15-羟基前列腺素脱氢酶基因转染对人胃癌细胞生长和迁移的影响

目的:探讨含有NAD+依赖性l5-羟基前列腺素脱氢酶(NAD+-dependent 15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase,15-PGDH)的真核表达质粒(pcDNA3/15-PGDH)转染对人胃癌细胞生长和迁移的影响。方法:Real time PCR检测多种胃癌细胞株中15-PGDH的表达情况。双酶切方法鉴定15-PGDH真核表达质粒pcDNA3/15-PGDH后,应用Lipofectamine 2000将其转染入胃癌细胞SGC7901中。MTT法检测质粒转染对胃癌细胞增殖的影响,划痕实验观察质粒转染对胃癌细胞迁移的影响,软琼脂克隆形成实验观察质粒转染对胃癌细胞克隆形成的影响。结果:SGC7901细胞中15-PGDH表达显著偏低。pcDNA3/15-PGDH质粒转染入SGC7901细胞的效率较高,转染后24 h及48 h时pcDNA3/15-PGDH组的15-PGDH mRNA表达量分别是pcDNA3空质粒组的188倍和271倍。pcDNA3/15-PGDH质粒转染后SGC7901细胞增殖、迁移和克隆形成能力均显著低于空质粒组和未转染组(P<0.05)。结论:15-PGDH基因转染可显著抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,推测15-PGDH可能是抑制胃癌发生、发展的重要因素之一。

桂枝汤对发热及低体温大鼠下丘脑15-羟基前列腺素脱氢酶活性的影响

目的 :研究桂枝汤对发热和低体温大鼠下丘脑组织内 15 PGDH活性的影响 ,进一步阐明桂枝汤体温双向调节作用机制。方法 :采用核素示踪技术测定酵母性发热和安痛定性低体温大鼠及桂枝汤处理组下丘脑组织内 15 PGDH活性 ,并观察其与体温变化的关系。结果 :皮下注射酵母可降低下丘脑 15 PGDH活性 ,桂枝汤灌胃可剂量依赖性地抑制该变化并促进发热大鼠体温的恢复 ,两者呈正相关 ;而腹腔注射安痛定后 ,随着体温下降 ,15 PGDH活性有升高倾向 ,桂枝汤可抑制该酶活性并加速体温恢复正常 ,但两者呈弱相关。结论 :大鼠下丘脑内 15 PGDH可能参与机体体温调节并可能是桂枝汤解热作用靶点之一 ,但与其抗低体温作用关联不大。

发热大鼠脑组织15-羟基前列腺素脱氢酶活性的时相变化及桂枝汤的影响

目的 :研究发热大鼠下丘脑和其他脑组织 15 PGDH活性的时相变化及桂枝汤的影响。方法 :利用Radio TLC法测定发热大鼠及桂枝汤治疗组脑组织不同时间的 15 PGDH活性。结果 :皮下注射酵母后 ,伴随体温的升高 ,大鼠下丘脑PGDH活性先降低后逐渐恢复 ,桂枝汤可阻止该酶早期的活性降低并升高至正常值以上 ;其他脑组织PGDH活性也有类似变化 ,但桂枝汤可抑制后期的PGDH活性向正常恢复。结论 :下丘脑PGDH活性降低 ,参与了酵母性发热的早期机制 ,升高该部位PGDH活性可能是桂枝汤解热机理之一。

白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞内15-羟基前列腺素脱氢酶的经时变化

目的:探讨白细胞介素1β(IL1β)刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)15羟基前列腺素脱氢酶(15PGDH)活性的经时变化。方法:建立rCMEC培养方法,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞长至融合状态后,以30ng/ml浓度的IL1β分别刺激0.5、1、2、4、8、12、24h,以放射免疫法测定各刺激时间点15PGDH活性。结果:90%以上的培养细胞呈阳性,确定为rCMEC。加入IL1β刺激后2h,细胞内15PGDH活性与未刺激组比较有显著性差异(P<0.05);12h时达到最大值;24h时有所降低,但与未刺激组比较仍具显著性差异(P<0.01)。结论:rCMEC经IL1β刺激后,细胞内15PGDH活性经历一个逐渐升高,到达峰值后缓慢下降的过程,IL1β刺激12h内皮细胞15PGDH活性达峰值。

