L-羟基脯氨酸键合手性配体交换色谱固定相的制备及手性拆分

合成出了 L -羟基脯氨酸键合手性配体交换固定相 ,用元素分析和红外光谱对固定相进行了表征。该固定相在反相条件下 ,以水作流动相 ,对 DL

正辛基-L-羟基脯氨酸萃取苯丙氨酸的机理及性能

研究了正辛基-L-羟基脯氨酸萃取苯丙氨酸的性能和机理,详细考察了起始氨基酸的浓度、萃取剂的浓度、酸度、铜离子的浓度、温度等因素分别对D-和L-苯丙氨酸萃取性能的影响.随着起始氨基酸pH值的增大,萃取分配比D也增大,对映体分离系数α可以达到2.萃取反应为吸热反应,升高温度有利于反应的进行.表征了萃合物的组成,推测萃合物的结构为1∶1∶1型的三元配合物.研究结果为苯丙氨酸的萃取拆分提供了理论依据.

以铜(Ⅱ)-L-羟基脯氨酸配合物为手性选择剂的配体交换毛细管区带电泳拆分α-羟基酸

在使用10mmol/L NH4Ac(pH 4.5),30mmol/L Cu(Ac)2和60mmol/LL-羟基脯氨酸的优化条件下,13min内拆分了3种α-羟基酸对映体(DL-苹果酸、DL-苦杏仁酸和DL-对溴苦杏仁酸),除苹果酸外均获得了满意的拆分结果;考察了电泳缓冲液组成、pH值等影响分离效果的因素。

正十二烷基-L-羟基脯氨酸手性配位萃取拆分外消旋苯丙氨酸

本文合成新手性配体正十二烷基-L-羟基脯氨酸,研究手性配体正十二烷基-L-羟基脯氨酸与Cu髤配位萃取拆分苯丙氨酸的性能和机理,考察起始氨基酸浓度、配位铜离子浓度、萃取剂浓度、溶液pH值及温度等因素分别对D-和L-苯丙氨酸萃取性能的影响,萃取剂对D-苯丙氨酸的识别能力强。利用多种手段对萃合物的组成进行表征,推测萃合物的结构为1∶1∶1型三元配合物。对比发现:该萃取剂配位萃取拆分苯丙氨酸性能优于正辛基-L-羟基脯氨酸,空间位阻效应反而对拆分有利。

羟基脯氨酸正十二醇单酯的合成、表征及抗氧化性

实验以羟基脯氨酸和正十二醇为原料,对甲基苯磺酸为催化剂合成抗衰老因子衍生物羟基脯氨酸正十二醇单酯.在温度为130 ℃、羟基脯氨酸和正十二醇的摩尔比为1∶5条件下,反应10 h,单酯收率为85.57%.合成的单酯经IR、1H NMR和13C NMR确证为羟基脯氨酸正十二醇单酯,其Rf为0.703,熔点为53 ℃,油水分配系数为0.4,比羟基脯氨酸增加1.6,质量浓度为10 g/L的单酯可淬灭69.3%的超氧自由基和67.6%羟基自由基.

从骨胶中提取L-羟基脯氨酸和L-脯氨酸

从骨胶中提取L－羟基脯氨酸（L－HP）和L－脯氨酸（L－P），研究了胶原蛋白以L－HP为目的氨基酸的水解曲线；利用亚氨酸亚硝化的可逆性，从水解液中提取亚氨酸；用D61阳离子交换树脂层析分离L－HP和L－P；精制出L－HP和L－P晶体，得率分别为4．5％和4％。

Co-NH_(2)-BDC-L-羟基脯氨酸用作高效液相色谱手性固定相

采用L-羟基脯氨酸对金属有机框架材料Co-NH_(2)-BDC进行修饰,制备了手性Co-NH_(2)-BDC-L-羟基脯氨酸材料。采用“网包法”,将该材料涂敷于硅胶表面,得到了Co-NH_(2)-BDC-L-羟基脯氨酸手性固定相。考察了固定相的手性拆分能力,使用正己烷/异丙醇、甲醇/水作为流动相,使用该固定相拆分了24种手性化合物和5种苯系位置异构体。结果表明,所制备的手性色谱柱具有良好的手性拆分能力,在手性物质和苯系位置异构体分离中具有一定的应用价值。

基于同一天然手性源(4R)-羟基脯氨酸的(2S,4S)/(2S,4R)-4-氟谷氨酸的立体专一性合成

基于同一天然手性源(4R)-羟基脯氨酸,通过Mitsunobo反应、全氟丁基磺酰氟作用下的氟化反应以及NaIO4/RuO2作用下的氧化反应,立体专一性地合成了(2S,4S)/(2S,4R)-4-氟谷氨酸.

高分子负载的羟基脯氨酸催化丙酮与邻-和对-硝基苯甲醛的不对称直接Aldol加成反应(英文)

以4(R)-羟基脯氨酸为原料,合成了高分子负载的脯氨酸衍生物,并用来催化丙酮对邻-和对-硝基苯甲醛的直接不对称Aldol加成反应,ee值最高可达80%,催化剂至少可以重复利用三次.

