美金胺、黄芪对新生大鼠脑缺氧缺血再灌注损伤的保护作用

目的 评价美金胺和黄芪对新生大鼠缺氧缺血再灌注损伤的脑保护作用。方法 通过夹闭新生大鼠双侧颈总动脉 1h、缺氧 2h ,建立脑缺氧缺血再灌注损伤模型。将新生大鼠随机分成正常对照组、假手术组、缺氧缺血再灌注组 (HIR组 )、美金胺治疗组、黄芪治疗组、黄芪和美金胺联合治疗组 ,每组 12只 ,于术后 6h或 4 8h处死。取耳间线前 2mm水平做冠状位脑组织切片 ,通过脑组织病理检查及病理评分评估美金胺和黄芪的脑保护效果。结果 缺氧缺血可引起新生大鼠明显的脑病理改变 ,经单独或联合应用黄芪和美金胺后 ,新生大鼠的脑病理改变明显减轻 ,各治疗组病理评分均显著低于缺血再灌注组。结论 美金胺和黄芪对治疗新生儿脑缺氧缺血损伤可能具有一定的潜在意义 ,尤其两药联合治疗新生儿脑缺氧缺血损伤 。

美金胺对脑缺氧缺血新生大鼠热休克蛋白70基因表达的影响

近来报道非竞争性NMDA受体拮抗剂美金胺 (Memantine)对缺氧缺血损伤 (HI)具有脑保护作用。在对HI新生大鼠先行进行了HSP70基因表达的研究基础上 ,对新生大鼠在HI前后对照应用美金胺 ,通过观察HSP70基因表达的变化 ,进一步从分子水平评估美金胺的脑保护效果。结果显示 ,HSP70mRNA在正常情况下仅有极微弱表达 ,HI后可引起其表达明显增加。应用美金胺后 ,其HSP70基因表达虽较正常对照组增高 ,但显著弱于HI组 ,提示美金胺的应用具有一定的脑保护作用 ,可能减轻了HI的脑损伤 ,因而使作为一种敏感的脑缺氧缺血标志的HSP70基因的表达降低。数据显示美金胺在HI前应用较之HI后应用似有更明显的脑保护效果 ,尽管统计显示其差异无显著性意义。结合已完成的脑病理研究和病理量化评分 ,初步证实美金胺作为较安全有效的NMDA受体离子通道非竞争性拮抗剂 。

美金胺治疗对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠长期预后的影响研究

目的动物实验已证明美金胺对缺氧缺血脑损伤具有神经保护作用,但是美金胺治疗能否改善脑缺氧缺血大鼠的长期预后,目前尚无有关研究资料。该研究应用Morris水迷宫测试探讨缺氧缺血后即刻使用美金胺对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠长期预后的影响,以期对美金胺的有效性做出全面而客观的评价,为今后建立安全有效的新生儿缺氧缺血性脑损伤的治疗方案提供依据。方法60只7日龄SD大鼠随机分为对照组、缺氧缺血组(HI组)和美金胺20mg/kg治疗组(治疗组)。各组分别于23日龄始连续5d进行Morris水迷宫测试训练,于28日龄和35日龄正式测试,比较各组的逃逸潜伏期(EL)。结果28日龄各组EL(s)值分别为:35.1±5.3(HI组)、20.6±3.4(治疗组)以及23.1±21.8(对照组),其中HI组与对照组在EL值之间的差异有显著性(P<0.05)。35日龄各组EL值(s)分别为:35.6±32.3(HI组)、16.3±13.2(治疗组)以及19.7±16.7(对照组),其中HI组与对照组EL值之间的差异有显著性(P<0.05),HI组和用药组则差异有非常显著性(P<0.01)。结论新生大鼠在脑缺氧缺血后即刻使用美金胺可显著增强其空间辨识和学习记忆功能,改善其长期预后。

