羟基淀粉沉淀对免疫磁珠法分离脐血CD_(34)^+细胞及造血祖细胞增殖功能的影响

目的 :应用羟基淀粉沉淀去除脐血红细胞和免疫磁珠 (MACS)阳性选择 ,建立富集、分离脐血CD34+ 细胞的简易实用方法 ,通过造血祖细胞集落培养分析其在细胞因子作用下的增殖潜能 ,观察羟基淀粉沉淀对造血细胞增殖功能的影响。方法 :采用羟基淀粉沉淀和改进的 MACS富集、分离脐血 CD34+细胞 ,以甲纤半固体造血细胞培养法观察其粒 -单系细胞 (CFU- GM)和红系爆式集落 (BFU- E)的数量和特性。结果 :脐血分离前 ,CD34+细胞纯度为 1.5 %～ 3% ,MACS分离后其纯度可达 85 % ,羟基淀粉沉淀和 MACS分离可达 91% ;CD34+造血祖细胞培养有明显的增殖 ,采用 IL - 3、IL - 6、SCF、GM- CSF、EPO等细胞因子组合扩增培养 9～ 14d,CD34+ 细胞在液体培养中有明显扩增 ,MACS分离后 CD34+ 细胞总数增加 39倍 ,羟基淀粉沉淀和 MACS分离可增加 45倍。结论 :应用羟基淀粉沉淀和改进的 MACS系统可有效富集、分离脐血 CD34+细胞 ,羟基淀粉沉淀对 CD34+细胞的富集、分离无影响 ;脐血细胞分离后作造血祖细胞培养 ,可产生丰富的 CFU- GM和 BFU- E,说明羟基淀粉沉淀分离的 CD34+ 细胞的增殖功能优于 MACS分离 CD34+ 细胞的增殖功能。