褪黑激素对香港细首纽虫(Cephalothrix hongkongiensis)性腺发育的影响及羟基吲哚-O-甲基转移酶(HIOMT)的测定

本文研究了去头术和外源褪黑激素对香港细首纽虫(Cephalothrix hongkongiensis)性腺发育的影响,并对褪黑激素合成酶HIOMT进行了Western blot测定和免疫组织化学定位。结果表明,去除头部可快速诱导香港细首纽虫的性腺发育,处理40天后配子完全成熟,而对照组(完整个体)在整个实验过程中均未发现性腺。这说明香港细首纽虫头部具有抑制性腺发育的物质(激素)。外源褪黑激素对香港细首纽虫的性腺发育有显著的抑制作用,并且随着浓度的升高,抑制作用增强。Western bolt结果显示,在38k Da处有阳性条带;免疫组织化学定位发现,脑神经节的几个神经细胞有阳性反应,说明香港细首纽虫的脑神经节中存在HIOMT,具有合成褪黑激素的功能。

季节变化对仓鼠褪黑素合成限速酶羟基吲哚-氧-甲基转移酶mRNA表达的影响

目的:比较自然与人工模拟的四季对褪黑素合成限速酶羟基吲哚-氧-甲基转移酶(HIOMT)影响的异同,为运用四时模拟系统模拟季节的可行性和可信性提供相关数据,进而为中医"天人相应"理论的研究提供新的途径。方法:采用四季模拟系统人工模拟季节,测定模拟季节组和自然季节组仓鼠松果腺中褪黑素合成限速酶HIOMT mRNA表达,并进行对比。结果:在自然条件下,仓鼠松果腺中HIOMT mRNA表达在冬季较高,冬季组和夏季组相比有显著性差异(P<0.05),春季组和秋季组相比没有明显差异;在四季模拟系统条件下,模拟冬季组高于模拟夏季组,且有显著性差异(P<0.05),春季组和秋季组相比没有明显差异,与自然条件下四季节律一致;模拟四季组HIOMT mRNA表达与自然四季组同期相比均无显著性差异。结论:应用四季模拟系统模拟自然季节较为成功,利用其模拟季节进行天人相应理论研究的思路具有可行性。

天然化合物-O-甲基转移酶的研究进展

天然化合物-O-甲基转移酶(NPOMT)是一种以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)为供体,靶向天然化合物中氧原子的甲基转移酶,在体内主要以两种形式存在:儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)、羟基吲哚-O-甲基转移酶(HIOMT)。COMT、HIOMT代谢多种内源性物质(主要是邻苯二酚类以及羟基吲哚类化合物),参与体内信号转导、生长增殖、能量代谢、节律调控等一系列生理学过程。对NPOMT的体内分布和表达、底物、功能、在体内的表达调控和抑制剂进行综述,以期为用于治疗相关代谢性疾病的NPOMT特异性激动剂/抑制剂的研发以及相关疾病的诊断和预后评估提供参考。

一氧化氮合酶对丝裂霉素C衍生物629细胞毒性的影响

目的评价一氧化氮合酶对丝裂霉素C(MMC)衍生物———5-氮丙啶基-3羟-基-1甲-基吲哚-4,7二-酮(629)的细胞毒性和乏氧选择性的影响。方法以人纤维肉瘤细胞株HT1080和其诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染的细胞克隆(iNOS9,iNOS12)为实验对象。四噻唑蓝(MTT)法检测MMC与其衍生物629的细胞毒性,比较乏氧和有氧条件下两种化合物半数抑制率(IC50)的差异;琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术观察629作用后肿瘤细胞脱氧核糖核酸(DNA)的损伤情况,分析不同iNOS活性的肿瘤细胞对629敏感性的差异及原因。结果629的IC50较MMC低数百倍,是高细胞毒性的化合物;随着细胞中iNOS活性的增加,629对乏氧细胞的选择性损伤作用显著增强,DNA电泳显示629引起细胞坏死,造成细胞周期G2/M阻滞。结论MMC衍生物629是具有更高乏氧选择性的增敏化合物。

