羟基自由基氧化体系对带鱼蛋白理化性质的影响

采用国标法测定新鲜带鱼基本营养成分和氨基酸组成,并进行营养评价分析。新鲜带鱼中,粗蛋白含量占干重的88.19%,各氨基酸评分(AAS)较高,必需氨基酸指数(EAAI)为1.64,具有较高的营养价值。在模拟体系中测定脂肪氧化指标2-硫代巴比妥酸(TBARS)值及蛋白氧化指标蛋白羰基、巯基含量等,并通过凝胶电泳分析阐明脂肪氧化和蛋白氧化对蛋白质溶解性及消化性影响。随着氧化时间的延长,TBARS值及蛋白羰基含量显著增加(p<0.05),巯基含量先增加后减少,氧化1 h时达到最大值。电泳图谱显示,氧化后带鱼肌球蛋白重链发生交联聚集。随着氧化程度增加,其蛋白盐溶性显著降低(p<0.05),但带鱼蛋白体外消化率在氧化1 h后达到最大值92.09%,随后逐渐降低。羟基自由基氧化体系促进带鱼脂肪和蛋白质发生氧化,蛋白盐溶性降低,但适度氧化可提高蛋白质的体外消化率。

羟基自由基氧化对牛血清白蛋白结构及水合特性的影响

【目的】研究羟基自由基(·OH)氧化对蛋白结构及其水合特性的影响,探讨氧化介导的关于蛋白质和水分相互作用的变化情况。【方法】将牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)溶解在含15 mmol·L^(-1)的PIPES缓冲溶液中(pH 6.0),并在不同浓度H_2O_2(0、0.5、1.0、5.0、10.0和20.0 mmol·L^(-1))的铁-抗坏血酸-过氧化氢(FeCl_3-Vc-H_2O_2)羟基自由基氧化体系孵育12 h,采用氨基酸自动分析仪分析BSA不同程度氧化的氨基酸含量变化;通过测定羰基含量、巯基含量分析蛋白的氧化程度;通过测定BSA表面疏水性、离子键、氢键,考察BSA氧化不同程度后水合能力的变化情况;通过测定Zeta电位值来分析蛋白氧化后表面电荷的变化;采用傅里叶红外光谱法分析蛋白二级结构的变化。【结果】随着羟基自由基氧化体系中H_2O_2浓度的增加,氨基酸含量呈下降趋势,但不同种类氨基酸对·OH氧化敏感性不同,在1 mmol·L^(-1) H_2O_2处理浓度下,苏氨酸(Thr)、赖氨酸(Lys)含量显著降低,较对照组(未经H_2O_2处理组)分别下降了4.30%、4.22%;当H_2O_2浓度升高到20 mmol·L^(-1)时,较对照组蛋氨酸(Met)、酪氨酸(Tyr)、组氨酸(His)这3类氨基酸的含量下降程度最大,分别为35.32%、19.19%、11.15%,其次为异亮氨酸(Ile)、甘氨酸(Gly)、半胱氨酸(Cys)。随H_2O_2浓度的增加,BSA的羰基含量显著增加(P<0.05),20 mmol·L^(-1) H_2O_2处理组比对照组羰基含量升高了57.52%;巯基含量显著降低(P<0.05),20 mmol·L^(-1) H_2O_2处理组比对照组巯基含量降低了74.04%,蛋白氧化程度显著加剧;BSA经氧化处理后,蛋白二级结构发生变化,α-螺旋、无规卷曲含量显著降低(P<0.05),β-折叠、β-转角含量显著增加(P<0.05),多肽链中α-螺旋结构伸展变成线性结构,蛋白表面疏水性随着氧化程度的加剧而显著增加(P<0.05),蛋白持水力降低;同时氧化作用降低了蛋白表面的净电荷数,Zeta电位的绝对值随着羟基自由基氧化体系中H_2O_2浓度的增加而显著降低(P<0.05),离子键和氢键作用力显著减弱,降低了蛋白-水分子相互作用力,蛋白持水力降低。【结论】BSA在羟基自由基氧化体系中,存在显著的浓度效应,随着氧化程度加剧,蛋白表面的净电荷显著降低,离子键和氢键作用力显著减弱,蛋白二级结构发生了变化,蛋白-水分子相互作用力降低。

大菱鲆过敏原氧化后理化性质及与IgE结合能力的变化

为了探明在蛋白质氧化过程中过敏原理化性质的变化规律,以大菱鲆为研究对象,采用羟基自由基氧化体系对大菱鲆过敏原进行不同程度的氧化,检测其功能基团的变化规律,并分别利用鱼类过敏患者血清和兔抗大菱鲆小清蛋白多克隆抗体分析大菱鲆过敏原小清蛋白免疫功能的变化规律.结果表明:大菱鲆蛋白经过5h氧化后有27%的蛋白质发生了沉淀;氧化5h后在上清液和沉淀中的蛋白质羰基含量分别增加了9.7倍和2.0倍,巯基含量分别降低了13.5%和29.1%.与对照组相比,实验组12、26和41ku处的蛋白质含量减少,然而在沉淀中36ku左右处的蛋白质含量随着氧化时间的增长而增加.免疫印迹结果显示,实验组蛋白与鱼类过敏患者血清之间的特异性反应强度降低.间接酶联免疫结果表明,经过5h氧化处理后在上清液和沉淀中大菱鲆过敏原活性分别降低了16.7%和31.5%.说明氧化改变了大菱鲆蛋白的理化性质,并可能改变了大菱鲆蛋白的结构,进而影响大菱鲆过敏原蛋白的功能性质.