超高压辅助酶法制备“甘加”藏羊骨素工艺研究

为提高藏羊骨高值化利用率,本研究以新鲜“甘加”藏羊脊骨为原料,研究其基本营养成分,并采用超高压技术辅助风味蛋白酶制备藏羊骨素酶解液。以水解度为评判指标,采用单因素试验,探究超高压处理压力(250、300、350、400、450MPa)、保压时间(3、6、9、12、15min)、料液比(1∶1、1∶3、1∶6、1∶9、1∶12 g/mL)、酶解时间(1、2、3、4、5h)和加酶量(0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%)对藏羊骨素酶解液水解度的影响,并运用响应面试验优化最佳工艺。结果表明,在酶解时间4h,超高压处理压力360MPa,保压时间6min,料液比1∶3.5g/mL,加酶量0.20%时,水解度达到最高,达16.86%。本研究可为藏羊骨的开发利用提供依据,为骨素的新工艺制备提供参考。

羊骨脂质的组成分析

为了实现羊骨副产物的有效利用和为羊骨油高值化产品开发提供基础数据,以羊腿骨为原料,提取其中的油脂,分别采用高效液相色谱法(HPLC)、多维质谱鸟枪法(MDMS-SL)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对羊骨油的甘油酯组成、脂质组学、脂肪酸组成进行分析。结果表明:羊骨油中甘油三酯含量达到96.76%,还有少量的甘油二酯(1.41%),而甘油一酯未检出;羊骨油中共鉴定出19种酰基肉碱、17种鞘磷脂、37种磷脂酰胆碱、39种甘油三酯,总含量分别为5.76、96.58、85.18 nmol/g和15.76μmol/g;羊骨油中共鉴定出11种脂肪酸,其中饱和脂肪酸含量为11.51%,单不饱和脂肪酸含量为72.34%,多不饱和脂肪酸含量为7.56%。

戊糖片球菌发酵制备高钙离子含量的羊骨酶解液

试验的目的是为了优化戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)发酵羊骨酶解液的工艺,促进游离钙离子的进一步释放。对试验的P.pentosaceus进行驯化,确定了接种量、羊骨酶解液p H值、发酵温度和发酵时间对发酵液中钙离子含量的影响,并通过响应面试验建立数学模型,得出最优解并加以验证。试验结果表明,单因素试验中羊骨酶解液中的游离钙离子浓度分别在发酵温度30℃,起始p H值为6.5,培养时间25 h,接种量为2%时达到峰值,且峰值随着发酵条件的初步优化逐渐增加。通过响应面试验得出的多元回归数学模型达到极显著水平且失拟项不显著(R^2=0.962 2,CV=1.118),故模型可靠,将得出的最优解调整为p H值6.9,接种量3%,30℃培养20 h,发酵液中的游离钙离子含量达到1 910 mg/100 mL。本试验结果表明,戊糖片球菌发酵可促进羊骨酶解液中无机钙质的进一步释放,增强其营养价值和益生功能,产品具有很好的应用前景。