18β甘草次酸对17β羟基类固醇脱氢酶Ⅲ表达的抑制及诱导前列腺癌细胞LNCaP凋亡的研究

目的探讨18β甘草次酸(18β-GA)对17β羟基类固醇脱氢酶Ⅲ(17βHSD3)表达的抑制作用及诱导雄性激素依靠性前列腺癌细胞株LNCaP凋亡的作用机制。方法采用MTT法检测给予不同浓度18β-GA的LNCaP细胞的增殖率以确定其最佳作用浓度、时间及与剂量的依赖关系;采用Western blot检测真核启动因子2α(p-eIF2α)及活化转录因子4(ATF4)蛋白的表达;采用Real-time qPCR方法检测17βHSD3 mRNA的变化情况;用siRNA干扰eIF2αmRNA的表达从而确定eIF2α的作用。结果MTT结果显示:18β-GA浓度为8μmol/L时OD450 nm处吸光值明显减低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。Westernblot结果显示:18β-GA对p-eIF2α及ATF4的表达具有促进作用。Real-time qPCR结果显示:18β-GA对17βHSD3 mRNA的转录具有抑制作用。结论 18β-GA通过激活eIF2α抑制17βHSD3的表达,并诱导LNCaP细胞株的凋亡,从而抑制肿瘤生长。

15-羟基前列腺素脱氢酶在大肠腺瘤组织中的表达及其意义

目的:探讨15-羟基前列腺素脱氢酶在大肠腺瘤性息肉组织中的表达及其意义。方法:选取外科手术或内镜下取材的大肠管状腺瘤23例、绒毛状腺瘤15例、大肠腺癌10例及正常大肠黏膜组织10例,采用RT-PCR和Western-blot法分别检测各组织中15-PGDH mRNA和蛋白质的表达。结果:15-PGDH mRNA在正常大肠黏膜、管状腺瘤、绒毛状腺瘤及大肠腺癌组织中的相对表达量分别为998.187±86.430、115.403±13.656、9.855±2.297和0.771±0.276,大肠腺癌组与绒毛状腺瘤组之间比较(P=0.055)无统计学意义,余各组之间比较均有统计学意义(P<0.05);15-PGDH蛋白的相对表达量分别为0.798±0.048、0.612±0.040、0.423±0.086和0.191±0.060,正常黏膜组表达最高,分别是管状腺瘤组、绒毛状腺瘤组及腺癌组的1.3、1.9及4.2倍,各组之间比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:15-PGDH表达的降低或缺失与大肠腺瘤性息肉的发生、发展密切相关,可能进一步促使腺瘤向腺癌转化。

人胎盘15-羟基前列腺素脱氢酶的分离纯化

作者从人胎盘分离纯化依赖NAD的15-羟基前列腺素脱氢酶,纯化9300倍以上,收率为9.3％,比活性为6470.60nmol/min·mg,PAGE显示为单带,SDS-PAGE为两带,测得其分子量分别为26和52kd,经Western Blot分析、此两带皆能为该酶的多克隆和单克隆抗体识别。认为此酶由两条分子量相同的亚基组成。

15-羟基前列腺素脱氢酶与胃癌发生关系的研究

背景:NAD+依赖性15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)是前列腺素和相关廿烷类生物降解、灭活的关键酶,其表达缺失或减低可能与一些恶性肿瘤的发生、发展密切相关。目的:探讨15-PGDH在胃癌组织和癌旁组织中的表达及其与临床病理特征的关系,初步评价15-PGDH在胃癌发生、发展中的作用及其意义。方法:随机收集30例胃癌患者的癌组织、癌旁3cm和6cm的对照组织,以及10例胃息肉、萎缩性胃炎和健康志愿者正常胃黏膜组织标本,以免疫组化和Westernblot法检测15-PGDH蛋白表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测其mRNA表达,并分析其临床病理特征。结果:癌组织中15-PGDH蛋白和mRNA表达显著低于癌旁3cm、癌旁6cm对照组织和正常胃黏膜(P均<0.01),约1/3癌组织中15-PGDH表达缺失,胃息肉和萎缩性胃炎组织显著低于正常胃黏膜(P均<0.01);癌组织中15-PGDH蛋白表达量较癌旁3cm和6cm对照组织分别平均降低5.7倍和8.3倍,胃息肉和萎缩性胃炎组织较正常胃组织分别平均降低2.0倍和2.1倍;黏液腺癌中15-PGDH蛋白量显著低于高分化腺癌(P<0.05),印戒细胞癌中15-PGDH蛋白和mRNA的表达均缺失;伴有远处转移组15-PGDH蛋白和mRNA表达显著低于无远处转移组(P<0.05和P<0.01);Ⅳ期胃癌组织15-PGDH蛋白表达量显著低于Ⅰ期(P<0.01),其mRNA表达在Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中显著低于Ⅰ、Ⅱ期胃癌(P均<0.01)。结论:15-PGDH在胃癌组织中表达减少甚至缺失,在癌旁组织和胃癌前状态中表达减少;15-PGDH表达缺失或减少可能是胃癌发生、发展,以及胃癌浸润转移的重要机制之一。