美金胺对新生大鼠重复用药的毒理学实验研究

目的通过对新生大鼠进行美金胺的重复用药毒理学实验,从病理学角度探讨重复大剂量应用美金胺对新生大鼠各主要脏器可能造成的毒性影响。方法选用7日龄SD新生大鼠80只,随机分为高、中、低剂量组和对照组,连续14d分别经腹腔注射不同剂量美金胺或注射用水,每组2/3大鼠于停药后即予断头处死,余1/3大鼠于停药恢复1周后断头处死,分别对各主要脏器进行镜下病理检查。结果连续用药14d后,高、中剂量组大鼠的脑、肝组织见部分细胞变性,肾组织有灶性钙化。低剂量组各脏器无明显病理改变。停药恢复7d后,可见肝脏有灶性坏死,肾脏有灶性钙化,余脏器病变恢复正常。结论连续大剂量应用美金胺不会引起新生大鼠脑、肝、肾的不可逆病理改变,美金胺对新生大鼠是安全的。

美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞保护作用的实验研究

目的探讨美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用。方法以生理盐水在前房内加压灌注制作大鼠急性高眼压模型,然后腹腔内注射美金胺或生理盐水,分为美金胺治疗组和急性高眼压对照组各20只,另设健康对照组大鼠8只。采用免疫组织化学法和脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated 2′-deoxyuridine 5′-triphosphate-biotin nick end labeling,TUNEL),检测大鼠RGCs caspase-3和凋亡细胞的表达。结果健康对照组无caspase-3与凋亡细胞表达。急性高眼压对照组在高眼压6 h后视网膜出现凋亡细胞,逐渐增加至24 h达高峰,后逐渐减少,72 h时仅有少数凋亡细胞;caspase-3表达改变与凋亡细胞表达相似。美金胺治疗组的变化规律同急性高眼压对照组。急性高眼压6,24和72 h后凋亡细胞与caspase-3的表达在3组间的差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论细胞凋亡可能在视网膜急性高眼压损伤过程中起重要作用,美金胺对RGCs具有保护作用。

美金胺对脑缺氧缺血新生大鼠热休克蛋白70合成的影响

为评估非竞争性NMDA受体美金胺(Memantine)对缺氧缺血(HI)的脑保护作用,将HI模型鼠(结扎右侧颈总动脉后予8％氧2h)随机分为对照(NC,n=15)组、缺氧缺血(HI,n=25)组,HI前应用美金胺组(PRE,n=25)、HI后应用美金胺组(POST,n=24)。应用免疫组织化学方法观察各组海马及皮质部位热休克蛋白(HSP)70阳性细胞数,进一步从分子水平评估美金胺的脑保护效果。结果显示PRE组和POST组脑HSP70生成量明显低于HI组。提示HI是HSP70生成的强烈诱导剂,美金胺的应用则明显减少了HSP70的生成,具有一定的缺氧缺血脑保护作用。

美金胺对急性高眼压下视神经损害的保护作用研究进展

青光眼是当今世界范围内的主要致盲性眼病之一。青光眼的主要危险因素是高眼压,骤然升高的眼压产生神经兴奋毒性,引起视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)死亡,最终导致视神经进行性损害。目前的研究发现非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体拮抗剂美金胺(Memantine)可有效减少高眼压所致的视神经损害。

美金胺对缺血性脑损伤保护作用的研究

目的观察美金胺对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用,并研究其可能的机制。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15min后分别灌注6h或5天。大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注给药组和缺血/再灌注溶剂对照组。缺血/再灌注给药组腹腔注射20mg/kg美金胺。使用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡。结果大鼠缺血/再灌注5天后,缺血/再灌注给药组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显增加;缺血/再灌注6h,缺血/再灌注给药组N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚基2A(NR2A)、突触后密集区蛋白95(PSD-95)、非受体型蛋白酪氨酸激酶(Src)三者间免疫沉淀的蛋白量及NR2A的酪氨酸磷酸化水平较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显降低,而三者的表达量没有明显变化。结论美金胺通过抑制NR2A、PSD-95、Src三者结合及Src介导的NR2A的酪氨酸磷酸化抑制了缺血后NMDA受体功能的增强,从而对大鼠缺血性脑损伤有保护作用。