氧化羊骨油对羊肉味调味基料挥发性风味物质的影响

【目的】确定添加适度氧化的羊骨油对热反应型羊肉味调味基料挥发性风味物质的影响,为高品质羊肉味调味基料风味的开发提供理论依据。【方法】评价以过氧化值、酸价和茴香胺值表征的氧化羊骨油对调味基料挥发性风味物质的影响,利用Pen3型电子鼻对不添加羊骨油、添加未氧化羊骨油和添加适度氧化羊骨油的3个热反应体系进行研究,以电子鼻主成分分析中的区分指数作为检测指标,确定3个热反应体系的区分度;应用固相微萃取-气质联用技术分离鉴定基料的挥发性风味物质,通过"相对气味活度值(ROAV)"评价各挥发性风味物质对调味基料总体风味的贡献,并结合聚类分析方法,确定添加氧化羊骨油后羊肉味调味基料的关键挥发性风味物质。【结果】电子鼻结果显示,未添加羊骨油与添加未氧化羊骨油的调味基料间区别指数为0.589,未添加羊骨油与添加氧化羊骨油的调味基料间区分指数为0.917,添加未氧化羊骨油与添加氧化羊骨油的调味基料间区分指数为0.787。气质联用结果显示,不添加羊骨油、添加未氧化羊骨油和添加适度氧化羊骨油的3组调味基料中挥发性风味物质的种类分别为42种、63种和61种,主要为醛类、烃类;在添加未氧化羊骨油组和添加氧化羊骨油组中,含硫、含氮杂环化合物的相对含量差异不显著,而对调味料风味改善贡献较小的烃类物质相对含量显著降低,同时醛类物质的相对含量显著增加,添加羊骨油尤其是氧化羊骨油可使热反应体系生成更多的醛类挥发性风味物质;确定3组调味基料中关键挥发性物质(ROAV≥1)有11种:辛醛、壬醛、癸醛、反,反-2,4-癸二烯醛、桃醛、庚醛、反-2-壬烯醛、十二醛、1-辛烯-3-醇、庚醇、反,反-2,4-壬二烯醛,这些关键挥发性物质主要以脂肪香气为主,并包含甜香、青香、焦香和柑橘等香气;通过聚类分析将11种关键风味物质分为三类,第一类物质在添加氧化羊骨油后ROAV值变化较小;第二类包括反,反-2,4-癸二烯醛、反-2-壬烯醛,在添加氧化羊骨油后ROAV值显著增加;第三类为癸醛,在添加氧化羊骨油后ROAV值显著降低,而第二类与第三类物质在未添加羊骨油组和添加未氧化羊骨油组间的差异不显著(P>0.05)。【结论】添加氧化羊骨油,可以显著影响羊肉味调味基料挥发性风味物质的种类,增强热反应型羊肉味调味基料的风味,反,反-2,4-癸二烯醛与反-2-壬烯醛是改善调味基料最关键挥发性风味物质。

羊骨蛋白酶解物免疫活性及酶解条件的研究

【目的】利用羊骨中胶原蛋白以获得免疫调节活性肽。【方法】利用木瓜蛋白酶对羊骨蛋白进行酶解,采用四元二次通用旋转设计,考察酶用量(E/S)、水解温度(Temp)、水解时间(t)和底物浓度(S)对免疫活性的影响,并选出最佳的酶解条件。同时采用Folin-酚法测定了酶解产物中可溶性肽的含量,采用SAS软件分析可溶性肽含量与免疫活性之间的相关关系。经Design expert7.1.2软件优选最佳酶解条件。【结果】得出木瓜蛋白酶的最佳水解条件为:酶用量(E/S)1576U·g-1,水解温度为(Temp)64.05℃,水解时间(t)7.22h,底物浓度为(S)0.271kg·L-1。可溶性肽含量与免疫活性之间的相关系数r=0.045<r0.05=0.355,因此二者没有相关性。【结论】可溶性肽中含有具有免疫活性作用的肽,但它的含量并不决定免疫性的强弱。

黑藏羊骨营养价值分析及与湖羊骨营养价值对比

为研究黑藏羊骨的营养价值,采集青海省贵南县黑藏羊肱骨,分析骨硬度、水分、灰分、粗脂肪、粗蛋白、多肽含量、游离氨基酸和脂肪酸含量及组成,并与湖羊骨进行对比分析。结果显示,黑藏羊骨与湖羊骨硬度无显著差异;黑藏羊骨水分、粗脂肪、粗蛋白含量均极显著高于湖羊骨(P<0.01),多肽含量显著高于湖羊骨(P<0.05),灰分含量极显著低于湖羊骨(P<0.01);黑藏羊骨总氨基酸、必需氨基酸、鲜味氨基酸含量均极显著高于湖羊骨(P<0.01),且黑藏羊骨具有较高的氨基酸评分、化学评分和必需氨基酸指数;黑藏羊骨总脂肪酸、饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸含量均极显著高于湖羊骨(P<0.01),n-6/n-3比值也显著高于湖羊骨(P<0.05)。

