7,8-二羟基黄酮对脂多糖诱导心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

目的研究7,8-二羟基黄酮(7,8-dihydroxyflavone,7,8-DHF)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导心肌细胞损伤中的作用及机制。方法传代培养H9c2心肌细胞系,随机分为对照组(Ctrl)、LPS组、LPS+7,8-DHF组和7,8-DHF单独处理组,给药24 h后观察细胞形态,分别采用MTT法检测细胞活力、Live/Dead染色检测细胞活死比例、Mitosox染色检测细胞线粒体氧化应激水平,Western blot技术检测Akt、核因子κB(NF-κB)p65、信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)等蛋白表达水平。结果7,8-DHF增加LPS诱导的心肌细胞活力,减少氧化应激水平和细胞死亡。7,8-DHF激活LPS诱导的心肌细胞Akt信号,抑制STAT3磷酸化水平和NF-κB p65蛋白表达。结论7,8-DHF可能通过激活Akt、抑制磷酸化STAT3和NF-κB p65信号分子减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。

7,8-二羟基黄酮通过Wnt/β-catenin信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化

目的 探究7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化的影响和机制。方法 将从健康人牙周膜组织中分离培养的hPDLSCs用不同浓度的7,8-二羟基黄酮(0,0.5,1,5,10,20,40μmol/L)处理,通过MTT法检测hPDLSCs活性。将hPDLSCs分为5组:对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和XAV939(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)组。各组hPDLSCs均用成骨诱导液培养,对照组的成骨诱导液不添加药物,低剂量组、中剂量组和高剂量组的成骨诱导液中分别添加0.5,1,5μmol/L的7,8-二羟基黄酮,XAV939组的成骨诱导液中同时添加5μmol/L的7,8-二羟基黄酮和10μmol/L的XAV939。各组hPDLSCs共培养21 d,每2 d更换培养基,检测碱性磷酸酶(ALP)活性。通过茜素红染色观察钙化结节形成(OD_(590 nm))。通过qRT-PCR检测Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Wnt-3a、β-catenin和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的mRNA表达水平。通过Western blot检测Wnt-3a、β-catenin和GSK-3β的蛋白表达水平。结果 不同浓度的7,8-二羟基黄酮处理后,hPDLSCs的相对活力差异无统计学意义(F=1.693,P=0.152)。与对照组相比,低剂量组、中剂量组和高剂量组hPDLSCs的ALP相对活性升高,钙化结节形成量升高,Runx2、OCN、OPN和BMP-2的mRNA相对表达量升高,Wnt-3a和β-catenin蛋白相对表达量升高,GSK-3β蛋白相对表达量降低(均P<0.05)。与低剂量组相比,中剂量组和高剂量组hPDLSCs中ALP相对活性升高,钙化结节形成量升高,Runx2、OCN、OPN和BMP-2的mRNA相对表达量升高,Wnt-3a和β-catenin蛋白相对表达量升高,GSK-3β蛋白相对表达量降低(均P<0.05)。与高剂量组相比,XAV939组hPDLSCs中ALP相对活性降低,钙化结节形成量降低,Runx2、OCN、OPN和BMP-2的mRNA相对表达量降低,Wnt-3a和β-catenin蛋白相对表达量降低,GSK-3β蛋白相对表达量升高(均P<0.05)。结论 7,8-二羟基黄酮通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进hPDLSCs成骨分化。

7-羟基黄酮及磷酰化7-羟基黄酮与DNA的弱相互作用荧光法研究

以溴化乙锭(EB)为荧光探针,研究了7-羟基黄酮及磷酰化7-羟基黄酮与DNA的弱相互作用。实验结果表明,两种化合物与DNA间均存在弱相互作用,但与7-羟基黄酮相比,磷酰化7-羟基黄酮对DNA更具亲和力。随着温度的升高,7-羟基黄酮及磷酰化7-羟基黄酮对DNA-EB体系的荧光猝灭常数降低,两种化合物均可与DNA形成复合物,此猝灭过程为静态猝灭。根据Stern-Vol mer方程和Scatchard方程,常温下7-羟基黄酮及磷酰化7-羟基黄酮对DNA-EB体系的荧光猝灭常数和它们与DNA的固有的结合常数分别为Kq1=601L.mol-1,Kq2=1381L.mol-1;K1=2.07×104L.mol-1,K2=3.19×104L.mol-1。