美金胺对青光眼视神经的保护作用

青光眼导致视功能损害的病理基础是视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的进行性凋亡及视神经纤维的丢失。目前认为 N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体介导的细胞内钙超载引起的神经元兴奋毒损伤学说是青光眼神经节细胞死亡的主要机制之一,并据此考虑应用 NMDA 受体的拮抗剂来治疗青光眼的视神经损伤。美金胺(memantine)是一种接近于理想动力学的提供神经保护而显示较少副作用的非竞争性拮抗剂,有良好的应用前景。

不同剂量美金胺对HIBD新生大鼠的脑保护作用及机制分析

目的 探讨不同剂量美金胺对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的脑保护作用及机制。方法 144只新生大鼠随机分为六组,假手术组大鼠仅将颈部皮肤切开,分离右侧颈总动脉,不进行结扎及缺氧处理。其余五组建立缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型。药物组四组分别腹腔注射不同剂量美金胺(13 mg/kg、26 mg/kg、39 mg/kg、52 mg/kg),模型对照组分别腹腔注射等量生理盐水。分析六组新生大鼠皮质、纹状体、海马及丘脑的脑损伤评分;六组新生大鼠皮质、海马区(海马CA1、海马CA3及齿状回)、纹状体及皮质下蛋白的TUNEL阳性细胞计数;六组新生大鼠皮质、海马区(海马CA1、海马CA3及齿状回)、纹状体及皮质下蛋白的Caspase-3阳性细胞计数;比较六组新生大鼠的神经功能及六组新生大鼠的缺氧缺血处理后的12 h、48 h、72 h的胶质细胞源性营养因子(GDNF)蛋白表达水平。结果 假手术组大鼠不同脑区域损伤评分、TUNEL及Caspase-3阳性细胞计数相比,差异均无统计学意义(P> 0. 05);在其余五组新生大鼠中,皮质、纹状体、海马及丘脑区域脑损伤评分比较差异均有统计学意义(P <0. 05),模型对照组、药物1组、药物2组、药物3组及药物4组的TUNEL阳性细胞计数均明显高于假手术组,表明造模成功。在海马CA1、皮质下蛋白中的的TUNEL阳性细胞计数差异有统计学意义,在海马CA3、齿状回及皮质下蛋白中的Caspase-3阳性细胞计数差异有统计学意义(P <0. 05),以上比较顺序均为模型对照组>药物1组>药物2组>药物3组>药物4组;六组新生大鼠的神经功能比较差异有统计学意义(P <0. 05),术后12 h、48 h、72 h时,六组新生大鼠的GDNF蛋白表达水平具有统计学意义,神经功能及GDNF蛋白表达水平顺序均为模型对照组<药物1组<药物2组<药物3组<药物4组<假手术组,以上各项指标中除药物3组与药物4组间比较差异无统计学意义(P> 0. 05)外,其余组间比较差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 随着美金胺剂量的增加,其对HIBD新生大鼠的脑保护作用逐渐增加,最佳剂量为39 mg/kg,可能美金胺可提高HIBD大鼠的GDNF蛋白表达水平有关。

