FLS增殖及促炎因子的分泌,其机制可能与调控EGFR、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、AKT和c-Jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路有关。

中国羊踯躅花化学成分研究

从国产杜鹃花科植物羊踯躅(Rhododendron molle G.Don)的花中分离得到两种有药理活性的成分。经光谱(IR,MS,~1HNMR,^(13)CNMR,~1H-~1H COSY,~1H-~1H NOESY,^(13)C-~1H COSY)等分析证明其中一种为新的四环二萜类化合物。命名为羊踯躅素Ⅲ(rhodomollein Ⅲ)(1)。

羊踯躅的研究进展

本文综述了羊踯躅的化学成分、药理、毒理和毒性构效关系等,并对羊踯躅的研究作了简要展望。

羊踯躅果实中的二萜化合物

从杜鹃花科植物羊踯躅(Rhododendron molle)的果实中分离并鉴定出2种新的木藜芦烷型二萜化合物rhodomolleins ⅩⅨ(1)和ⅩⅩ(2)以及1种已知的木藜芦烷型二萜化合物rhodojaponinⅢ(3),它们的结构通过多种波谱方法测定;化合物3在离体豚鼠心肌细胞实验中对钠离子通道电流有显著抑制作用(p<0.05),显示对钠离子通道有拮抗作用,从而从单细胞及离子通道水平阐明了该化合物对心肌细胞作用的部分离子机制.

羊踯躅根药理作用研究

羊踯躅根治疗类风湿关节炎效果显著。本研究采用大鼠急性关节肿胀、兔毛细血管通透性法和棉球肉芽肿法证实它有明显的抗炎作用,并与剂量相关。应用免疫学方法测定小鼠半数溶血值和二硝基氯苯诱发小鼠皮肤超敏反应、单核-巨噬细胞功能、异体肿瘤排斥及小鼠免疫器官等指标。结果表明:本品具有免疫抑制作用。同时利用酵母菌、蛋白胨对兔致热方法.证明本品具有轻度解热作用。

羊踯躅根乙酸乙酯提取物的药理作用

目的 :探讨羊踯躅根乙酸乙酯提取物的药理作用及急性毒性。方法 :采用小鼠热板法和扭体法试验研究其镇痛作用 ;对二甲苯所致小鼠耳部炎症的影响研究其抗炎作用。结果 :乙酸乙酯提取物灌胃给药的LD50 为 12 5 8.5mg·kg 1 ;对小鼠耳廓发炎肿胀无显著抗炎作用。对浅表性物理刺激 (如热板刺激 )抑制较强 ,而对腹腔注射醋酸引起的大面积且较持久的疼痛抑制作用不佳。结论 :乙酸乙酯提取物具有镇痛作用 ,但抗炎效果不强。

羊踯躅嫩叶离体培养和植株高效再生技术研究

【目的】建立羊踯躅嫩叶离体培养及植株高效再生体系。【方法】以羊踯躅新生嫩叶为外植体,筛选嫩叶愈伤组织诱导、再分化及生根培养基,并以再生植株茎节为试材,建立高效植株再生体系。【结果】最适合羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导的培养基为1/2DR+2.40mg/L 2ip+0.80mg/L NAA,诱导率为99.5%;愈伤组织再分化的最佳培养基为1/2DR+2.90mg/L 2ip+0.01mg/L NAA+1.75mg/L KT,分化率为99.7%;适宜生根的培养基为1/4DR+0.06mg/L ZT+0.02mg/L NAA,生根率达99.0%。利用再生植株茎节的快繁结果表明,在28d的培养周期内,每节段平均增殖达5倍以上。【结论】成功建立了羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导、再分化芽苗和植株高效再生体系,可以满足羊踯躅工厂化育苗的需要。

