美洲莲地下茎顶芽离体培养

以美洲莲地下茎顶芽为外植体,主要对消毒处理方法、顶芽初代培养激素种类及其浓度进行摸索,并比较取材时间和培养温度对顶芽离体培养成苗的影响。研究表明:对顶芽采取消毒后去掉一层鳞片再消毒,或在此基础上再去掉一层鳞片,将去掉一层或两层鳞片后的剩余部分接种至含有0.1%植物组培抗菌保护剂(Plant preservative mixture,PPM)或250 mg∕L头孢霉素的培养基中培养,污染率能降低到10.71%—15.99%。外植体在含3 mg∕L激动素(Kinetin,KT)+0.2 mg∕L萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid,NAA)的MS(Murashige and Skoog)培养基上培养1个月后转移至含1 mg∕L KT+0.1 mg∕L NAA的培养基上,或始终在含2 mg∕L KT+0.2 mg∕L NAA培养基上培养,能获得较好的成苗和增殖效果。10—12月份冬季休眠期的芽比3—5月份春季萌芽期至营养生长前期的芽更易培养成苗。30℃较25℃培养更利于顶芽的成苗。该研究建立的美洲莲地下茎顶芽离体培养体系可为该物种的推广应用以及试验研究提供一致性的材料和技术支持。

美洲莲分子鉴定方法的建立

美洲莲仅分布于北美洲和中美洲地区,其独特的淡黄色花色显著区别于亚洲莲的花色,因此在国内花卉市场显得尤其珍贵,并可作为良好的育种亲本。但由于美洲莲的不同居群在花色深浅和花被形态方面存在一定的多样性,并且随着亚美杂交莲品种越来越多,部分品种在形态上同美洲莲非常近似,可能导致资源圃中的美洲莲亲本出现不纯的情况。因此,如何鉴定纯种的美洲莲一直是困扰荷花育种和花卉企业的一个重要问题。本研究发现美洲莲APETALA 3(AP3)基因组ATG下游1107~1192 bp处存在86 bp碱基缺失,利用此特点。建立了一种快速鉴定美洲莲基因型的分子检测方法,在种子苗期或种藕阶段即可快速进行美洲莲纯种的鉴定,该方法的建立将在莲属资源的科学保护及管理、保证取材的准确性、育种和资源交流过程中具有很好的应用潜力。