制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品

积雪草甙和羟基积雪草甙是积雪草及其相关制品质量控制的两个指标成分,本研究利用制备型高效液相色谱从积雪草提取物中同时分离纯化得到这两个成分。对制备色谱的流动相组成、流速、进样量和检测波长等制备参数进行了优化。采用的色谱柱为C18柱(50mm×200mm,5μm);流动相为甲醇-水(体积比为60∶40),流速100mL/min;二极管阵列检测器在220nm检测;进样体积为1.5mL。在20min的运行时间内,积雪草甙和羟基积雪草甙与干扰成分得到很好的分离,产品纯度达到98%以上。此方法具有快速高效、产品纯度高的特点,可以用于制备积雪草甙和羟基积雪草甙对照品。

羟基积雪草甙对慢性铝中毒痴呆小鼠的治疗作用

目的研究羟基积雪草甙(madecassoside,MC)对慢性铝中毒痴呆小鼠的保护作用。方法葡萄糖酸铝按铝400 mg.kg-1.d-1灌胃90 d建立慢性铝中毒痴呆小鼠模型。通过HE染色、Morris水迷宫试验和生化实验,观察MC三种剂量(30、60和120 mg.kg-1.d-1)同步给药90d对小鼠海马神经元损伤、空间学习记忆能力和脑组织单胺氧化酶B(MAO-B)活性的影响。结果与模型组比较,30和60 mg.kg-1.d-1MC明显减轻铝过负荷所致的海马神经元损伤,明显缩短小鼠寻找平台潜伏期(s)(35.9±10.9 vs 16.5±8.4和19.6±10.5)(P<0.05);同时三种剂量MC均明显降低小鼠脑组织中MAO-B活性(U.h-1.mg-1prot)(18.9±1.8 vs 14.6±1.7,13.7±2.3和13.6±1.4)(P<0.05)。结论MC对慢性铝中毒小鼠海马神经元有保护作用,改善痴呆小鼠学习记忆能力。

羟基积雪草甙对体外培养人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究羟基积雪草甙 (madecassoside ,Md)对人皮肤成纤维细胞 (humanskinfibrob last,HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法 XTT法研究Md对HSFb增殖的影响 ;放射免疫的方法测定实验组和空白对照组细胞上清液中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原氨基端肽原 (procollagenⅠandⅢofaminoterminalpropeptide ,PINP ,PⅢNP)的含量。 结果 (1 )Md在浓度高达 2 0 0 μg/ml时仍未见任何细胞毒性。 (2 )与空白对照组相比 ,Md对HSFb有明显促进增殖作用 (P <0 0 5) ,有效刺激HSFbPINP和PⅢNP的分泌。 (3)Md刺激靶细胞PINP和PⅢNP分泌的生物学作用呈现明显的量效关系。结论 Md在刺激体外培养HSFb增殖及Ⅰ。

积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究积雪草甙(asiaticoside,Ad)和羟基积雪草甙(madecassoside,Md)对体外培养人成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法:应用 XTT 方法比较研究 Ad 和Md 对 HSFb 增殖的影响,应用放射免疫的方法测定各实验组和空白对照组细胞上清液中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原氨基端肽原(procollagen Ⅰ of aminoterminal propeptide,PINP;procollagen Ⅲ of aminoterminal propeptide,PⅢNP)的含量。结果:(1)Ad 和 Md 在浓度高达200μg/ml 时仍未见任何细胞毒性;(2)与空白对照组相比,Ad 和 Md 对 HSFb 有明显促进增殖作用(P<0.05);两者同时也可有效刺激 HSFb PⅠNP 和 PⅢNP 分泌;(3)Ad 和 Md 刺激靶细胞 PⅠNP 和 PⅢNP 分泌的生物学作用呈现明显的量效关系;(4)在一定剂量范围内,对促进 HSFb 增殖以及刺激 PⅠNP 分泌,Ad 显示出比 Md 更强的生物活性(P<0.05,P<0.01)。结论:Ad 和 Md 在刺激体外培养 HSFb 增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成中均有明显的生物活性。

RE-HPLC测定积雪草中积雪草甙、羟基积雪草甙的含量

目的:测定不同产地的中药积雪草甙和羟基积雪草甙的含量。方法:采有REHPLC法进行测定。结果:不同产地的积雪草中积雪草甙和羟基积雪草甙的含量有很大差异。结论:方法简便。

羟基积雪草甙对转基因ALS小鼠的治疗作用

目的探讨羟基积雪草甙对SOD1-G93A突变肌萎缩侧索硬化（ALS）小鼠的治疗作用。方法通过行为学测定，观察羟基积雪草甙对SOD1-G93A突变ALS小鼠发病时间、生存时间、运动功能变化的影响。结果羟基积雩草甙61.1±11．0和185．6±18．7mg／kg·d在小R70d时开始口服给药能分别延长ALS4、鼠的生存时间11．4和9.4d（P〈0.05），但对发病时间无影响；同时61．1±11．0mg／kg·d组小鼠在肌力缓慢下降期运动功能降低减轻，

