美洲大蠊提取物Ento-A对噁唑酮致大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用研究

目的:研究美洲大蠊提取物Ento-A对噁唑酮(OXZ)诱导大鼠溃疡性结肠炎(UC)的疗效,并初步探讨其作用机制。方法:将雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪组和美洲大蠊提取物Ento-A低、中、高剂量组,除正常对照组外,其余各组以噁唑酮溶液诱导大鼠溃疡性结肠炎模型。测定疾病活动指数(DAI)、脏器指数、结肠黏膜损伤指数(CMDI)和病理组织学评分(HS),检测血清IL-4、IL-10、iNOS及结肠黏膜中MPO、EGF水平,评价药物对UC大鼠的疗效。结果:与正常对照组比较,模型组血清IL-4、IL-10及结肠组织EGF水平显著降低,CMDI评分、HS评分、血清iNOS、结肠指数及结肠MPO活性显著升高。美沙拉嗪组及Ento-A各剂量组上述指标均得到不同程度改善。结论:美洲大蠊提取物Ento-A灌肠能有效缓解噁唑酮诱导的大鼠UC,其作用机制可能与下调iNOS、MPO水平,上调IL-4、IL-10及EGF水平有关。

美洲大蠊提取物Ento-A对大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用

为了探究美洲大蠊提取物Ento-A对大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用。使用康复新液、西咪替丁、美洲大蠊提取物Ento-A高、低剂量灌胃大鼠,每天1次,连续8 d;末次给药后1 h,灌胃80%乙醇与20 mg/mL水杨酸钠溶液的等体积混合液建立急性胃黏膜损伤模型,90 min后观察胃黏膜损伤情况。酶联免疫法检测血清中PGE 2、COX-2、CRP的水平及胃组织匀浆中TGF-β1的水平。结果显示,与模型对照组比较,康复新液、西咪替丁及美洲大蠊提取物Ento-A能显著降低急性胃炎大鼠血清中COX-2、PGE 2、CRP的表达(P<0.01),并能显著提升胃组织匀浆中TGF-β1的水平(P<0.01)。表明美洲大蠊提取物Ento-A可明显减轻大鼠急性胃炎的损伤程度,可能与降低血清PGE 2、COX-2、CRP的水平及升高胃组织匀浆中TGF-β1的水平有关。

美洲大蠊提取物Ento-A对湿热型溃疡性结肠炎模型大鼠的改善作用研究

目的:研究美洲大蠊提取物Ento-A对湿热型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠的改善作用。方法:将70只大鼠随机分为正常对照组(n=8)和造模组(n=62),造模组大鼠采用高糖高脂、辛辣饮食联合2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制湿热型UC动物模型。将造模成功的48只大鼠随机分为模型对照组、美沙拉嗪组(300 mg/kg)、肠炎宁(300 mg/kg)和Ento-A低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg,以提取物计),每组8只。正常对照组和模型对照组大鼠灌胃生理盐水,其余各组大鼠灌胃相应药物,每天1次,连续给药14 d。末次给药后,对大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤指数(CMDI)及病理组织学(HS)进行评分,测定大鼠脾指数、肝指数和结肠指数,并采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中白细胞介素8(IL-8)、IL-17、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平和结肠组织中IL-2、前列腺素E2(PGE2)、髓过氧化物酶(MPO)水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠DAI评分、CMDI评分、HS评分、结肠指数以及血清中IL-8、IL-17、MDA水平和结肠组织中MPO、PGE2水平显著升高(P<0.01),血清中SOD水平和结肠组织中IL-2水平显著降低(P<0.01)。与模型对照组比较,Ento-A高剂量组大鼠DAI评分、CMDI评分及血清中IL-17、MDA水平和结肠组织中PGE2水平显著降低(P<0.05或P<0.01),血清中SOD水平和结肠组织中IL-2水平显著升高(P<0.01);Ento-A中剂量组大鼠CMDI评分、HS评分以及血清中IL-8、IL-17、MDA水平和结肠组织中PGE2、MPO水平显著降低(P<0.05或P<0.01),结肠组织中IL-2水平显著升高(P<0.01);Ento-A低剂量组大鼠HS评分以及血清中IL-17、MDA水平和结肠组织中MPO、PGE2水平显著降低(P<0.05或P<0.01),血清中IL-2水平显著升高(P<0.01)。结论:美洲大蠊提取物Ento-A可能通过调节免疫系统平衡、减少炎症损伤,发挥其对湿热型UC模型大鼠的改善作用。

