芫花叶中总提物和羟基芫花素的提取工艺

目的:考察芫花叶中总提物和羟基芫花素的提取工艺。方法:通过正交试验以总提物和羟基芫花素作为指标考察4个因素(溶剂类型,提取时间,溶剂用量,提取次数)、3个水平对提取效果的影响。结果:总提物的最佳工艺为用蒸馏水、煎煮90min、8倍量、提取1次;羟基芫花素的最佳工艺为用蒸馏水、煎煮60min、10倍量、提取2次。结论:溶剂的类型对总提物提取率影响最大,而提取时间对羟基芫花素提取率影响最大,本研究确定的羟基芫花素的提取工艺合理、可行。

RP-HPLC法同时测定芫花中芹菜素、羟基芫花素、芫花素的含量

目的对芫花中芹菜素(Ⅰ)、3′-羟基芫花素(Ⅱ)和芫花素(Ⅲ)3种黄酮苷元进行含量测定。方法采用反相高效液相色谱法,使用大连依利特HypersilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液(60∶40),流速1.0mL·min^-1,检测波长340nm,柱温25℃。结果化合物Ⅰ～Ⅲ的线性范围(n=6)依次为0.1~5.0μg(r=0.9999),0.1~1.0μg(r=0.9999),0.1~5.0μg(r=0.9999)。化合物Ⅰ～Ⅲ平均回收率(n=6)分别为99.6%、102.8%,100.2%;RSD分别为1.8%、1.5%,1.1%。结论本方法可准确地同时测定芫花中3个黄酮苷元的含量,方法精密度高、简便、快速。

芫花炮制前后羟基芫花素、芫花素的含量测定

应用双波长薄层扫描法对芫花炮制前后羟基芫花素和芫花素的含量进行了测定对比,结果表明:醋炙芫花中羟基芫花素、芫花素的含量均高于生芫花,不同的醋制品种中其含量亦有差别。

LC-MS/MS测定大鼠口服芫花粗提物后芹菜素、3’-羟基芫花素和芫花素的血药浓度

目的建立一个灵敏、快速的液相色谱-质谱联用法同时测定大鼠口服芫花粗提物后芹菜素、3’-羟基芫花素和芫花素在血浆样品中的浓度。方法以秦皮甲素为内标,大鼠血浆样品经液液萃取后,以甲醇-0.5%甲酸（80∶20）为流动相,采用Lichrosorb Rp-C18（4.5 mm×150 mm,5μm）色谱柱分离,通过ESI三重四级杆串联质谱,以多反应监测（MRM）方式进行检测。结果芹菜素、3’-羟基芫花素和芫花素测定方法的线性范围均为10~2 000 ng·m L-1;定量下限为10 ng·m L-1。该方法被成功应用于芫花粗提物在大鼠体内的药动学研究。结论该方法灵敏度高,操作简便,分析速度快,适用于含有芹菜素、3’-羟基芫花素或芫花素的药物测定或药动学研究。

基于分子对接及酶抑制作用预测羟基芫花素肝毒性风险

目的:考察羟基芫花素对UGT1A1酶活性的影响,评价其肝毒性。方法:采用计算机分子对接技术考察羟基芫花素与UGT1A1酶的结合方式及亲和作用强弱;采用体外人肝微粒体抑制实验评价羟基芫花素对人源UGT1A1酶抑制作用强弱。结果:分子对接显示羟基芫花素对接进入UGT1A1酶蛋白F活性区,与底物胆红素对接活性区重合,但亲和作用较弱;体外抑制实验提示羟基芫花素对UGT1A1酶具有弱抑制作用,抑制类型为竞争型抑制,与分子对接结果一致。结论:羟基芫花素对UGT1A1酶活性影响较小,提示其肝毒性风险小。