7-羟基黄酮和-7,8-二羟基黄酮的改良合成与结构修饰

利用改良的Baker Venkatarama重排法,以乙酰芳基酚为原料,经过二步反应合成了7 羟基黄酮(3a)和7,8 二羟基黄酮(3b).通过对7 羟基黄酮和7,8 二羟基黄酮A环酚羟基的结构修饰,分别合成了三个7位取代和二个含苯并二氧杂环的新黄酮衍生物(4 6,7a,7b).所合成化合物的结构已由MS,1HNMR,IR等波谱方法所证实.

三(3-羟基黄酮)合铝(Ⅲ)的合成及晶体结构

合成了三（３－羟基黄酮）合铝（Ⅲ），制得［Ａｌ（Ｃ１５Ｈ９Ｏ３）３］２·２ＣＨＣｌ３·８Ｈ２Ｏ晶体，Ｘ射线衍射结果表明：其结构属于三方晶系，空间群为Ｒ３．晶胞参数：ａ＝ｂ＝１．６５５８（３）ｎｍ，ｃ＝３．６４６５（２０）ｎｍ，α＝β＝９０°，γ＝１２０°，Ｖ＝８．６５６０８（０．００５８６）ｎｍ３，Ｄｃ＝１．４５ｇ／ｃｍ３，μ（ＭｏＫα）＝３．２０ｃｍ－１，Ｆ（０００）＝３９２４．分子中每个３－羟基黄酮以其独特的酮基和羟基同时与Ａｌ３＋配位。

7(6)-羟基黄酮的简便合成及相关谱学分析

以2,4(5)-二羟基苯乙酮和苯甲酰氯为原料,在碳酸钾催化下一步合成了相应的β-丙二酮型化合物1-[4-(苯甲酰氧基)-2-羟基苯基]-3-苯基-1,3-丙二酮(8a)和1-[5-(苯甲酰氧基)-2-羟基苯基]-3-苯基-1,3-丙二酮(8b)。化合物8a和8b分别在1%氢氧化钾水溶液中回流处理,分别得到7-羟基黄酮(9a)和6-羟基黄酮(9b)。用红外光谱、核磁共振氢谱和质谱对所合成的化合物进行了结构表征。

5,6,7,4′-四羟基黄酮和5,6,7,4′-四甲氧基黄酮高分辨电喷雾串联质谱裂解规律对比研究

以5,6,7,4′-四羟基黄酮和5,6,7,4′-四甲氧基黄酮为例,运用高分辨电喷雾串联质谱在正离子模式下(HR-ESI-MS/MS)获得的碎片离子,根据一、二级质谱离子的精确质荷比,分别推导出两种黄酮可能的裂解途径,并比较多甲氧基、多羟基黄酮质谱裂解规律的异同。结果表明:在正离子模式下,5,6,7,4′-四羟基黄酮和5,6,7,4′-四甲氧基黄酮的一级质谱均可获得稳定的准分子离子。5,6,7,4′-四羟基黄酮的二级质谱碎片离子由准分子离子[M+H]+经RDA裂解及进一步脱水和(或)脱一氧化碳中性分子产生,直接由准分子离子脱水及一氧化碳中性分子获得的碎片离子丰度比较低;5,6,7,4′-四甲氧基黄酮二级质谱碎片即可由准分子离子[M+H]+直接经RDA裂解,还可先脱去乙烷或甲烷中性分子再经RDA裂解(1,3断裂)获得。此外,该化合物还有大量的碎片离子是由准分子离子[M+H]+分别经脱水、甲烷、乙烷或进一步脱甲基、一氧化碳而获得。两个化合物质谱碎片的比较结果表明,多甲氧基黄酮的二级质谱碎片裂解机制更复杂,碎片信息更丰富。该方法可为黄酮类化合物成分的快速定性分析提供支持,也可为黄酮类化合物体内代谢产物的LC-MS/MS鉴定提供依据。