羊踯躅联合石菖蒲治疗急性踝关节扭伤的临床观察

目的观察羊踯躅联合石菖蒲治疗踝关节扭伤的临床疗效。方法将232例急性踝关节扭伤的患者随机分为2组各116例,治疗组运用羊踯躅联合石菖蒲外敷治疗,对照组采用扶他林乳胶剂外敷治疗,治疗10天后比较2组的临床疗效。结果治疗组总有效率为93.1%,对照组为78.4%,治疗组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论羊踯躅联合石菖蒲外敷治疗急性踝关节扭伤为安全有效的方法。

羊踯躅根治疗类风湿性关节炎114例

羊踯躅(Rhoaodendron molle)为杜鹃花科植物。其根具有驱风、除湿、消肿、止痛等作用,治风寒湿痹。我院于1989～1991年间用单味羊踯躅根治疗类风湿性关节炎(RA)114例,疗效较好,报道如下。资料和方法一、病例选择依据 146例全部符合美国风湿病协会1987年修订的RA诊断标准,并符合以下辅助条件:(1)具有活动性病变;(2)病情分期1～2期,功能分级1～3级;(3)停用改善病情的药物1周以上。二、一般资料 146例患者随机分为治疗组与对照组。(1)治疗组:114例中,男28例,女86例;年龄<50岁82例,≥50例32例;

羊踯躅果实水煎液联合美托洛尔降压调脂作用研究

目的探讨羊踯躅果实水煎液联合美托洛尔对自发性高血压大鼠(SHR)的降压调脂作用,并分析其可能机制。方法雄性SHR大鼠32只,随机分为美托洛尔组、羊踯躅果实水煎液组、羊踯躅果实水煎液联合美托洛尔组、模型组,另设Wistar-kyoto大鼠空白组。连续用药4周后,腹主动脉取血,测血浆MDA、NO与ET-1水平,同时检测TC、TG、HDL-C及LDL-C。采用HE和Masson染色观察肾脏组织结构并对纤维化程度进行半定量分析。取另外一侧肾脏,测肾脏局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平。结果给药前,各SHR组与空白组相比,平均动脉压明显升高(P<0.01),SHR组间血压无明显差异。给药4周后,各给药组与模型组相比,均有明显的降压效果(P<0.05或P<0.01),用药各组间降压差异无统计学意义(P>0.05)。各用药组肾脏局部AngⅡ含有量同模型组相比都有明显下降(P<0.01),联合用药组与单用各药组相比,肾脏局部AngⅡ降低效果更为明显(P<0.05或P<0.01)。美托洛尔组在表现较好降压效果的同时,可引起血浆中LDL-C、TG、TC升高(P<0.01),HDL-C降低(P<0.01)。羊踯躅果实水煎液组与模型组比较血脂变化无明显差异(P>0.05)。联合用药组与模型组比较TC、TG、LDL-C水平无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);但HDL-C水平明显升高(P<0.01)。各给药组ET-1和MDA与模型组相比明显降低(P<0.05或P<0.01),而NO水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。联合用药组与美托洛尔组相比表现出更加明显的降低肾脏纤维化作用。结论联合用药组较单用其中一种药物可以在达到良好降压的同时并不影响血中LDL-C、TG、TC的水平,但可使HDL-C升高,且具有更加明显的降低肾脏纤维化作用。其降压机制可能与升高舒张血管因子NO水平同时降低肾脏局部AngⅡ水平、降低血浆ET-1水平有关,也可能与降低MDA生成有关。

羊踯躅根治疗慢性肾小球肾炎的实验及临床研究

本文用反复静脉注射小剂量牛血清白蛋白复制家兔慢性肾炎,用羊踯躅根治疗。同时,用该药对慢性肾炎病人进行疗效观察。阳性组兔肾小球呈现中至重度颗粒形免疫荧光,肾组织呈明显慢性硬化性肾小球肾炎改变。尿蛋白±～++。治疗组兔及病人治疗后病变及症状均明显减轻或消失。结果提示循环免疫复合物反复沉着可引起兔类似人类的慢性硬化性肾小球肾炎,羊踯躅根对病变有一定的控制和治疗作用,这可能与其抑制免疫发病机制有关。