电针对慢性应激抑郁模型大鼠松果体AANAT mRNA、HIOMT mRNA表达的影响

目的观察电针治疗对慢性应激抑郁模型大鼠行为学、血清褪黑素(melatonin,MT)以及松果体芳基烷化胺N-乙酰基转移酶(arylalkylamine N-acetyltransferase,AANAT)mRNA、羟基吲哚氧位甲基转移酶(hydroxyindole-O-methyl-transferase,HIOMT)mRNA表达的影响,探讨电针对慢性应激抑郁模型大鼠血清MT含量调节的作用机制,从而进一步充实电针抗抑郁的作用机理。方法将大鼠随机分为3组,空白组、模型组、电针组,每组10只,共30只,通过慢性温和不可预知性应激刺激结合孤养的方法复制慢性应激抑郁模型,电针组给予强度为2 Hz、1 mA的电针治疗,每次20分钟,每天1次,共电针21天。采用开野试验观察大鼠的行为学变化;采用酶联免疫吸附法对大鼠血清中MT的含量进行检测,用Real-time PCR检测各组大鼠松果体AANAT mRNA、HIOMT mRNA的表达情况。结果在大鼠开野试验中,与空白组比较,模型组大鼠水平运动、垂直运动的次数均显著减少(P=0.000<0.01,P=0.007<0.01),而电针可逆转此变化,与模型组相比,电针组大鼠的水平运动次数和垂直运动次数均显著增多(P=0.000<0.01,P=0.001<0.01);模型组大鼠血清中MT含量较空白组明显降低(P=0.000<0.01),与模型组大鼠比较,电针可提高血清中MT含量(P=0.000<0.01)。与空白组相比,模型组AANAT mRNA、HIOMT mRNA的表达均显著降低(P=0.000<0.01,P=0.026<0.05),而电针组的表达较模型组均显著升高(P=0.000<0.01,P=0.000<0.01)。结论电针可以提高慢性应激抑郁模型大鼠血清中MT含量,并且可以提高AANAT mRNA、HIOMT mRNA的表达。其中,电针提高慢性应激抑郁模型大鼠AANAT mRNA、HIOMTmRNA的表达可能是提高大鼠血清中MT含量的机制之一。

东北白桦COMT1基因克隆及其植物表达载体构建

采用同源克隆法结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆东北白桦(Betula platyphylla)咖啡酸/5-羟基阿魏酸-O-甲基转移酶(COMT)基因COMT1,测序结果显示东北白桦COMT1 cDNA序列全长1 367 bp(GenBank登录号:KC292201),其中完整编码区长度1 095 bp,编码365个氨基酸。利用Gateway技术分别构建了东北白桦COMT1植物过量表达和反义表达载体。

INMT基因在肝癌中的表达及其机制研究

目的应用生物信息学分析探讨吲哚胺N-甲基转移酶(INMT)在肝癌发生、发展中的作用及可能的机制,为肝癌的防治提供生物信息学依据。方法本研究从TCGA下载肝癌RNA测序数据库及患者临床资料,包含371例肝癌患者的癌组织以及50例肝癌患者的癌旁组织;GSE102079肝癌基因芯片数据从GEO下载,芯片共包含152例肝癌患者的癌组织和91例肝癌患者的癌旁组织。采用R语言分析INMT在TCGA和GSE102079中肝癌组织和癌旁组织的表达差异以及与预后的相关性;分析两个数据库中INMT相关基因的蛋白相互作用网络,对重叠基因进行GO和KEGG通路富集分析,采用STRING数据库构建INMT的相关基因互作蛋白网络。结果和癌旁组织相比较,INMT基因在肝癌组织中显著低表达(P<0.01)。与INMT低表达肝癌患者相比较,INMT高表达肝癌患者总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)显著延长(P<0.01)。TCGA和GSE102079肝癌数据库中INMT的相关基因共有178个重叠,主要涉及PI3K-AKT信号通路、细胞黏附分子、肿瘤信号通路、细胞黏附、血管形成等生物过程。构建INMT相关基因的蛋白相互作用网络,发现COL14A1、FBLN1/2、PECAM1、EMCN、FLT4等在INMT相关基因的蛋白相互作用网络中发挥关键作用,为进一步探讨INMT在肝癌中发挥作用的下游机制研究提供生物信息学依据。结论INMT可能在肝癌中发挥抑癌基因的作用,与肝癌的预后较好显著相关。