3，6-二羟基黄酮对多种肿瘤细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

目的观察3,6-二羟基黄酮对乳腺癌细胞株MCF-7(雌激素受体阳性ER+)、MDA-MB-231(雌激素受体阴性ER-)、直肠癌细胞株LoVo、DLD-1和前列腺癌细胞株PC3增殖和凋亡的影响。方法MTT法检测3,6-二羟基黄酮对不同肿瘤细胞生长存活的影响,计算半数抑制浓度(IC50);DAPI染色观察3,6-二羟基黄酮对肿瘤细胞生长状态及形态的影响,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡变化。结果增殖检测结果表明,3,6-二羟基黄酮对于MCF-7、MDA-MB-231、LoVo、DLD-1和PC3细胞增殖均表现出显著抑制作用,48hIC50值分别为16.1、15.7、29.8、12.8和17.8μmol/L;细胞形态观察和凋亡检测结果表明,10μmol/L的3,6-二羟基黄酮作用24h,5种肿瘤细胞的生长状态和形态均发生显著变化,大量细胞表现出凋亡或死亡细胞的形态特征,细胞凋亡率均显著升高。结论3,6-二羟基黄酮具有显著的抗肿瘤效应,对于多种肿瘤细胞具有很强的增殖抑制和凋亡诱导作用。

3-羟基黄酮在不同极性和酸碱度溶剂中的光谱研究

实验观测了3-羟基黄酮(3-HF)在不同极性溶剂中的吸收光谱和荧光光谱,发现在吸收光谱中有3个吸收带,峰值位于300和345nm的两个吸收带较强,位于415nm处的吸收带较弱。用345nm作为激发光,观测到两个荧光带,其中峰值位于400nm的荧光带为3-HF稀醇式构型的发射,随着溶剂极性的增大其强度增强,峰值位于526nm的荧光带为3-HF互变异构体的发射,随着溶剂极性的增大其强度减弱,这表明溶剂极性阻碍质子转移的发生。用415nm的光激发样品,在荧光光谱中发现了3个新荧光谱带,峰值分别位于440,471和515nm,这3个荧光谱带归属至今未见报道。为了指认这3个荧光谱带,分别观测了3-HF在不同酸碱度溶液的荧光光谱及其吸收光谱,通过对这些光谱的分析研究,指认出荧光峰位于440和471nm的荧光谱带为3-HF的两种阳离子的发射,峰值位于515nm的荧光谱带为3-HF的阴离子的发射。

7-羟基黄酮衍生物的合成

以具心血管活性的７－羟基黄酮为底物，分别与阿魏酸、烟酸、对氯苯氧异丁酸成酯，合成了三个新化合物，其结构经１Ｈ ＮＭＲ、ＭＳ和ＩＲ 确证。

五羟基黄酮的药理学研究近况

对近年来有关槲皮素的药理研究状况作了简要的综述，着重介绍了槲皮素在肿瘤、心血管疾病、糖尿病等方面药理研究的情况。

荧光光谱法研究磷酰化5,7-二羟基黄酮与ctDNA的相互作用

以溴化乙锭(EB)为荧光探针,研究了磷酰化5,7-二羟基黄酮与ctDNA的相互作用。实验结果表明,磷酰化5,7-二羟基黄酮与ctDNA间存在相互作用。随着温度的升高,磷酰化5,7-二羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数降低,磷酰化5,7-二羟基黄酮可与ctDNA形成复合物,此猝灭过程为静态猝灭。根据Stern-Volmer方程,算出25℃及37℃下磷酰化5,7-二羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数分别为Kq1=30 860 L/mol及Kq2=27 760 L/mol,并且算出它与ctDNA结合的平衡常数为KM=2.39×107L/mol。