胶质细胞源性营养因子和美金胺对脑室周围白质软化新生大鼠远期预后的影响

目的评估胶质细胞源性营养因子(GDNF)和美金胺对脑室周围白质软化(PVL)新生Sprague-Dawley大鼠远期预后的影响。方法 32只5日龄新生大鼠随机分为假手术(Sham)组、PVL组、GDNF组以及美金胺(Mem)组。除Sham组外,其他3组均行右颈总动脉结扎及缺氧处理(PVL造模)。GDNF组和Mem组分别于造模后即刻注射GDNF 100μg/kg和Mem 20 mg/kg。每天对各组大鼠称重。于26日龄(造模后21 d)对各组大鼠进行Morris水迷宫测试及Rivlin斜板实验,记录水迷宫测试时的逃逸潜伏期(escape latency,EL)和游泳距离以及斜板测试时在斜板上至少停留5 s的最大倾斜角度。结果术后PVL组大鼠的平均体重明显低于Sham组和两个用药组(P<0.05);EI值和游泳距离均较Sham组和两个用药组显著延长(P<0.05或<0.01);在斜板上至少停留5 s的最大倾斜角度明显低于Sham组和两个用药组(P<0.05)。两个用药组和Sham组在体重、EI和游泳距离以及斜板的最大倾斜角度之间的差异均无统计学意义。结论 GDNF和Mem均可增强PVL大鼠的空间辨识、学习记忆和运动协调能力,促进体重增长,明显改善远期预后。

UDP-糖、GDNF和美金胺改善新生大鼠缺血性脑白质病变的光电镜病理评估

目的通过光镜和电镜下脑病理研究,评估单用或联用UDP-糖、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和美金胺对缺血型脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠脑白质病变的改善效果。方法一侧颈总动脉结扎伴缺氧2 h,建立5日龄新生大鼠PVL模型,随机分为假手术(Sham)组、PVL组、UDP-糖组(PVL后即刻腹腔注射UDP-糖2000 mg/kg)、GDNF组(PVL后即刻脑内注射GDNF 100μg/kg)、美金胺组(PVL后即刻腹腔注射美金胺20 mg/kg)以及三联药组(PVL后即刻联用UDP-糖、GDNF和美金胺),每组各30只。每组大鼠分别于造模后7 d及21 d断头取脑,电镜下观察髓鞘形成情况,计算髓鞘数目及厚度;光镜下对脑白质病变进行病理分级及评分。结果造模后7 d及21 d电镜结果显示,PVL组大鼠罕见髓鞘形成,排列松散,髓鞘壁明显变薄,髓鞘数量及厚度均明显少于Sham组、UDP-糖组、GDNF组、美金胺组及三联药组(P<0.01)。光镜下脑白质病理分级结果显示,PVL组大鼠在造模后7 d和21 d,其脑白质均呈轻度病变(38%～50%)或重度病变(50%～62%)。4个用药组大鼠在造模后7 d和21 d有50%～88%呈正常脑白质,呈重度病变的比例为13%～25%。病理评分显示,PVL组在造模后7 d及21 d的病理评分最高,显著高于其他5组(P<0.05)。结论单用或联用UDP-糖、GDNF和美金胺可明显改善PVL大鼠脑白质病变。推测良好的改善作用与这些药物能促进脑内源性的神经再生及改善脑微环境密切相关。