羊骨酶解物的免疫调节活性研究

以羊骨粉为底物,用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶制备复合酶解物,用不同的剂量给小鼠灌胃(ig.),通过碳粒廓清试验、噻唑蓝法以及定量溶血法检测不同剂量酶解物对小鼠非特异性免疫、细胞免疫以及体液免疫功能的影响。结果表明:低剂量(0.5g/kg.d,ig,14d)可显著提高小鼠吞噬细胞清除碳颗粒的能力(P<0.05),中剂量(1g/kg.d,ig,14d)和高剂量(3g/kg.d,ig,14d)组的吞噬能力与对照组无显著差异(P>0.05)。但这2个剂量却使小鼠脾脏B淋巴细胞合成的抗体量显著高于对照组(P<0.05),且中剂量组显著高于高剂量组(P<0.05)。0.01mg/ml复合酶解物显著促进了T淋巴细胞对ConA的反应性(P<0.05)。因此适当剂量的羊骨酶解物,能提高小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫能力。

羊骨酶解发酵液钙鳌合物对骨质疏松大鼠骨密度和骨代谢生化指标的影响

目的探讨羊骨酶解发酵液钙螯合物(SBEF-Ca)对雌激素缺乏造成的骨质疏松的防治作用。方法 40只3.5月龄的Sprague-Dawley大鼠,按体重随机分为正常组(假手术+蒸馏水)、模型对照组(去卵巢+蒸馏水)和高、中、低3个剂量组(去卵巢+SBEF-Ca)。术后12 d,持续灌胃11周后,测定股骨密度、长度以及血清中反映骨代谢的主要生化指标。结果模型对照组大鼠股骨密度和长度显著减小,各剂量组均可扭转这种减小趋势并使股骨密度和长度维持在正常组水平,其中高剂量组的股骨密度显著大于中、低剂量组;各剂量组的股骨长度差异不显著;所有大鼠的血Ca、血P水平差异无显著性;模型对照组的血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)水平明显升高,而各剂量组的ALP、BGP水平与正常组差异不显著,且高剂量组ALP水平显著低于中、低剂量组,中、高剂量组的BGP水平(P>0.05)显著低于低剂量组。结论低、中、高剂量的SBEF-Ca对绝经后骨质疏松症有预防作用。

羊骨蛋白酶解物热反应制备羊肉香精的研究

以低值羊骨蛋白酶解液为原料,通过Maillard反应制备羊肉香精。研究结果表明:添加不同水解度的羊骨酶解液对羊肉香气的形成有明显差异(p<0.001),添加水解度为25.92%～30.29%的羊骨蛋白酶解液对羊肉香精整体风味的提升有重要作用。采用均匀设计优化Maillard反应最优配方和最佳条件:羊骨酶解液100.0g、反应初始pH6.5、温度125℃、时间180min、半胱氨酸1.369g、丙氨酸0.2g、牛磺酸2.5g、硫胺素2.5g、葡萄糖4.0g、水解植物蛋白1.428g、氧化羊脂12.0g。

热处理对羊骨胶原蛋白结构的影响

为明确热处理对胶原蛋白三螺旋结构域的影响,采用红外光谱分析了胶原蛋白在脱水和水溶液两种加热环境下的结构变化规律。结果表明,脱水和水溶液两种加热环境下,胶原蛋白二级结构含量变化规律相同,溶液状态下胶原蛋白对温度更加敏感;随温度的升高,其主要吸收峰发生迁移,三螺旋结构解旋,α-螺旋含量降低,无规则卷曲含量增加,分子结构逐渐舒展,无序性增大。二维红外相关光谱结果表明,脱水和水溶液两种加热环境下,胶原蛋白基团对温度的响应顺序不同,脱水加热时,脯氨酸CH3基团摇摆振动先作出响应,而水溶液加热时,N-H弯曲振动先作出响应。