羟基芫花素对UGTs及UGT1A1活性抑制作用种属差异的体外研究

考察羟基芫花素对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)及UGT1A1活性的影响,为预测其与其他药物的代谢性相互作用提供理论借鉴。该实验采用体外肝微粒体孵育模型,以4-硝基酚(4-NP)为底物检测UGTs活性;β-雌二醇为底物检测UGT1A1活性,利用UV和HPLC测定底物或代谢物含量。结果表明,在大鼠、小鼠和人肝微粒体(HLM)孵育体系,羟基芫花素能显著抑制UGTs活性;对UGT1A1,在小鼠肝微粒体(MLM)孵育体系中,羟基芫花素几乎无抑制作用(IC50=190μmol·L-1);在大鼠肝微粒体(RLM)和重组酶(r UGT1A1)孵育体系中,羟基芫花素表现为中等强度的抑制作用(IC50=10.93,20.07μmol·L-1),抑制类型分别为竞争性抑制和线性混合型抑制;在HLM孵育体系中,羟基芫花素表现为弱抑制作用(IC50=76.31μmol·L-1),抑制类型为竞争性抑制;其抑制强弱顺序为RLM>r UGT1A1>HLM>MLM。综上,羟基芫花素对不同肝微粒体孵育体系中UGTs及UGT1A1活性均可产生抑制作用且存在种属差异性,提示羟基芫花素可能存在基于UGT1A1酶的药物相互作用。该研究可为合理开发利用羟基芫花素提供实验依据,并为研究药物在临床上的联合用药提供理论借鉴。

芫花叶的黄酮类化学成分分析

目的:分离与鉴定芫花叶黄酮类化合物。方法:将芫花叶乙酸乙酯萃取物利用硅胶柱和Toyopearl HW-40(C)柱层析法分离黄酮类化学成分,利用化学反应及HNMR谱鉴定其结构。结果与结论:从芫花叶的乙酸乙酯萃取物中分得两种黄酮类化合物Ⅰ和Ⅱ,分别鉴定为羟基芫花素、芫花叶苷,将Ⅱ用稀盐酸水解去一个葡萄糖之后,得其苷元Ⅱa羟基芫花素。

不同炮制方法对芫花中4种黄酮苷元含量的影响

目的:采用高效液相色谱法分析芫花不同炮制品中4种黄酮苷元成分的含量,研究不同炮制方法对4种成分的影响。方法:采用Hanbon Hedera C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇-0.4%醋酸水溶液(70∶30),流速1.0mL.min-1,柱温30℃,检测波长338nm。结果:在线性范围内,木犀草素、芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素4种化合物分离度良好。在相应浓度范围内,4种化合物线性关系良好,r均在0.999 8以上;精密度RSD≤1.64%;平均加样回收率为99.69%～101.70%。结论:该方法快速、准确,适用于芫花不同炮制品中4种化学成分的定量分析。在7种炮制方法中,醋制法(药典)较其他6种方法能明显提高木犀草素、芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素的含量,同时能提高总黄酮苷元含量。

芫花叶中的黄酮甙

从芫花（Daphne genkwa Sieb. et Zucc.）的干燥叶中分离出两种黄酮化合物,经化学和光谱分析,鉴定为木犀草甙（galuteolin）,系首次从本植物中分离得到;另一个结构确定为3′-羟基芫花素-5-O-β-D-葡萄糖甙（3′-hydroxygenkwanin-5-O-β-D-glucoside）,定名为芜花叶甙（yuanhuanin）。讨论了芫花叶甙及其甙元羟基芫花素的13C-核磁共振谱并进行了峰的归属。

宣白承气汤治疗支气管哮喘的网络药理学分析

目的 运用网络药理学方法探讨宣白承气汤治疗支气管哮喘的作用机制。方法 通过TCMSP数据库筛选宣白承气汤的活性成分及作用靶点,通过GeneCards数据库筛选支气管哮喘的疾病相关靶点,获取二者交集靶点,即宣白承气汤治疗支气管哮喘的潜在作用靶点。使用Cytoscape 3.7.2软件构建“疾病-药物-活性成分-靶点”网络,并分析网络中的核心活性成分;将交集靶点导入STRING数据库进行蛋白互作(PPI)网络分析,筛选出潜在核心靶点;运用R语言软件包对交集靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。结果 共筛选得到34个活性成分及64个潜在作用靶点(交集靶点);获得香叶木素、羟基芫花素、泽兰黄醇素、α-菠菜甾醇等核心活性化合物,IL-6、MAPK3、MMP-9、PPARG和ICAM1等核心靶点;共筛选得到67条信号通路,关键通路包括神经活性配体-受体相互作用信号通路、c AMP信号通路、钙信号通路、TNF信号通路、Th17细胞分化、Th1/Th2细胞分化等。结论 宣白承气汤可能是通过香叶木素、羟基芫花素等关键活性成分,作用于IL-6、MAPK3、MMP-9等潜在核心靶点,调控神经活性配体-受体相互作用、cAMP等信号通路,从而发挥治疗支气管哮喘的作用。