美洲大蠊提取物对便秘模型小鼠的影响

目的观察不同剂量美洲大蠊提取物对慢传输型便秘模型小鼠排便功能的影响。方法35只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组及美洲大蠊提取物高、中、低剂量组,每天给予盐酸洛哌丁胺灌胃造模及不同浓度的美洲大蠊提取物进行干预治疗,记录各组小鼠给药后粪便排泄数量及湿重;在实验结束前,收集各组小鼠粪便,采用16S rRNA分析其肠道菌群变化;同时测定各组小鼠首次排红便时间及小肠推进率。结果与对照组相比,模型组小鼠的粪便湿重、粒数,肠道推进率均降低;而排红便时间延长(P<0.01)。与模型组相比,各美洲大蠊治疗组小鼠的粪便湿重、粒数及小肠推进率增加,而排红便时间降低(P<0.05或P<0.01)。16S rRNA分析显示美洲大蠊提取物可明显提升便秘小鼠肠道粪便中Lachnospiraceae NK4A136和酸性拟杆菌、Alistipes、Rikenella microfusus DSM 15922细菌的丰度。结论美洲大蠊提取物能够缓解盐酸洛哌丁胺诱导的小鼠便秘,其作用机制与调节肠道菌群有关。

美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p16^(INK4a)诱导SKOV3细胞衰老

目的探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p16^(INK4a)蛋白诱导卵巢癌细胞SKOV3衰老的作用。方法通过CCK-8法测定不同浓度和时间美洲大蠊提取物CⅡ-3对SKOV3细胞增殖的作用;运用细胞集落形成实验测定美洲大蠊提取物CⅡ-3对SKOV3细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞周期的变化;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞衰老变化;Western Blotting检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达的变化。结果美洲大蠊提取物CⅡ-3可有效抑制SKOV3细胞增殖,最佳作用浓度为80μg/mL,作用时间为48 h;CⅡ-3作用后,SKOV3细胞集落形成能力下降;阻滞于G_(0)/G_(1)期细胞比例增高,S期细胞比例减少;SA-β-Gal阳性细胞百分比增加;衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达上调。结论美洲大蠊提取物CⅡ-3通过调控衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达诱导SKOV3细胞衰老。

美洲大蠊提取物CⅡ-3对肝癌TAE术后细胞黏附分子水平的影响及其对肝脏的保护作用

目的 探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3对肝癌经导管动脉栓塞(transcatheter arterial embolization, TAE)术后癌旁肝组织细胞黏附分子水平的影响及其对肝脏的保护作用。方法 东南大学荷瘤兔2只,新西兰大白兔50只。开腹瘤粒注射法建立兔VX2肝癌模型,影像学确认是否造模成功并评估肿瘤种植情况。将成功建模的45只实验兔随机分为3组,每组15只。对照组不做处理,TAE组用碘化油栓塞肿瘤供血动脉,CⅡ-3组于TAE术前连续3 d耳缘静脉注射CⅡ-3(16 mg/kg)。化学比色法检测各组实验兔术前及术后血清ALT及AST。免疫组化法检测各组癌旁肝组织PPAR-α、NF-κB表达水平。ELISA法检测各组癌旁肝组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平。RTPCR检测各组癌旁肝组织PPAR-α、NF-κB、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平。结果术前对照组、TAE组、CⅡ-3组ALT水平分别为(34.49±1.33)、(34.01±1.21)、(34.06±1.23) U/L,AST水平分别为(38.44±1.41)、(38.45±1.47)、(38.42±1.38) U/L,差异无统计学意义(P>0.05);术后对照组、TAE组、CⅡ-3组ALT水平分别为(35.61±1.56)、(118.67±3.39)、(87.24±3.67) U/L,AST水平分别为(41.03±1.83)、(220.60±3.00)、(104.46±2.66) U/L;与对照组比较,TAE组、CⅡ-3组ALT及AST水平明显上升,但CⅡ-3组ALT及AST水平低于TAE组,差异均有统计学意义(P<0.01)。对照组、TAE组、CⅡ-3组ICAM-1水平分别为(1.74±0.13)、(3.43±0.19)、(1.81±0.13) ng/L;VCAM-1水平分别为(1.66±0.05)、(2.18±0.06)、(1.67±0.06) ng/L。对照组、TAE组、CⅡ-3组PPAR-α阳性分别为4、3、10只,NF-κB阳性分别为2、11、3只,与对照组、CⅡ-3组比较,TAE组NF-κB阳性率、NF-κB mRNA水平和ICAM-1、VCAM-1蛋白及mRNA水平明显升高;与对照组、TAE组比较,CⅡ-3组PPAR-α蛋白及mRNA水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 CⅡ-3可通过拮抗NF-kB的表达,降低ICAM-1、VCAM-1水平,达到减轻炎症反应,降低TAE术后肝损伤的作用。