采用酶解和发酵联用技术提高羊骨中钙转化率

利用酶解和发酵联用技术,以提高羊骨中钙转化率为目的,研究了提高羊骨中钙的生物利用率的工艺条件。试验是在羊骨酶解物的基础上进一步发酵,以发酵液中游离Ca2+含量为考核指标,从植物乳杆菌、戊糖片球菌、嗜热乳酸链球菌、丁二酮乳酸链球菌和嗜酸乳杆菌中筛选出优势菌种,得出植物乳杆菌和戊糖片球菌以1∶1混合时,发酵效果较好。以混合菌种的接种量、发酵时间、葡萄糖添加量为试验因子,采用三因子二次通用旋转设计试验,确定了优势菌种的最佳工艺条件。试验结果表明,原酶解液中可溶性钙含量为1105mg/100mL,发酵后可溶性钙含量增至2538mg/100mL,最大转化率为56.7%,其优化的发酵条件为接种量(植物乳杆菌和戊糖片球菌1∶1配合)8.7%,发酵时间18.9h,葡萄糖添加量3.93%。

羊骨木瓜蛋白酶水解物对小鼠免疫功能的影响

目的探讨不同剂量的羊骨木瓜蛋白酶水解物对健康小鼠免疫功能的影响。方法按体质量将ICR小鼠分成对照组(0g/(kg·bw))及低(0.5g/(kg·bw))、中(1.0g/(kg·bw))、高(3.0g/(kg·bw))3个剂量组,分别以碳粒廓清试验和溶血试验评价水解物对非特异性免疫和体液免疫的影响;以噻唑蓝分光光度法评价低(0.01mg/mL)、中(0.1mg/mL)、高(1mg/mL)不同浓度水解物对细胞免疫功能的影响。结果只有中剂量水解物才能显著提高吞噬细胞的吞噬能力;3个剂量组小鼠脾细胞的抗体生成量均显著高于对照组,但高剂量组显著低于中、低剂量组;3个浓度的酶解物均能促进体外ConA诱导的T淋巴细胞增殖活性,但高浓度的促分化效果不如低浓度和中浓度。结论羊骨木瓜蛋白酶水解物能增强小鼠的特异性和非特异性免疫功能,但这种免疫促进作用与剂量并不呈线性关系。

二次旋转正交组合设计优化羊骨蛋白酶解工艺

以新鲜羊骨为原料,选用碱性蛋白酶和风味蛋白酶按序分步水解羊骨蛋白,采用二次旋转正交组合设计优化双酶水解羊骨蛋白工艺条件。结果表明,在初始pH为8.5,初始温度为55℃,羊骨蛋白的最佳酶解方案为:底物浓度为10%,碱性蛋白酶添加量为3000u/g,作用时间为5h;风味蛋白酶添加量为3500u/g,作用时间为3.5h。

中性蛋白酶酶解羊骨产物抗菌性的研究初探

研究利用中性蛋白酶对羊骨进行酶解,采用五因素五水平正交旋转设计对羊骨进行酶解,以抗菌率为指标,对酶解条件进行优化,并对最优条件下所得产物的抗菌性进行详细对照评定。以大肠杆菌、枯草杆菌和藤黄球菌为供试菌种。结果发现,第21组酶解液(即酶浓度200U/g,底物浓度1:3,时间6h,酶解温度50℃,pH值为7.0)的抗菌性相对较强,但其抗菌性的强度相当于0.015%￣0.019%亚硝酸钠溶液的抑菌力。21号酶解液对大肠杆菌、枯草杆菌和藤黄球菌在第4h￣10h的生长时间范围内,表现出明显的抑制作用。

