液质联用法同时测定人血浆中阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀、对羟基阿托伐他汀及其药动学

目的建立液质联用（LC—MS／MS）方法测定人血浆中阿托伐他汀（AT）、邻羟基阿托伐他汀（O-AT）、对羟基阿托伐他汀（P-AT）的含量，并研究男性健康志愿者单剂量服用阿托伐他汀片后AT及其代谢产物O-AT、P—AT在体内的药动学行为。方法24名健康男性志愿者单剂量口服阿托伐他汀片20mg，于指定时间采集血样，血浆样品经乙酸乙酯提取，采用LC—MS／MS测定人血浆中AT及其代谢产物的浓度。色谱柱为PhenomenexLunaC8（2．0mm×50mm，3μm），流动相为乙腈：0．1％甲酸水溶液（50：50，V／V），检测离子为m／z5 59．3→440．3（AT）；m／z575．3→440．3（O-AT，P—AT）：m／z564．4→445．3（阿托伐他汀氘标AT—d5）；m／z580．4→445．3（邻羟基阿托伐他汀氘标O-AT-d5，对羟基阿托伐他汀氘标P-AT-d5）。测定AT、O-AT、P-AT血药浓度，计算其药动学参数。结果AT、O-AT、P-AT线性范围分别为0．0287～22．92μg·L-1（r=0．9986）、0．0138～11．00μg·L-1（r=0．9963）、0．0087～1．11μg．L-1（r=0．9983）。方法学考察均符合要求。日内、日间变异系数（RSD）均小于10％，精密度和准确度等均符合生物样品分析要求。人体中AT药动学参数：ρmax为（6．33±2．78）μg·L-1，tmax为（1．70±1．40）h，t1/2β为（10．67±2．05）h，AUC0-t为（48．59±14．65）μg·h·L-1；0-AT药动学参数：ρmax为（4．53±1．94）μg·L-1，tmax为（2．90±1．30）h，t1/2β为（11．54±2．04）h，AUC0-t为（52．82±18．55）μg·h·L-1；P-AT药动学参数：ρmax为（0．25±0．14）μg·L-1，tma为（9．1±10．2）h，t1/2β为（29．51±13．94）h，AUC0-t为（7．69±3．56）μg·h·L-1。结论建立的LC—MS／MS分析方法准确灵敏，适于临床药动学研究。

同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀及其活性和毒性代谢产物的方法建立与应用

目的 建立同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀(ATV)及其活性代谢产物2-羟基阿托伐他汀酸(2-HAT)、4-羟基阿托伐他汀酸(4-HAT)和毒性代谢产物阿托伐他汀内酯(ATL)的分析方法并应用于药代动力学研究。方法 采用液相色谱-串联质谱(LCMS/MS)法进行分析。采用一步沉淀法对血浆样品进行处理(血浆样品经酸化调节pH值防止构型转化),采用梯度洗脱分析样品,分析时间为5 min;采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行正离子检测,ATV及其代谢产物2-HAT、4-HAT、ATL及内标匹伐他汀的定量离子对的质荷比(m/z)分别为559.3→440.2、575.2→440.3、575.0→440.2、540.9→448.2和422.2→290.0。对分析方法进行全面的方法学考察后测定ATV及其代谢产物2-HAT、4-HAT、ATL的浓度,并采用WinNonlin 6.1的非房室模型计算ATV及其代谢产物的药代动力学参数。结果 方法学考察结果表明,空白血浆的内源性物质不干扰待测成分的测定,标准曲线线性关系良好,ATV、2-HAT、4-HAT和ATL的定量下限分别为0.5、0.5、0.25、0.063 nmol/L。精密度、准确度、回收率、基质效应和稳定性考察均符合生物分析要求。药代动力学分析表明,大鼠灌胃给药后,ATV迅速代谢,主要以ATV和2-HAT的形式暴露于血液循环,内酯型代谢物浓度最低。结论 建立了针对ATV及其活性和毒性代谢产物的准确、快速、灵敏的血药浓度分析方法,运用该方法可全面解析阿托伐他汀钙在大鼠体内的药代动力学特征。