依克多因与羟基积雪草甙协同抗炎作用的研究

采用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型证实了依克多因、羟基积雪草甙及依克多因与羟基积雪草甙组合配比在设定的质量浓度条件下,对LPS诱导的RAW264.7细胞产生NO均具有良好的抑制作用,即在细胞水平具有抗炎活性。同时依克多因与羟基积雪草甙组合在设定的不同质量浓度及配比下对NO的抑制率大多高于单一组分,并且依克多因与羟基积雪草甙组合在设定的不同质量浓度及配比下的SI值<1,以上说明依克多因与羟基积雪草甙组合在抗炎功效方面具有协同增效作用,关于其协同增效机理,需要进一步实验研究确定。

依克多因与羟基积雪草甙组合物舒缓功效评价

利用斑马鱼技术研究依克多因和羟基积雪草甙组合物的舒缓功效,其方法:对斑马鱼进行十二烷基磺酸钠(SLS)暴露诱导斑马鱼皮肤炎症的发生导致中性粒细胞发生免疫应答,向皮肤表面增殖和迁移,建立舒缓功效评价模型。在炎症模型中,中性粒细胞的数量与皮肤炎症反应程度成正相关,炎症的消退会伴随着炎症部位中性粒细胞数目的减少。本文通过计算受试物对斑马鱼中性粒细胞的抑制率,进而评价受试物对炎症的舒缓功效。结果显示:依克多因和羟基积雪草甙组合配比在设定质量浓度下能够抑制斑马鱼炎症皮肤表面中性粒细胞的聚集,具有舒缓功效。结果表明,依克多因和羟基积雪草甙组合配比在设定质量浓度下具有舒缓功效,为其在化妆品配方开发中提供理论依据。

羟基积雪草甙介导NLRP3信号通路治疗痛风性关节炎的机制

[目的]探讨羟基积雪草甙介导NLRP3信号通路治疗痛风性关节炎的分子机制。[方法]8周龄SPF级Wistar大鼠依次分为对照组(10只,注射等量生理盐水后再经右踝关节注入PBS溶液)、模型组(10只,注射等量生理盐水后再经关节腔注入浓度为80 mg/m L的MSU混悬液)、实验组(分别注射10、20、40 mg/kg/d羟基积雪草甙溶液分别作为低剂量组、中剂量组、高剂量组各10只,经关节腔注入浓度为80 mg/m L的MSU混悬液)。处死大鼠后获取关节液采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-1β、TNF-ɑ浓度;收集关节周围软组织,HE染色观察关节组织病理学特点;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测关节周围软组织NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA的表达;免疫印迹法(WB)检测NF-κB、ASC、caspase-1相对表达量。[结果]模型组大鼠关节组织病理学图显示关节组织损坏,羟基积雪草甙可减轻该损伤,且具有一定的剂量依赖性。模型组IL-1β、TNF-ɑ浓度及NLRP3、ASC、caspase-1、NF-κB表达量均高于空白组(P<0.05);低剂量组、中剂量组、高剂量组IL-1β、TNF-ɑ浓度及NLRP3、ASC、caspase-1、NF-κB表达量均低于模型组(P<0.05),羟基积雪草甙对IL-1β、TNF-ɑ、NLRP3、ASC、caspase-1、NF-κB升高的抑制作用具有一定的剂量依赖性。[结论]羟基积雪草甙可降低炎性因子IL-1β、TNF-ɑ浓度和NLRP3信号分子表达量,NLRP3信号通路的激活与痛风性关节炎相关,说明羟基积雪草甙可通过抑制NLRP3炎性体轴及信号通路相关分子来抑制炎性因子释放而发挥治疗痛风性关节炎的作用机制。

积雪草甙对人成纤维细胞增殖的影响

目的研究羟基积雪草甙(madecassoside,Md)对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)的增殖的影响。方法XTT法研究Md对HSFb增殖的影响。结果1)Md在浓度高达200μg/ml时仍未见任何细胞毒性。2)与空白对照组相比,Md对HSFb有明显促进增殖作用(P<0.05)。结论Md在刺激体外培养HSFb增殖有明显的生物活性。

一种天然复合活性物的抗炎功效及其机制研究

以依克多因、羟基积雪草甙、姜黄挥发油、姜黄素组成的天然复合活性物(Natural Compound Active,NC)为研究对象,通过体外细胞及体内动物试验对其抗炎功效及其机制进行研究。结果显示,在LPS诱导的巨噬细胞炎症模型上,NC有效降低NO含量。进一步通过TPA诱导耳肿胀模型测试,NC有效降低由TPA诱导的耳肿胀,抑制率达55%以上,其可能是通过抑制炎症反应过程中的关键性细胞因子IL-6、TNF-α、MIP-2、MMP-1的分泌和释放从而发挥抗炎作用,此外,NC能显著提高体内的超氧化物歧化酶SOD含量,及时清除氧自由基及脂质过氧化物MDA,有助于降低皮肤炎症反应,减少炎症对皮肤组织的损害。天然复合活性物(NC)作为一种天然来源的具有抗炎功效的活性原料,可应用于皮肤护理领域。