15-羟基前列腺素脱氢酶与胃肠道恶性肿瘤的研究进展

NAD+依赖的15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)是前列腺素降解的关键酶,对环氧合酶-2(COX- 2)有天然的拮抗作用。近年来发现,15-PGDH表达减少、活性减低与胃肠道及其他系统肿瘤的发生发展有密切关系,15-PGDH可以作为肿瘤预防和治疗的新靶点。

15-羟基前列腺素脱氢酶与大肠癌

15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)是降解前列腺素的关键酶,与环氧合酶-2共同调节体内前列腺素的浓度。近年来研究发现,15-PGDH受到表皮生长因子的调控,并且15-PGDH表达减少或缺失与大肠肿瘤的发生发展密切相关。

15-羟基前列腺素脱氢酶在胃癌中的研究进展

15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)是降解前列腺素(PG)的关键酶,与某些人类肿瘤发生、发展密切相关,其表达减少可促进肿瘤侵袭和转移。近来研究显示,胃癌患者存在15-PGDH基因或蛋白表达减少,上调15-PGDH的表达有望为治疗胃癌提供一种新方法。本文就15-PGDH在胃癌中的研究进展作一综述。

重度子痫前期孕妇脂氧素A4及11β羟基类固醇脱氢酶2的表达及意义

目的:检测重度子痫前期孕妇外周血中脂氧素A4(LXA4)水平以及胎盘组织中11β羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)表达,探讨LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期发生的机制。方法:选择在本院产前检查并分娩的妊娠妇女共45例,其中正常妊娠组20例,重度子痫前期组25例。ELISA法测定孕妇外周血血浆中LXA4水平;酶化学发光分析法检测孕妇血清中游离皮质醇浓度;免疫组织化学染色法检测胎盘组织11β-HSD2蛋白表达;实时荧光定量RT-PCR法测定胎盘组织11β-HSD2 mRNA的表达;分析LXA4与11β-HSD2蛋白或mRNA、皮质醇与平均动脉压之间的相关性。结果:重度子痫前期组与正常妊娠组相比,LXA4水平明显降低(P<0.05),皮质醇浓度虽有升高,但无显著性差异(P>0.05);胎盘组织中11β-HSD2蛋白及mRNA表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05);两组孕妇的LXA4水平与11β-HSD2蛋白表达量、LXA4水平与11β-HSD2 mRNA表达量、皮质醇与平均动脉压均无相关性(P均>0.05)。结论:LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期的发生。

前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)属于抑癌基因,在多种肿瘤中表达缺失,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。提取人正常大肠黏膜组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,测序鉴定正确后转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot,证实为相对分子质量约为29000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。经Ni2+配体亲和层析纯化得到纯度大于95%的目的蛋白。重组PGDH简单复性后具有一定的生物活性,约为3.7×104U/mg,为下一步研究其在肿瘤中的作用奠定了基础。

