药物诱发长QT间期综合征(long QT syndrome,LQTS)已成为临床上重要的研究课题,其中获得性长QT间期综合征(acLQTS)的发生主要是药物抑制人类ether-α-go-go相关基因(the human ether-α-go-go related gene,hERG)通道所致。hERG基因编码...药物诱发长QT间期综合征(long QT syndrome,LQTS)已成为临床上重要的研究课题,其中获得性长QT间期综合征(acLQTS)的发生主要是药物抑制人类ether-α-go-go相关基因(the human ether-α-go-go related gene,hERG)通道所致。hERG基因编码快速激活延迟整流钾离子通道(rapid component of the delayed rectifier potassium current,Ikr)的α亚基,其在动作电位3期复极过程中发挥重要作用,也是大多数抗心律失常药物作用的靶点。本文旨在探讨羟基吴茱萸次碱(hydroxyrutaecarpine,HRU)对hERG通道的影响,评估其心脏安全性。利用全细胞膜片钳技术记录HRU对hERG通道电流及动力学的影响,并验证与hERG通道的结合位点。运用PCR技术测定HRU对hERG mRNA表达水平的影响。利用Western blot技术检测HRU对hERG蛋白和转录因子Sp1(specificity protein 1)表达的影响。采用免疫荧光技术证实HRU对hERG蛋白和转录因子Sp1的定位和表达的影响。研究显示,HRU瞬时给药后对hERG电流具有抑制作用,降低hERG通道的失活电流,缩小失活时间常数,作用位点是S6片段的两个芳香族氨基酸即第656位的苯丙氨酸F656和第652位的酪氨酸Y652。HRU孵育给药能够减少hERG蛋白表达量,并抑制hERG电流,降低hERG mRNA的水平,降低细胞核内转录因子Sp1和细胞浆内hERG蛋白表达水平。激光扫描共聚焦实验也显示细胞核内转录因子Sp1和细胞浆内hERG蛋白表达都减少,说明HRU抑制Sp1表达是导致hERG mRNA表达减少的原因。以上结果表明,HRU瞬时给药抑制hERG电流的作用是通过结合hERG通道内F656和Y652位点,缩小失活时间常数,加快通道失活,从而抑制hERG通道功能。此外,HRU还抑制hERG蛋白表达,主要是通过抑制转录因子Sp1的表达,使hERG通道蛋白的转录功能下调,最终导致hERG蛋白减少。展开更多
文摘药物诱发长QT间期综合征(long QT syndrome,LQTS)已成为临床上重要的研究课题,其中获得性长QT间期综合征(acLQTS)的发生主要是药物抑制人类ether-α-go-go相关基因(the human ether-α-go-go related gene,hERG)通道所致。hERG基因编码快速激活延迟整流钾离子通道(rapid component of the delayed rectifier potassium current,Ikr)的α亚基,其在动作电位3期复极过程中发挥重要作用,也是大多数抗心律失常药物作用的靶点。本文旨在探讨羟基吴茱萸次碱(hydroxyrutaecarpine,HRU)对hERG通道的影响,评估其心脏安全性。利用全细胞膜片钳技术记录HRU对hERG通道电流及动力学的影响,并验证与hERG通道的结合位点。运用PCR技术测定HRU对hERG mRNA表达水平的影响。利用Western blot技术检测HRU对hERG蛋白和转录因子Sp1(specificity protein 1)表达的影响。采用免疫荧光技术证实HRU对hERG蛋白和转录因子Sp1的定位和表达的影响。研究显示,HRU瞬时给药后对hERG电流具有抑制作用,降低hERG通道的失活电流,缩小失活时间常数,作用位点是S6片段的两个芳香族氨基酸即第656位的苯丙氨酸F656和第652位的酪氨酸Y652。HRU孵育给药能够减少hERG蛋白表达量,并抑制hERG电流,降低hERG mRNA的水平,降低细胞核内转录因子Sp1和细胞浆内hERG蛋白表达水平。激光扫描共聚焦实验也显示细胞核内转录因子Sp1和细胞浆内hERG蛋白表达都减少,说明HRU抑制Sp1表达是导致hERG mRNA表达减少的原因。以上结果表明,HRU瞬时给药抑制hERG电流的作用是通过结合hERG通道内F656和Y652位点,缩小失活时间常数,加快通道失活,从而抑制hERG通道功能。此外,HRU还抑制hERG蛋白表达,主要是通过抑制转录因子Sp1的表达,使hERG通道蛋白的转录功能下调,最终导致hERG蛋白减少。