美洲大蠊提取物泡腾片制备及质量评价

采用单因素实验和响应面试验对美洲大蠊提取物泡腾片的处方工艺进行探究及质量评价。以崩解时间、pH、发泡量及感官评价为指标,最佳工艺为:美洲大蠊提取物5.0%、酸碱比例1∶1.21、PVP-K301.35%、PEG60005.37%、矫味剂10%、填充剂38.28%。工艺验证试验其崩解时间、片重差异、pH、发泡量、硬度及脆碎度均符合《中国药典》2020年版对泡腾片的质量标准,泡腾片表面光滑呈淡黄色,甜度适中,冲调后澄清度良好。

美洲大蠊鲜虫提取物对慢性难愈合创面组织中PI3K、Akt、mTOR、VEGF蛋白表达的影响

目的:探索美洲大蠊鲜虫提取物对慢性难愈合创面的疗效与机制。方法:用BALB-3T3细胞进行细胞增殖、划痕和transwell实验,免疫印迹法检测细胞上清液中PI3K、Akt、mTOR和VEGF蛋白表达水平;构建大鼠慢性难愈合创面模型,在造模第0、4、8、12、15 d拍照记录创面,计算创面愈合率;每组随机抽取3只取材,用免疫印迹法检测组织中PI3K、Akt、mTOR和VEGF蛋白表达水平。结果:美洲大蠊鲜虫提取物显著促进BALB-3T3细胞的增殖和迁移(P<0.01),且细胞上清液中VEGF蛋白表达量上升(P<0.05);与模型组比较,美洲大蠊鲜虫提取物高、中、低剂量组、康复新液组和急性创面组创面愈合率增加(P<0.05或P<0.01);蛋白免疫印迹结果显示,与慢性模型组比较,美洲大蠊鲜虫提取物胶浆剂高、中、低剂量组、康复新液组和急性创面组PI3K、Akt、mTOR和VEGF蛋白表达量上升(P<0.05或P<0.01)。结论:美洲大蠊鲜虫提取物可促进BALB-3T3细胞的增殖和迁移,并上调PI3K、Akt、mTOR和VEGF蛋白表达来促进慢性难愈合创面的愈合。

美洲大蠊提取物对小鼠3LL肺癌的抑制作用及其机制探讨

背景与目的美洲大蠊系列昆虫药品康复新在体外能诱导多种肿瘤细胞系发生细胞凋亡。本研究旨在探讨美洲大蠊提取物对C57BL/6J小鼠3LL肺癌的抑制效应及其作用机制。方法荷3LL肺癌的C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水组、美洲大蠊提取物高、低剂量组,通过检测各组小鼠的体重变化和抑瘤率,应用流式细胞术进行DNA倍体分析、TUNEL分析和凋亡相关基因表达改变的检测。结果与生理盐水组比较,美洲大蠊提取物高、低剂量组的抑瘤率分别为41.24%及81.08%。流式细胞术检测美洲大蠊提取物能诱导肿瘤细胞凋亡,随着药物剂量的增高,其凋亡率也升高,S期及G2/M期细胞数大量减少,细胞被阻滞在G0/G1期;流式细胞术TUNEL检测结果显示,细胞凋亡和坏死同时存在。流式细胞法分析3LL肺癌细胞凋亡相关基因显示,无论是低剂量组还是高剂量组,美洲大蠊提取物均能上调Fas、FasR、p53等凋亡基因表达,下调Bcl-2抑制凋亡基因表达。结论美洲大蠊提取物对3LL肺癌生长具有一定的抑制作用,能促进肿瘤细胞凋亡,其机制可能与调控细胞凋亡相关基因的表达有关。

美洲大蠊提取物对3株人体生殖系统肿瘤细胞的细胞毒性研究

目的通过对美洲大蠊提取物的肿瘤细胞毒性测试,探讨美洲大蠊提取物的抗肿瘤作用。方法美洲大蠊醇提物,通过聚酰胺柱层析分离划段得不同部位,采用MTT法对所得部位进行肿瘤细胞毒性测试。结果有多个部位样品的IC50值小于10mg·mL-1。结论通过样品与对照品细胞毒活性结果比较,表明美洲大蠊提取物中存在具有肿瘤细胞生长抑制作用的物质,值得对其进行进一步的研究。