芫花药材中4个黄酮苷元的定性鉴别定量分析

目的:建立芫花药材中木犀草素、芹菜素、羟基芫花素、芫花素4个黄酮苷元的定性鉴别与定量分析方法。方法:采用薄层色谱法鉴别芫花药材中木犀草素、芹菜素、羟基芫花素和芫花素;采用高效液相色谱法同时测定这4个黄酮苷元的含量并制订含量限度要求。薄层色谱条件:以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶4∶0.2)系统展开,置365nm下检视荧光。高效液相色谱条件:Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇-水(60∶40∶0.5),流速0.8mL·min-1,检测波长350nm(木犀草素、羟基芫花素)、338nm(芹菜素、芫花素),柱温40℃,记录时间40min。结果:芫花药材中木犀草素、芹菜素、羟基芫花素、芫花素4个成分的薄层色谱鉴别特征明显、专属性强。采用高效液相色谱法测定含量,木犀草素、芹菜素、羟基芫花素、芫花素的线性范围依次为0.032～0.16μg(r=0.9994),0.072～0.36μg(r=0.9995),0.098～0.49μg(r=0.9995),0.15～0.75μg(r=0.9997);平均回收率(n=5)依次为99.86%(RSD=1.8%),101.0%(RSD=2.6%),100.3%(RSD=1.8%),100.7%(RSD=2.6%);芫花药材中4种成分的总含量应不低于0.6%,其中木犀草素的含量不低于0.01%,芹菜素不低于0.2%,羟基芫花素不低于0.05%,芫花素不低于0.2%。结论:本方法操作简便,结果准确,能够同时测定芫花药材中4个黄酮苷元的含量,提高了芫花药材的质量控制标准,为其临床用药的安全性和有效性提供质量保证。

多成分同时比较芫花及芫花叶化学组成

目的:多成分比较芫花花蕾和芫花叶的化学组成。方法:以芹菜素、木犀草素、羟基芫花素、芫花素为对照品,采用RP-HPLC方法测定芫花花蕾及芫花叶中4个成分的含量,比较2个药用部位的成分组成差异。Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-水-冰醋酸(58∶42∶0.5),流速0.8 mL·min-1,检测波长350 nm(木犀草素、羟基芫花素)、338 nm(芹菜素、芫花素),柱温35℃。结果:芫花花蕾中这4个成分的质量分数依次为0.017%,0.088 4%,0.069 9%,0.059 3%,芫花叶中这4个成分质量分数依次为0.011 8%,未检测到,0.012 3%,未检测到。结论:芫花叶和芫花花蕾含有两个相同成分,但含量不同;而花蕾中的两个成分在叶中未检测到,表明叶与花蕾成分不同,可根据临床治病目的分别入药。

大花益母草的化学成分研究

目的研究大花益母草Leonurus macranthus的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱和半制备HPLC等色谱技术进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从大花益母草地上部分70%丙酮提取物的二氯甲烷萃取部位分离鉴定了19个化合物,分别鉴定为(+)-丁香脂素(1)、(+)-1-羟基丁香脂素(2)、rayalinol(3)、erythro-guaiacylglycerol-β-O-4′-coniferyl ether(4)、(7R,7′R,7″S,8S,8′S,8″S)-3′,4″-dihydroxy-3,5,4′,5″-tetramethoxy-7,9′:7′,9-diepoxy-4,8″-oxy-8,8′-sesquineo-lignan-7″,9″-diol(5)、(7R,7′R,7″S,8S,8′S,8″S)-4′,5″-dihydroxy-3,5,3′,4″-tetramethoxy-7,9′:7′,9-diepoxy-4,8″-oxy-8,8′-sesquineo-lignan-7″,9″-diol(6)、芫花素(7)、3′-羟基芫花素(8)、圣草酚(9)、异莨菪亭(10)、对香豆酸(11)、咖啡酸甲酯(12)、反式-阿魏酸(13)、丁香醛(14)、香草酸(15)、oct-1-en-3-ylβ-glucopyranoside(16)、5-羟基-2-吡咯烷酮(17)、pterolactam(18)和烟酰胺(19)。结论化合物1~6和9~19为首次从益母草属植物中分离得到,化合物7和8为首次从大花益母草中分离得到。