羊骨酶解物中降血压肽的分离、纯化工艺研究

对不同pH和温度等条件下的羊骨酶解物新中7号和中14号进行Sephadex G-25层析,并对层析后的收集液冷冻干燥,利用Tricine-SDS-PAGE电泳检测其分子量。结果表明:(1)新中7号和中14号羊骨酶解物,酶解8h的ACE活性最高;(2)新中7号羊骨酶解物酶解8h分离出来的蛋白质谱带的分子量在20100u以上,酶解10h分离出来的蛋白质谱带的分子量在7823u以上;(3)中14号羊骨酶解物酶解6h分离出来的蛋白质谱带的分子量14400u以上,酶解8h分离出来的蛋白质谱带的分子量在20100u以上。

羊骨胶原钙螯合肽酶解工艺的研究

本试验采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶四种蛋白酶酶解羊骨胶原蛋白,以酶解液中游离钙含量为试验指标,采用正交实验以及极差分析法确定了酶解羊骨蛋白获得胶原钙螯合肽的最佳用酶和酶解工艺条件。试验结果表明:胃蛋白酶为最佳用酶,最佳酶解工艺条件为:酶解时间6h,底物浓度为0.2kg/L,酶用量为1900U/g,酶解温度37℃,最适pH值3.0。酸性条件有利于钙的溶出。

羊骨汤不同酶解方式对其成分的影响

将羊骨以1:1的骨水比于0.05MPa高压2.0h后,再以不同的酶、酶浓度和酶解时间酶解骨汤,分析水解度(DH)、肽链长度(PCL)及游离钙含量的变化,并各筛选最优方案。结果表明:①游离钙含量最高:中性蛋白酶,酶浓度1500U/L,酶解6h;②DH最高:胰蛋白酶,酶浓度1:100,酶解6h;③PCL值最低:胰蛋白酶,酶浓度1:125,酶解6h;PCL值最高:碱性蛋白酶,酶浓度1500U/L,酶解8h。

羊骨降血压肽制备工艺的研究

试验以羊骨为原料,采用酶技术,优选降血压活性最高的酶及其最佳酶解条件。结果表明:中性蛋白酶水解羊骨所得的ACE抑制率最高,达66.0%,其酶解条件为:酶浓度为100 U·g-1、底物浓度为25%、pH值7.0、温度为50℃、时间6 h。

SephadexG-25对羊骨胶原降血压肽的分离纯化效果研究

利用中性蛋白酶酶解羊骨得到羊骨胶原降血压肽粗品的基础上,研究Sephadex G-25凝胶过滤层析方法对羊骨胶原降血压肽粗品的分离纯化效果。结果显示:Sephadex G-25凝胶过滤层析将分子质量大于5000D的大分子滤去,得到了峰1和峰2两种多肽产品,其血管紧张素转化酶(ACE)抑制率均达到92%以上。采用飞行质谱对峰1和峰2多肽产品的分子质量进行质谱测定,肽质量指纹图谱显示,利用SephadexG-25凝胶过滤层析方法,并不能得到羊骨胶原降血压肽纯品,峰1和峰2均由多组分组成,分别出现30多个片段,其中峰1中肽峰最高处的分子质量为1077.36D,而峰2中肽峰最高处的分子质量为1048.47D。峰1的氨基酸总量为23.49g/100g,而峰2的氨基酸总量为8.32g/100g,两个峰均含有人体所需要的8种必需氨基酸,且甘氨酸、脯氨酸和谷氨酸3种非必需氨基酸含量相对比较高。

羊骨不同前处理条件对骨渣及骨汤中有效成分的影响

以羊骨为原料,采用不同压力、时间和骨水比高压羊骨,分析骨渣及骨汤中蛋白质、氨态氮和脂肪的变化,并分别筛选最优方案。结果表明:①在0.05MPa压力下,高压2.0h、骨水比为1∶2时,骨渣及骨汤的蛋白质含量均较高;②在0.10MPa压力下,高压3.0h、骨水比为1∶4时,骨渣中氨态氮含量较高;③在0.13MPa压力下,高压4.0h,骨水比1∶2时,骨汤中氨态氮含量较高;④在0.13MPa压力下,高压4.0h、骨水比为1∶2时,骨汤中脂肪含量最高。