木犀草素对大鼠肝肾组织中11β-羟基类固醇脱氢酶的影响

【目的】考察木犀草素对大鼠组织11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)基因表达、蛋白表达和酶活性的影响。【方法】24只雄性大鼠随机分为4组,称重后灌胃给予1%羧甲基纤维素钠溶液或木犀草素低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组连续14 d后,取肝、肾等糖皮质激素靶组织,采用定量RT-PCR法测定大鼠肝肾组织11β-HSD Ⅰ及11β-HSD Ⅱ基因表达,Western Blot法测定大鼠肝肾组织11β-HSD Ⅰ和11β-HSD Ⅱ蛋白表达,以代谢产物泼尼松、泼尼松龙的生成速率表示酶活性。【结果】木犀草素显著诱导肝脏组织11β-HSD Ⅰ基因表达,抑制11β-HSD Ⅱ基因表达;显著抑制肾脏11β-HSD Ⅰ基因表达,诱导11β-HSD Ⅱ基因表达。木犀草素给药组对肝11β-HSD Ⅰ蛋白表达呈明显的上调趋势,对肝11β-HSD Ⅱ蛋白表达呈明显的下调趋势;对肾11β-HSD Ⅱ蛋白表达呈明显的上调趋势,对肾11β-HSD Ⅰ蛋白表达呈明显的下调趋势。木犀草素明显诱导肝11β-HSD Ⅰ、肾11β-HSD Ⅱ活性。【结论】木犀草素可通过影响大鼠肝肾组织中11β-HSD Ⅰ和11β-HSD Ⅱ基因表达、蛋白表达和酶活性,影响糖皮质激素体内活化及肝肾组织中激素水平。

15-羟前列腺素脱氢酶在大肠腺瘤和腺癌组织中的表达

目的:探讨15-羟前列腺素脱氢酶(15-PGDH)在腺瘤和腺癌组织中的表达和意义。方法:选取肠镜检查和手术活检组织标本118例,其中正常大肠黏膜30例,大肠腺瘤43例,大肠腺癌组织45例。用Real Time PCR检测15-PGDH mRNA的表达,免疫组织化Elivision法检测组织中15-PGDH的蛋白表达。结果:15-PGDH在大肠腺癌组织中的mRNA的表达、阳性表达率及光密度值均低于大肠腺瘤及正常黏膜组(P<0.05);且大肠腺瘤组低于正常黏膜组(P<0.05)。结论:15-PGDH表达降低或缺失,可能是大肠腺癌发生过程中的重要环节。

苦参碱对膀胱癌模型大鼠前列腺素脱氢酶、血管内皮生长因子以及细胞膜磷脂酶A2的影响

目的研究苦参碱对膀胱癌模型大鼠前列腺素脱氢酶(prostaglandin dehydrogenase,PGDH)、血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)以及细胞膜磷脂酶A2(cytosolic phospholipasesA2,cPLA2)相对蛋白表达量的影响。方法选将60只大鼠采用随机数字表法分为模型组、实验组和空白组,每组各20只。模型组、实验组两组大鼠采取灌胃的形式服用致癌剂N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝基胺,剂量200 mg/mL每只,连续灌胃8周。实验组大鼠给予苦参碱灌胃治疗,空白组和实验组两组大鼠给予等体积的生理盐水,灌胃,1 d/次,连续治疗35周。对所有大鼠进行肿瘤细胞凋亡指数观察,并对各组大鼠VEGF、cPLA2、PGDH相对蛋白表达量进行检测。对p16INK4a与CyclinD1及CDK4表达水平关系进行研究。结果空白组和实验组PGDH表达水平显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组VEGF水平显著高于实验组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组cPLA2水平显著高于实验组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05);空白组大鼠肿瘤细胞凋亡指数明显低于实验组和模型组,差异有统计学意义(P<0.05),实验组大鼠肿瘤细胞凋亡指数高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠肿瘤细胞增殖指数高于实验组和空白组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05);空白组大鼠p16INK4a蛋白表达水平明显高于实验组和模型组。3组实验数据比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苦参碱对大鼠膀胱癌有抑制生长的作用,可能作用机制是通过抑制前列腺素通路相关蛋白cPLA2、PGDH蛋白表达,有助于p16INK4a蛋白表达上调。