美金胺对缺血诱导未成熟脑白质谷氨酸异常信号传输的体内外阻断研究

目的探讨非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂美金胺对缺血诱导未成熟脑白质内谷氨酸异常信号传输的体内外阻断效果。方法制备2日龄新生大鼠少突胶质细胞(OL)前体氧糖剥夺(OGD)细胞模型,分为对照组、OGD组及美金胺组。应用高效液相色谱仪测定OL前体胞外谷氨酸水平,流式细胞仪检测胞内钙离子浓度和OL前体凋亡率。制备缺血型脑室周围白质软化(PVL)动物模型,分为假手术组、PVL组及美金胺组。分别进行光镜下脑白质病理评估、免疫组织化学法检测脑白质髓鞘碱性蛋白(MBP)阳性OL表达率及电镜下进行脑白质髓鞘形成状况评估。结果体外与对照组相比,OGD组OL前体胞外谷氨酸水平增高[(24.60±2.42)μmol/L比(9.49±1.08)μmol/L,t=9.28,P<0.01],胞内钙离子浓度显著增加[(32.9±6.9)%比(6.9±3.5)%,t=4.41,P<0.01],OL前体凋亡率亦明显增高[(24.77±2.05)%比(6.65±1.39)%,t=15.01,P<0.01]。经美金胺处理后,胞外谷氨酸水平[(14.70±1.70)μmol/L]、胞内钙离子浓度[(23.1±2.0)%]和OL前体凋亡率[(11.80±2.06)%]均显著降低,差异均有统计学意义(t=5.68、6.13、5.18,均P<0.01)。体内与假手术组相比,PVL组大鼠脑白质均呈中至重度病变,脑白质内MBP阳性OL表达率[(5.94±1.37)%比(15.40±3.22)%,t=4.63,P<0.01]明显降低,髓鞘数目(4.00±1.00比14.67±2.70,t=6.11,P<0.01)明显减少,髓鞘厚度[(33.83±3.21)nm比(79.67±6.45)nm,t=10.43,P<0.01]明显变薄。予美金胺处理后,脑白质病理(Z=88.479,P<0.01)、髓鞘数目(10.30±1.50,t=6.01,P<0.01)及髓鞘厚度[(57.21±4.05)nm,t=7.47,P<0.01]均显著改善,脑白质内MBP阳性OL表达率[(11.02±1.35)%,t=4.40,P<0.05]亦明显增高。结论缺血诱导未成熟脑白质内谷氨酸异常信号传输是发生缺血性PVL的重要途径,美金胺可有效阻断此异常信号传输,有望为早产儿缺氧缺血PVL的防治提供新途径。

Memantine对缺氧缺血脑保护作用的相关研究

缺氧缺血性脑病是新生儿期严重的临床疾患 ,目前尚无有效的药物治疗方案。大量研究证实 ,非竞争性NMDA受体拮抗剂美金胺 (Memantine)可以有效地减少缺氧缺血所导致的脑损伤。应用膜片钳技术的研究进一步从细胞水平证实了美金胺治疗缺氧缺血性脑病的有效性和安全性 。

Memantine对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

目的 :研究美金胺 (Memantine)对新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤 (HIBD)脑保护作用及机制。方法 :应用新生 7日龄 Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、Memantine治疗组 ,采用结扎左侧颈总动脉并吸入 8% O2 +92 % N2 混合气体制成新生大鼠 HIBD动物模型。于 HIBD后即刻腹腔注射 Mem antine 2 0 mg/ kg或等量生理盐水 ,4 8h后处死 ,用放射免疫法测血清 NSE水平 ,用硝酸还原酶法测血清 NO水平 ,用 H - E染色观察脑组织病理变化。结果 :Memantine可使脑组织病理改变明显减轻 ,可降低血清中 NSE浓度 ,可降低血清中 NO浓度。结论 :Memantine对脑缺氧缺血损伤具有脑保护作用 ;Mem an-tine通过阻断 NMDA受体减少毒性 NO的生成 ,是其脑保护作用可能机制之一。

谷氨酸受体联合拮抗在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的全脑保护机制研究

目的:探讨美金胺联合托吡酯对大脑神经元及少突神经胶质细胞的协同保护作用及其对谷氨酸兴奋性毒性的抑制作用的机制。方法:SD大鼠(120只)分成缺氧缺血(HI,对照组)组,美金胶组,托吡酯组和联合用药组。HI后48 h进行TUNEL染色凋亡检测和阳性细胞计数及Caspase-3免疫活性检测及阳性细胞计数;HI后72 h进行神经损伤评分;HI后21 d进行足错误评估其神经功能测试。结果:在海马CA1区和皮质下白质区,联合用药组TUNEL及Caspase-3阳性细胞计数显著少于对照组。联合用药组脑损伤评分显著低于对照组,足错误次数显著少于对照组。结论:美金胺与托吡酯联合拮抗不仅显著改善病理结果,亦显著改善神经功能表现;并可实现灰、白质同时保护。