二棕榈酰羟基脯氨酸纳米结构脂质载体及其凝胶的制备与体外透皮研究

目的制备二棕榈酰羟基脯氨酸纳米结构脂质载体(dipalmitoylhydroxyproline nanostructured lipid carriers,DPHP-NLC)及其凝胶,并考察其体外透皮效果。方法采用高压均质法制备DPHP-NLC,以粒径、多分散性指数(polydispersity index,PDI)、Zeta电位和包封率为评价指标,通过单因素试验考察处方工艺对DPHP-NLC制备的影响,运用Box-Behnken Design响应面法进一步筛选最优处方,并将DPHP-NLC制备成凝胶(DPHP-NLC-gel)。采用Franz扩散池法考察DPHP-NLC及DPHP-NLC-gel的体外透皮性能。结果按照最优处方制备的DPHP-NLC分散均匀,平均粒径为(112.0±1.8)nm,PDI为(0.258±0.005),包封率为(97.66±0.56)%。DPHP-NLC和DPHP-NLC-gel在24 h时体外透皮的单位面积累积渗透量(Q24)分别为(102.36±6.10)和(84.22±3.72)μg·cm^(-2),24 h单位面积滞留量分别为(90.60±6.99)和(60.50±3.95)μg·cm^(-2)。DPHP-NLC和DPHP-NLC-gel体外经皮渗透符合Higuchi方程。结论采用高压均质法制备的DPHP-NLC粒径较小,包封率高,提高了DPHP的皮肤透过量及滞留量。

L-脯氨酸-4-羟化酶的异源表达和合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的条件优化

L-脯氨酸-4-羟化酶(L-Proline-4-hydroxylase,P4H)是依赖α-酮戊二酸(α-KG)和Fe2+的双加氧酶成员之一,在反式-4-羟基-L-脯氨酸(trans-4-hydroxy-L-proline,t-4Hyp)等重要手性化合物的生物合成中发挥关键作用。本研究构建了来源于Bradyrhizobium japonicum USDA 6的P4H重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-28b-p4h BJ,SDS-PAGE和酶活检测结果表明,该菌株具有表达可溶性P4H和催化合成t-4Hyp的能力。通过优化,确定了该重组菌全细胞催化合成t-4Hyp较优的反应体系和条件:10 m L p H 6.5 80 mmol/LMES缓冲液、9 mmol/L L-Pro,6 mmol/L L-抗坏血酸,6 mmol/Lα-KG,0.8 mmol/L Fe SO4·7H2O,反应温度为35℃;在20 g/L湿细胞的催化反应中,t-4Hyp的合成量达到34.86 mg/L,比优化前(17.53 mg/L)提高了98.86%。该工作为进一步利用P4H生物催化法合成t-4Hyp奠定了一定的技术基础。

生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法

以芴甲氧羰酰氯（FMOC-Cl）为柱前衍生剂，四硼酸钠为缓冲溶液，建立了一种柱前衍生反相高效液相色谱（RP-HPLC）测定微生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法。优化了衍生反应条件，当衍生反应体系中水和乙腈的比例为66∶34，pH值为9.9时衍生效果最佳。采用Agilent Extend C-18柱进行分离，以0.1%三氟乙酸水溶液和乙腈作为流动相，梯度洗脱，检测波长263 nm。L-脯氨酸和反式-4-羟基-L-脯氨酸均在0.01~500 mg/mL范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999，检出限为5.00~7.00 ng/L，不同浓度下的平均回收率分别为98.9%~102%和97.9%~100%。该方法重现性好，精密度高，为定量分析微生物发酵液中的L-脯氨酸和反式-4-羟基-L-脯氨酸提供了有效方法。

TpBD(NH_(2))_(2)的L-羟基脯氨酸衍生物制备及其用作固定相

以3,5-三甲醛间苯三酚(Tp)和3,3′-二硝基联苯胺(DNB)为单体,L-羟基脯氨酸为手性源,采用溶剂热法合成了TpBD(NH_(2))_(2)的L-羟基脯氨酸衍生物,利用网包法制备了TpBD(NH_(2))_(2)的L-羟基脯氨酸衍生物手性柱并用于高效液相色谱固定相。在2种不同的流动相下,对多种外消旋化合物进行了分离实验。共分离11种外消旋体,在正己烷-异丙醇流动相下分离了2种外消旋化合物,分离效果最好的1-(9-蒽基)-2,2,2-三氟乙醇的分离度达到了7.16;在甲醇-水流动相下分离了9种外消旋化合物;色谱重现性良好。TpBD(NH_(2))_(2)的L-羟基脯氨酸衍生物材料在手性分离方面具有良好的分离效果。

