刚果红荧光法测定ctDNA的研究

为建立一种利用荧光测定ctDNA含量的新方法,利用荧光分析法的特点,对体系的pH、荧光试剂的浓度、试剂的添加顺序和干扰离子等实验条件进行优化,建立测定ctDNA含量的新方法。结果表明:在pH=7.4的Tris-HCl缓冲溶液中,十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)与DNA一起加入能大大增强刚果红的荧光强度。随着DNA浓度的不断增加,体系的荧光强度不断增强,在一定范围内,体系的△F与ctDNA的浓度呈良好的线性关系。在优化实验条件下,当ctDNA的浓度为0.005～3.600μg.mL-1时,回归方程为:△F=131.22c+3.854 3(c:mg.L-1),r=0.9988,检测限为0.01μg.mL-1。本方法首次成功地应用于羊驼血液中DNA的测定,回收率为96.25%～102.50%,结果令人满意。

ctDNA含量测定的荧光分析新体系研究

利用荧光光谱法研究了多种不同荧光试剂与ctDNA结合后的光谱特征,实验结果表明c,tDNA能小幅度的增强刚果红的荧光强度,且在十六烷基三甲基溴化铵（CTMAB）表面活性剂存在下体系的荧光强度增强比较大,并在一定范围内荧光增强程度与ctDNA的量呈线性关系,据此,建立了一种测定ctDNA含量的荧光新体系。当反应温度为25℃,反应时间为40min,CR浓度为8.0×10^-6 mol.L^-1,CTMAB的浓度为3.2×10^-5mol.L-1时,ctDNA的浓度在0.005～3.600μg.mL^-1范围内,体系的△F与ctDNA的浓度呈良好的线性关系,线性方程为：△F=131.22C＋3.8543（C：μg.mL-1）r,=0.9988,检测限为0.01μg.mL^-1。本方法首次成功地应用于羊驼血液中DNA的测定,回收率为96.25%~102.50%,结果令人满意。