阿托伐他汀钙片在中国健康受试者的生物等效性试验

目的:研究阿托伐他汀钙片与原研制剂立普妥的人体生物等效性。方法:64例健康受试者参加空腹试验,64例健康受试者参加餐后试验,均采用两周期双交叉试验设计,先后口服受试制剂或参比制剂10 mg,采用液相色谱-串联质谱法测定人血浆中阿托伐他汀及其两种活性代谢物的浓度。使用WinNonlin 7.0软件进行数据处理。结果:空腹给药后阿托伐他汀钙片受试制剂与参比制剂的C_(max)分别为(4.31±2.24)、(4.64±2.73) ng/mL,T_(max)分别为(0.58±0.36)、(0.58±0.35) h,t_(1/2)分别为(9.10±2.67)、(9. 16±3. 13)h,AUC_(0-t)分别为(23.79±10.73)、(21.93±9.29)ng·h·mL^(-1),AUC_(0-∞)分别为(24. 87±10. 88)、(23.04±9.29) ng·h·mL^(-1)。餐后给药后阿托伐他汀钙片受试制剂与参比制剂的C_(max)分别为(2.41±1.37)、(2.39±1.21) ng/mL,T_(max)分别为(2.38±1.43)、(2.15±1.54) h,t_(1/2)分别为(10.86±8.77)、(9.59±2.81) h,AUC_(0-t)分别为(19.03±9.26)、(19.25±9.20) ng·h·mL^(-1),AUC_(0-∞)分别为(20.25±9.30)、(20.39±9.27)ng·h·mL^(-1)。结论:阿托伐他汀钙片受试制剂与参比制剂在空腹和餐后条件下均生物等效。

LC-MS/MS测定大鼠血浆中阿托伐他汀及其活性代谢产物

目的建立LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀及对羟基阿托伐他汀的方法,并应用于CYP3A酶诱导模型大鼠和正常大鼠体内阿托伐他汀的药动学研究。方法采用甲基叔丁基醚-乙酸乙酯(50︰50)液液萃取法提取大鼠血浆中药物。使用XBridgeC18(2.1mm×250mm,3.5μm)色谱柱,柱温35℃;流动相为0.1%甲酸-乙腈(40∶60),等度洗脱4.4 min,流速0.2 mL·min?1;进样体积10μL。质谱采用电喷雾离子(ESI)源,以正离子多反应监测(MRM)模式进行定量分析,选择m/z559.1→440.1(阿托伐他汀),m/z575.3→440.2(邻羟基阿托伐他汀/对羟基阿托伐他汀),m/z 564.3→445.3(阿托伐他汀-d5,内标)作为检测离子对。以地塞米松80 mg·kg?1·d?1连续灌胃给药4 d,建立CYP3A酶诱导模型,取正常及模型大鼠给药后0,0.083,0.17,0.25,0.33,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6 h血样于肝素抗凝管中,离心收集血浆,冷冻保存直到进行测定。结果阿托伐他汀及其2种代谢产物在0.49～500.00 ng·mL?1内均有良好的线性关系(r2>0.99);批内、批间精密度RSD<15%(n=6);方法的提取回收率和基质效应均满足生物样品的检测要求;含药血浆在室温放置4,24h、4℃放置3d稳定。诱导组大鼠血浆中阿托伐他汀血药浓度达峰时间(Tmax)提前,血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)显著低于正常组,消除速率常数K和清除率CL略高于正常组。结论新建立的方法简便、稳定、灵敏,能够用于大鼠血浆内阿托伐他汀及其活性代谢产物的浓度测定和药动学研究。进入CYP3A酶诱导模型大鼠与正常大鼠体循环的活性药物成分差异显著。

高效液相色谱质谱联用法测定人血浆中阿托伐他汀及代谢产物的质量浓度

目的：建立高效液相色谱－质谱联用法测定人血浆中阿托伐他汀及代谢产物的质量浓度。方法用固相萃取法处理血浆，用 XTerra · MS C18色谱柱，以95％乙腈－5 mmol· L－1碳酸氢铵为流动相，梯度洗脱，用正离子扫描，多反应监测方式测定样品中药物的质量浓度，检测专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果血浆样品中，阿托伐他汀、邻羟基化阿托伐他汀、对羟基化阿托伐他汀的回归方程分别为Y＝1．82X－2．94×10^－3（r＝0．9995），Y＝0．28X－4．14×10^－5（ r ＝0．9997），Y ＝0．60X＋1．11×10^－3（r＝0．9974）；阿托伐他汀及代谢产物在0．1～40．0 ng· mL－1线性关系良好，定量下限为0．1 ng· mL－1。血样日内与日间 RSD 均小于15％，平均回收率＞80％，且稳定性均较好。结论本方法简便快速、灵敏准确、特异性强，适用于阿托伐他汀及代谢产物的体内药代动力学研究。