前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)属于抑癌基因,在多种肿瘤中表达缺失,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。提取人正常大肠黏膜组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,测序鉴定正确后转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot,证实为相对分子质量约为29000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。经Ni2+配体亲和层析纯化得到纯度大于95%的目的蛋白。重组PGDH简单复性后具有一定的生物活性,约为3.7×104U/mg,为下一步研究其在肿瘤中的作用奠定了基础。

木犀草素对大鼠肝肾组织中11β-羟基类固醇脱氢酶的影响

【目的】考察木犀草素对大鼠组织11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)基因表达、蛋白表达和酶活性的影响。【方法】24只雄性大鼠随机分为4组,称重后灌胃给予1%羧甲基纤维素钠溶液或木犀草素低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组连续14 d后,取肝、肾等糖皮质激素靶组织,采用定量RT-PCR法测定大鼠肝肾组织11β-HSD Ⅰ及11β-HSD Ⅱ基因表达,Western Blot法测定大鼠肝肾组织11β-HSD Ⅰ和11β-HSD Ⅱ蛋白表达,以代谢产物泼尼松、泼尼松龙的生成速率表示酶活性。【结果】木犀草素显著诱导肝脏组织11β-HSD Ⅰ基因表达,抑制11β-HSD Ⅱ基因表达;显著抑制肾脏11β-HSD Ⅰ基因表达,诱导11β-HSD Ⅱ基因表达。木犀草素给药组对肝11β-HSD Ⅰ蛋白表达呈明显的上调趋势,对肝11β-HSD Ⅱ蛋白表达呈明显的下调趋势;对肾11β-HSD Ⅱ蛋白表达呈明显的上调趋势,对肾11β-HSD Ⅰ蛋白表达呈明显的下调趋势。木犀草素明显诱导肝11β-HSD Ⅰ、肾11β-HSD Ⅱ活性。【结论】木犀草素可通过影响大鼠肝肾组织中11β-HSD Ⅰ和11β-HSD Ⅱ基因表达、蛋白表达和酶活性,影响糖皮质激素体内活化及肝肾组织中激素水平。

幽门螺杆菌对胃癌环氧合酶-2和15-羟基前列腺素脱氢酶表达的影响

15-羟基前列腺素脱氢酶（15-hydroxyprostaglandin，15-PGDH）在健康人和哺乳动物的胃肠道组织中高水平表达，其对多种恶性肿瘤的发生、浸润和转移具抑制作用。环氧合酶-2是天然的15-PGDH拮抗剂，与胃癌等多种恶性肿瘤的发生相关。H．pylori感染与胃癌的发生密切相关。本研究通过测定胃癌患者环氧合酶-2和15-PGDH的表达情况，拟探讨H．pylori感染在胃癌发生、发展中的作用。

HPGD基因表达量与绝经后骨质疏松症的关系探讨

目的探讨羟基前列腺素脱氢酶(HPGD)基因表达量与绝经后骨质疏松症的关系。方法54例绝经5年内女性患者,采用双能X线吸收法骨密度检测仪(DAX)测定骨密度(BMD),将L_(1~2)T值≤-2.5确诊为绝经后骨质疏松症的患者作为实验组(20例),L_(1~2)T值>-2.5确诊为非骨质疏松症患者作为对照组(34例)。应用实时荧光定量(RT-qPCR)技术检测并比较两组患者的HPGD基因表达量,比较两组年龄、空腹血糖(FBG)、血钙(Ga)、血磷(IP)、碱性磷酸酶(ALP)、甲状旁腺激素(PTH)、雌二醇(E_(2))及骨密度T值。结果两组年龄、FPG、Ca、IP、ALP、PTH、E_(2)比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组骨密度T值(-3.14±0.63)明显低于对照组的(-1.29±0.81),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组HPGD基因表达量(1.079±1.190)明显低于对照组的(2.349±3.131),差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPGD基因表达量与绝经后骨质疏松症有一定关系,HPGD基因表达下降可能增加绝经后骨质疏松症的风险。

大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达

目的构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白。方法以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,并经Ni2+-NTA亲和层析纯化,目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组质粒pBV220-PGDH-His6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确。经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。Western blot验证了表达蛋白的特异性。纯化后目的蛋白纯度大于95%。结论已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白。

胃癌组织中15-PGDH的表达特征及其临床意义

目的:探讨15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达及其与临床病理特征的关系,初步评价15-PGDH在胃癌发生、发展中的作用及其意义。方法:随机收集60例胃癌手术病人的癌组织及相应癌旁正常组织,应用免疫组织化学检测15-PGDH表达特征并进行评分,进一步分析15-PGDH的表达与胃癌临床病理参数的关系。结果:胃癌组织中15-PGDH的表达水平显著降低甚至缺失(p<0.01)。结合胃癌的临床病理学特征统计分析表明,15-PGDH在低分化胃癌中明显低于高分化胃癌中的表达(p<0.05);15-PGDH在TNMⅢ期和Ⅳ期患者的胃癌组织中的染色明显低于在Ⅰ期和Ⅱ期组织中的表达(p<0.05);存在淋巴结转移的胃癌组织中15-PGDH表达显著低于无淋巴结转移胃癌组织中的表达(p<0.01)。结论:胃癌中15-PGDH的表达减少或缺失可能是胃癌发生、发展及浸润转移的重要机制之一,15-PGDH在胃癌中可能扮演着抑癌基因的角色。