美洲大蠊提取物对实验性肝纤维化的影响

目的探讨美洲大蠊提取物对四氯化碳(CCl4)所致实验性肝纤维化的影响。方法采用CCl4复制小鼠肝纤维化模型,同时用0.25g/kg的美洲大蠊提取物灌胃治疗,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ),IV型胶原(IV-C),层粘蛋白(LN),并以光镜现察肝脏组织学改变,进行炎症活动度分级及肝纤维化分期。结果美洲大蠊提取物有降低ALT,AST的作用,并显能著降低HA,LN,PCⅢ和Ⅳ-C。经治疗后的肝胜细胞变性、坏死及纤维组织增生明显减少。结论美洲大蠊提取物具有抗实验性肝纤维化的作用。

美洲大蠊乙酸乙酯提取物的分离和抑菌活性分析

采用活性追踪法和柱层析法,以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等5种细菌为供试菌种,对美洲大蠊乙酸乙酯提取物进行分离和抑菌试验。研究发现:美洲大蠊乙酸乙酯提取物对供试的革兰氏阳性菌具有一定的抑制作用,其中,对枯草芽孢杆菌的抑菌活性最好;经硅胶柱层析初分离后,从乙酸乙酯提取物获得了9个具有抑菌活性的组分,其中,组分Fr7对5种供试菌均显示了较好的抑菌活性;组分Fr7及其相邻组分Fr8经硅胶和凝胶柱层析进一步分离纯化后,得到了7个具有抑菌活性的不饱和脂肪酸类化合物,均对藤黄微球菌表现出最好的抑菌活性。结果表明:美洲大蠊乙酸乙酯提取物的抑菌活性物质为不饱和脂肪酸类化合物,对供试的革兰氏阳性菌的抑菌活性较强。

美洲大蠊提取物对3株消化系统肿瘤细胞的细胞毒性研究

目的探讨美洲大蠊提取物的抗肿瘤作用。方法通过聚酰胺柱层析分离划段得到美洲大蠊醇提物的不同部位,采用四甲基偶氮唑盐比色法(M TT法)对所得部位进行体外肿瘤细胞毒性测试。结果多个部位样品的半数抑制浓度(IC50)值小于10μg/m L。结论美洲大蠊提取物中确实存在具有肿瘤细胞生长抑制作用的物质,值得进一步研究。

美洲大蠊水提取物对免疫性肝纤维化大鼠的保护作用

目的研究美洲大蠊水提取物对免疫性肝纤维化大鼠的保护作用及部分机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、美洲大蠊30 mg/kg、60 mg/kg和120 mg/kg组和秋水仙碱物组,每组10只。免疫性肝纤维化模型通过大鼠腹腔注射猪血清制备,0.5 ml/kg,每周2次,共12周。造模期间给药组分别给予相应的受试药物,正常组和模型组分别给予等剂量的生理盐水。于造模给药结束后处死大鼠,测定肝脾指数;收集外周血,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原酶(PCⅢ)和Ⅳ型胶原酶(CⅣ)含量;取肝脏,HE、Masson染色观察肝组织病理及胶原沉积变化;制备肝脏匀浆,ELISA法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;免疫组织化学和Western blot法测定肝组织中α-SMA、TGF-β1蛋白的表达。结果与模型组比较,美洲大蠊(30、60、120 mg/kg)能降低肝纤维化大鼠升高的肝脾指数,降低血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平,降低肝组织MDA含量,提高SOD及GSH活性,减轻大鼠肝脏病理损伤程度,减少肝组织中α-SMA、TGF-β1的表达。结论美洲大蠊水提取物对猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠有显著的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用及抑制TGF-β1的表达有关。

紫茎泽兰提取物对美洲大蠊和米蛾的忌避活性

应用“Y”型嗅觉仪和培养皿用紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)提取物对美洲大蠊Periplaneta americana(L.)和米蛾Corcyra cephalonica(Stainton)的忌避效果进行生物测定。结果表明,紫茎泽兰精油0·028g/L剂量对美洲大蠊忌避活性最高,平均忌避活力为78·28%,显著高于粗提物各剂量的忌避活力,而对米蛾幼虫生物测定的结果表明,10g/kg粗提物的剂量对其忌避效果最好,平均忌避活力为80·86%。