不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞11β-羟基类固醇脱氢酶基因表达的影响

目的:观察葡萄糖下对大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的影响,及11β-HSD1与TGF-β1,ET-1等细胞因子之间的关系;同时观察反义寡核苷酸对高糖条件下大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的干预作用。方法:猪髂动脉内皮细胞分别培养于不同浓度葡萄糖(5.6,10.0,20.0,30.0mmol/L)中,用RT-PCR法检测11β-HSD1,11β-HSD2,TGF-β1,ET-1 mRNA的表达,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况。结果:高糖状态干预48h后,11β-HSD1,TGF-β1 mRNA表达随葡萄糖浓度的增加而增加,呈现一定的相关性;11β-HSD1蛋白表达随葡萄糖浓度增加而增加。采用11β-HSD1与11β-HSD2反义寡核苷酸干预后11β-HSD1与11β-HSD2 mRNA和蛋白质表达完全被抑制,同时TGF-β1的表达降低。结论:葡萄糖刺激血管内皮细胞11β-HSD1 mRNA和蛋白质表达增加,且在高糖状态下,11β-HSD1 mRNA的表达与TGF-β1RNA表达有直线相关性,11β-HSD1可能与糖尿病及其血管并发症相关。

八氢番茄红素脱氢酶抑制剂类除草剂的研究进展

植物类胡萝卜素在光合作用、激素合成和维生素合成方面有着重要作用。八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)是类胡萝卜素生物合成途径的重要限速酶,仅在植物中存在。PDS失活能阻断类胡萝卜素生物合成,使得叶片白化,最终导致植物死亡。以PDS为靶标,研究开发了多种高效除草剂。这类除草剂属于非竞争性抑制PDS,并且对动物是安全的。一些植物因为PDS基因突变而产生了对PDS抑制剂类除草剂的抗性,就PDS的生物学功能、PDS抑制剂类除草剂和相关抗性植物研究进展进行总结。

黄秋葵八氢番茄红素脱氢酶基因的克隆与分析

该研究根据黄秋葵( Hibiscus esculentus L.)转录组测序获得的八氢番茄红素脱氢酶基因( HePDS )序列(GenBank登录号为MG372370)设计引物,克隆验证得到1条 HePDS 基因全长为2 020 bp cDNA,开放阅读框(ORF)包含1 686个碱基;预测其编码561个氨基酸,理论分子量为62.62 kD,等电点为8.155;编码的蛋白与海岛棉( Gossypium barbadense )、雷蒙德氏棉( Gossypium raimondii )、陆地棉( Gossypium hirsutum )同源蛋白的相似性均在93%以上,均含有1个保守的二核苷酸结合域和1个类胡萝卜素结合域,显示其高度的保守性。荧光定量PCR 分析表明, HePDS 基因在黄秋葵根、茎、叶、花和果荚中均有表达;叶发育过程以嫩叶中表达最高,果实发育中以花后2 d表达量最高。类胡萝卜素含量随着叶、果实发育逐渐升高,成熟叶的含量最高,果实以花后4 d含量最高,且 HePDS 基因的表达与类胡萝卜素含量存在密切的相关性。该研究结果为进一步探讨 HePDS 基因的功能和调控机制,以及采用VIGS和CRISPR/Cas9技术开展黄秋葵基因功能的反向遗传学研究奠定了基础。

葛根素对心肌缺血-再灌注损伤兔乳酸脱氢酶活性变化的影响

目的 :探讨心肌缺血再灌注损伤 ( MIRI)时乳酸脱氢酶 ( L DH)活性的变化以及中医药的保护作用机制。方法 :实验兔 30只 ,随机分为对照组、盐水组和葛根素葡萄糖注射液 ( PGI)组 ,每组 10只。制作 MIRI模型 ,观察血清及心肌组织 L DH活性、血栓素 B2 ( TXB2 )和 6酮前列腺素 F1α( 6 keto PGF1α)含量、TXB2 /6 keto PGF1α( T/ K)比值变化及 PGI对它们的影响。结果 :MIRI过程中 ,盐水组血清 L DH活性进行性升高( P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,心肌组织内 L DH活性明显下降 ( P<0 .0 1)而 T/ K比值显著增高 ( P<0 .0 1) ;PGI能降低血清中升高的 L DH活性 ,降低心肌组织中 L DH活性和 T/ K比值 ,均有显著性差异 ( P<0 .0 5和 P<0 .0 1)。结论 :PGI可通过纠正 TXA2 与前列环素的平衡 ,对 MIRI时 L DH活性的异常改变起积极的调节作用 。