相转移催化法合成7-羟基黄酮的研究

以2,4-二羟基苯乙酮与苯甲酰氯在相转移催化剂四丁基硫酸氢铵催化下,一锅法反应,得到7-羟基黄酮(Ⅲ),产品收率60%,对Ⅲ的反应机理进行了推测,对于Ⅲ质谱表征结果进行了分析。以间苯二酚(Ⅰ)与冰醋酸反应,制得原料2,4-二羟基苯乙酮(Ⅱ),产品收率达到70%。

羟基黄酮类化合物的合成及其抗肿瘤活性研究

设计合成了一系列羟基黄酮类化合物,并利用熔点、红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确定了其结构。以利阿唑为阳性对照药,对4个目标化合物7-羟基黄酮、6-羟基黄酮、2′-甲氧基-6-羟基黄酮和2′-氯-6-羟基黄酮的抗HL-60活性进行了研究,实验结果表明2′-甲氧基-6-羟基黄酮,2′-氯-6-羟基黄酮均有较好活性,其中以2′-甲氧基-6-羟基黄酮的活性最显著,其半数抑制剂量为7.68μmol/L,与利阿唑活性相当。

7-羟基黄酮的合成及活性

以间二苯酚为起始原料合成了8种7-羟基黄酮并进行了合成路线的探索,用1HNMR、ESI-MS对化合物进行结构表征,并采用Ellman法测试化合物对乙酰胆碱酯酶(ACh E)和丁酰胆碱酯酶(BCh E)的抑制活性。结果表明,所合成的化合物对ACh E均具有一定的抑制活性,其中,6-甲氧基萘环取代的化合物Ⅲh抑制活性最好,20μmol/L浓度下抑制率为34.71%,优于对照药物卡巴拉汀,为设计治疗阿尔茨海默症药物提供了重要模板。

7-羟基黄酮的合成及抗炎活性研究

本文探索了黄酮类化合物的合成方法,通过酰基化、Fries重排、羟醛缩合和环合反应,合成了7-羟基黄酮,获得了满意的收率(89%)。结果表明,该方法具有反应时间短、操作简便、收率好等优点。二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验表明,7-羟基黄酮具有明显的抗炎活性。

HPLC测定壮药剑叶龙血树中白藜芦醇和7,4’-二羟基黄酮的含量

目的建立一种同步测定剑叶龙血树中白藜芦醇和7,4’-二羟基黄酮含量的方法。方法以C18反相键合硅胶为填料,甲醇-乙腈-0.2%磷酸(30∶7∶63)为流动相,检测波长为306 nm,柱温35℃。结果白藜芦醇和7,4’-二羟基黄酮分别在0.185 0～1.850μg(r=0.999 9)和0.158 2～1.582 0μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为101.02%、99.09%,RSD分别为2.57%、2.24%。结论本方法简便、灵敏、准确度高,可用于建立剑叶龙血树质量控制标准。

5-羟基黄酮类衍生物的合成

以2',6'-二羟基苯乙酮为起始原料,经O-酰化、Baker-VenKataraman重排和环合反应合成了8个5-羟基黄酮衍生物(其中3个为新化合物),其结构经1H NMR和MS表征。

相转移催化法合成5-羟基黄酮的研究

以间苯二酚为原料,经过成环、酯化、重排、开环4步反应,制得2,6-二羟基苯乙酮(1),对1进行了1HNMR表征,并对1的合成机理进行了推测;1与苯甲酰氯在相转移催化剂四丁基硫酸氢铵催化下进行反应,得到5-羟基黄酮(2),对2进行了IR及1HNMR表征,并对其合成机理进行了推测。考察了相转移催化反应温度、催化剂加入量对于产品收率的影响,较佳条件为:反应温度60℃,n(1)∶n(四丁基硫酸氢铵)=1∶1.3,2的收率达到65%。