美洲大蠊提取物对3株人体呼吸系统肿瘤细胞的细胞毒性研究

目的通过2对美洲大蠊提取物的肿瘤细胞毒性测试,探讨美洲大蠊提取物的抗肿瘤作用。方法美洲大蠊醇提取物,通过聚酰胺柱层析分离划段得不同部位,采用MTT法对所得部位进行肿瘤细胞毒性测试。结果有多个部位样品的IC50值小于10μg/ml。结论通过样品与对照品细胞毒活性结果比较,表明美洲大蠊提取物中存在具有肿瘤细胞生长抑制作用的物质,值得对其进行进一步的研究。

美洲大蠊提取物体外抑制牙龈卟啉单胞菌的生长

目的研究美洲大蠊提取物对体外培养的牙龈卟啉单胞菌的抗菌活性。方法以牙龈卟啉单胞菌ATCC33277为实验菌株,对倍稀释法测定美洲大蠊提取物的最低抑菌质量浓度(MIMC)和最低杀菌质量浓度(MBMC);在不同质量浓度的美洲大蠊提取物的牛脑心浸液培养液中培养牙龈卟啉单胞菌,分别于培养0、4、8、12、24和48h时测定细菌悬液的光密度值(D590)。结果美洲大蠊提取物对牙龈卟啉单胞菌的MIMC和MBMC分别为2.5g·L-1和5g·L-1,对牙龈卟啉单胞菌生长的抑制作用随其质量浓度的增加而增强。结论美洲大蠊提取物对体外培养的牙龈卟啉单胞菌的生长有抑制作用,其可能具有较强的防治牙周疾病的作用。

美洲大蠊不同溶剂提取物对肝星状细胞增殖的影响

目的探讨美洲大蠊提取物ML-A(水提取物)、ML-B(乙醇提取物)、ML-C(正丁醇提取物)、ML-D(乙酸乙酯提取物)对肝星状细胞株(HSC)增殖的影响。方法采用MTT法测定美洲大蠊不同溶剂提取物(ML-A、ML-B、ML-C、ML-D)在24h、48h、72h对肝星状细胞增殖的作用。结果与阴性对照组比较,24h、48h、72h美洲大蠊不同溶剂提取物均在高浓度(1000μg/ml)下抑制HSC增殖,且呈时间依赖性与浓度依赖性。结论美洲大蠊不同溶剂提取物对HSC的增殖均有抑制作用,其中ML-B抑制HSC的增殖作用最强。

美洲大蠊提取物对重型颅脑损伤患者的胃肠黏膜屏障功能的影响

目的研究美洲大蠊提取物对重型颅脑损伤患者胃肠黏膜屏障功能的影响。方法2009-01—2011-01随机将42例重型颅脑损伤患者分为治疗组和对照组，对照组给予相应综合抢救措施，治疗组在对照组救治基础上给予美洲大蠊提取物。分别观察患者治疗前、治疗后1、3、7dAPACHEII评分、胃肠功能评分变化。记录应激性消化道溃疡、死亡的发生率。结果治疗前两组APACHEII评分、胃肠功能评分比较差异无统计学意义（P〉0，05）；治疗后3、7d治疗组APACHEII评分、胃肠功能评分明显降低，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；7d内治疗组应激性消化道溃疡发生率低于对照组（P〈0．05）。结论美洲大蠊提取物对重型颅脑损伤患者的胃肠黏膜屏障功能具有保护作用，能在一定程度上改善重型颅脑损伤患者的病情。

美洲大蠊提取物对肝纤维化大鼠NF-κB和α-SMA表达的影响

目的探讨美洲大蠊提取物(APA)对实验性肝纤维化组织中核转录因子-κB(NF-κB)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,并观察APA的抗纤维化疗效。方法采用四氯化碳复制大鼠肝纤维化模型,同时用0.5g/kg的APA灌胃治疗,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、清蛋白(Alb)水平。免疫组化测定肝组织中NF-κB和α-SMA表达的水平,并以光镜观察肝病理组织学改变,进行炎性活动度分级及纤维化分期。结果 APA可以降低血清中ALT、AST和肝组织中NF-κB、α-SMA的水平,APA组和三七丹参组与模型组相比血清中Alb水平差异有统计学意义,用药后的肝脏细胞变性坏死及纤维化程度明显降低。结论 APA具有一定的抗纤维化作用,机制可能与其抑制肝组织中NF-κB和α-SMA的表达有关。