羊踯躅嫩茎离体培养和植株再生

本研究以羊踯躅嫩茎为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的嫩茎基部直接再生芽苗和生根培养基。结果表明,最适合羊踯躅嫩茎基部直接再生芽苗的诱导培养基为:1/4DR+2ip3.75 mg/L+IAA 0.03 mg/L+KT 1.30 mg/L,诱导率为99.8%;生根培养基为:1/4DR+ZT 0.06 mg/L+NAA 0.02 mg/L,生根率达99.0%以上。以再生植株茎节为材料进行快繁的结果表明,在28 d的培养周期内,每段增殖倍数平均达5以上。成功建立了羊踯躅的离体培养和植株再生体系,所建立的植株再生体系可以满足羊踯躅工厂化育苗的需要。

羊踯躅花瓣总RNA提取方法的比较与改进

不同组织的RNA提取难点各异,适宜方法也不尽相同。分析、比较了热酸性酚抽提法、热硼酸法、异硫氰酸胍法和改良的异硫氰酸胍法从羊踯躅花瓣中提取总RNA的效果,经过多次反复实验发现采用改良的异硫氰酸胍法所得的总RNA质量好,纯度高,完整性很好,适用于cDNA文库的构建、Northern印迹与mRNA差异显示等后续研究工作。

羊踯躅嫩茎腋芽丛生芽诱导和高效植株再生

为了筛选最适于羊踯躅腋芽丛生芽诱导和生根的培养基,以其新生嫩茎段为外植体,采用均匀设计法进行了快繁实验。结果表明:最适于羊踯躅嫩茎段腋芽丛生芽的诱导培养基为1/2 DR+2ip4.40 mg.L-1+NAA 0.01 mg.L-1+GA32.50 mg.L-1,其诱导率为99.8%;生根培养基为1/4 DR+ZT 0.06 mg.L-1+NAA0.02mg.L-1,其生根率达99.0%。快繁实验结果还表明,每段茎节增殖数平均达5倍以上,培养周期为28 d。在此基础上,文中建立了羊踯躅腋芽丛生和高效植株再生体系,该体系可应用于羊踯躅的工厂化育苗之中。

薄层扫描法测定羊踯躅根及果实中八厘麻毒素的含量

八厘麻毒素存在于杜鹃花科植物羊踯躅(Rhodo-dendron molle G.Don)的根和果实中,它既是有效成分又是毒性成分。为了扩大药用资源及用药部位,本实验比较了羊踯躅不同药用部位八厘麻毒素的含量。

羊踯躅八氢番茄红素脱氢酶基因的克隆及表达分析

旨在研究羊踯躅八氢番茄红素脱氢酶基因的功能,为其花瓣着色的分子机理研究提供一定的理论依据。以羊踯躅瓣为材料,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣cDNA中克隆获得到2098 bp的八氢番茄红素脱氢酶基因cDNA序列,命名为RmPDS。序列分析表明,RmPDS基因包含一个长度为1743 bp编码580个氨基酸的开放阅读框。利用NCBI分析该基因的氨基酸序列,Blast序列分析结果显示RmPDS与其他植物PDS蛋白氨基酸的相似性达到87.80%。用MEGA软件构建系统进化树,结果显示羊踯躅PDS与茶树PDS蛋白的亲缘关系最近。荧光定量PCR检测结果表明RmPDS基因在羊踯躅花蕾期和膨大期表达量较低,在初花期表达量最高,盛花期表达量有所降低。RmPDS基因参与羊踯躅花色的形成,研究结果为进一步探究该基因在花色形成中的作用机制奠定基础,同时也为构建杜鹃VIGS体系提供报告基因。

羊踯躅根的生药学研究

对羊踯躅根进行生药学研究。