反式-4-羟基-L-脯氨酸的研究进展

反式-4-羟基脯氨酸是胶原蛋白中特有的一种氨基酸,在动物体内具有重要的生理功能与独特的生物活性,广泛地应用于医药、化工、美容、疾病诊断等领域.介绍了反式-4-羟基脯氨酸的代谢、功能和应用,并着重对反式-4-羟基脯氨酸的生产方法进行综述,在此基础上探讨了生产反式-4-羟基脯氨酸的研究方向,为利用全细胞催化法和发酵法生产反式-4-羟基脯氨酸提供参考依据,同时展望了未来工业化生产反式-4-羟基脯氨酸发展方向.

putA与vgb基因对反式-4-羟基-L-脯氨酸产量的影响

反式-4-羟基-L-脯氨酸是在自然界中分布最广泛的一种羟脯氨酸,在医药、化工、食品和美容业等领域有广泛应用。为了在生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的过程中减少菌体对底物脯氨酸的降解,利用Red/ET同源重组系统敲除putA基因,并比较野生型菌株与缺失型菌株在不同培养基中的反式-4-羟基-L-脯氨酸产量,再引入vgb基因,考察该基因对反式-4-羟基-L-脯氨酸产量的影响。结果表明:putA基因的缺失能阻止菌体降解脯氨酸;碳源充足的情况下,GC培养基更有利于反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产;putA基因缺失型菌株能将被消耗的脯氨酸全部转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸;vgb基因的存在能显著提高反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量。

反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶基因密码子优化及表达

L-羟脯氨酸用途非常广泛,具有较好的应用价值,利用反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶能将L-脯氨酸通过生物转化法生成反式-4-羟基-L-脯氨酸.对指孢囊菌(Dactylosporangiumsp.)RH1的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶基因密码子优化及蛋白可溶性表达条件进行了探索.基因p4hy的GC摩尔百分含量由73.63降至61.45;在23℃下,加入1mmol/L IPTG及分子伴侣pG-KJE8后可溶性蛋白的含量明显增多;密码子优化后的酶蛋白P4HY具有较好的催化生产羟脯氨酸的能力,反应40h后转化率达到72.8%.

L-脯氨酸羟基化酶的提纯及活性研究

目的 :以猪肺为原料 ,提取能把游离的L -脯氨酸羟化为L -羟脯氨酸的羟基化酶。方法 :把新鲜猪肺在提取液中低温高速匀浆 ,然后用 4 0 0 0r min离心分离 2 0min ,取上清液进一步用 80 0 0r min高速离心后 ,分别用盐析和有机溶剂的方法提取羟基化酶 ;结果 :不同的方法都得到棕色的固体。经电泳测定该固体纯度高 ,溶于水中后能把游离的L -脯氨酸羟化为L -羟脯氨酸。测定其分子量约为 6 6 ,0 0 0 ;等电点约为 4。结论 :所采用的提取工艺流程具有简单、效率高和实用的特点 ,且猪肺便宜、易得 ,适合较大规模的制备。

代谢工程改造大肠杆菌合成反式-4-羟基-L-脯氨酸

通过比对筛选,从Micromonospora sp.CNB394中获得高活性的L-脯氨酸-4-羟基化酶,随后利用规律成簇的间隔短回文重复-associated protein 9基因编辑方法,通过强化L-脯氨酸合成途径和引入高活性的L-脯氨酸-4-羟基化酶,构建1株以葡萄糖为碳源合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的大肠杆菌基因工程菌HYP15。摇瓶发酵30 h,工程菌的反式-4-羟基-L-脯氨酸产量达到13.6 g/L。5 L发酵罐分批补料发酵40 h,反式-4-羟基-L-脯氨酸产量达到48.6 g/L,糖酸转化率和平均生产强度分别达到21.6%和1.22 g/(L h),具有良好的工业应用前景。

基于表达和反应耦联的羟基化酶催化合成反式-4-羟基-L-脯氨酸

反式-4-羟基-L-脯氨酸(trans-4-Hpro)是药物合成中一种重要的中间体,可以用来合成碳青霉烯类抗生素类高附加值药物。目前,已有许多通过生物催化转化trans-4-Hpro的研究,但如何利用有限的酶资源实现其高效转化是难点。本文中,笔者基于已知脯氨酸4羟基化酶(GenBank No.BAA20094.1)的基因序列,利用基因挖掘工具获得Kutzneria albida来源的新型羟基化酶Ka PH1,以L-脯氨酸为底物,构建羟基化酶表达和反应过程耦联催化合成trans-4-Hpro的耦联反应体系。结果表明,Escherichia coli pET-28a-Ka PH1(E.coli Ka PH1)菌株具有高效催化合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的能力,通过对E.coli Ka PH1催化体系的优化,以20 mmol/L L-脯氨酸作为底物,外源添加等摩尔浓度的2酮戊二酸,产量最高达到1246 mg/L,比优化前(1051 mg/L)提高了18.5%。进一步对表达和反应的耦联过程进行调控,反应体系中不添加2酮戊二酸,在底物浓度为20 mmol/L时,产量最高达到2223 mg/L,转化率为84.8%;在底物浓度为100 mmol/L时,产量最高达到7860 mg/L,转化率为59.9%。