羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中苯甲酸钠含量的HPLC测定

建立高效液相色谱法(HPLC)测定羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中防腐剂苯甲酸钠的含量。采用Agilent ZORBAX C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.02 mol/L乙酸铵水溶液∶甲醇=85∶15,流速为1.0 mL/min,检测波长为224 nm,进样量为10μL,柱温为35℃。苯甲酸钠浓度在2.5μg/mL~25.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系(R^(2)=1),平均回收率为95.90%,RSD为0.69%(n=9),苯甲酸钠的检测限为0.25μg/mL。结果表明,所建立的HPLC法操作简便,灵敏度高,结果准确可靠,可用于羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中防腐剂苯甲酸钠含量的测定。

羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中焦亚硫酸钠含量测定

为建立羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抗氧化剂焦亚硫酸钠含量测定方法,利用二氧化硫在醋酸盐缓冲液存在的酸性条件下可使酸性品红溶液褪色的原理,采用比色法在547 nm波长处测定吸光度,以标准曲线计算抗氧化剂的含量。结果显示,无水亚硫酸钠质量浓度在20~120μg/mL,吸光度的倒数与其质量浓度呈良好的线性关系y=0.0097x+1.3857(R^(2)=0.9971),平均回收率为98.32%,RSD为0.9573%。结果表明,该方法可用于羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抗氧化剂焦亚硫酸钠含量的测定。

羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抑菌剂的添加剂量筛选及抑菌效力评价

为了筛选羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抑菌剂的最适添加浓度,并对其进行抑菌效力评价,本试验依据2020版《中华人民共和国兽药典(二部)》抑菌效力检查法,通过对含不同浓度抑菌剂的羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液的抑菌效果进行考察,筛选出最合适的抑菌剂添加浓度,并根据抑菌效力评价标准,评价混悬液是否满足抑菌要求,进而验证最佳抑菌剂添加剂量。结果显示,与不添加抑菌剂的羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液相比,在混悬液中添加0.020%的苯甲酸钠可以对5种微生物的生长产生良好的抑制作用,且为最低有效添加剂量,能达到“内服制剂、直肠给药制剂的抑菌效力判断标准”。结果表明,羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抑菌剂苯甲酸钠的最佳添加剂量为0.020%。

羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液微生物限度检查方法的研究

建立并验证羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液的微生物限度检查方法和控制菌检查方法。参考2015年版《中华人民共和国兽药典》四部通则进行微生物限度检查方法适用性试验,分别考察采用常规法、中和法以及联合稀释法对消除羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抑菌成分的抑菌效果,比较不同方法对试验菌株的回收率。结果发现中和法联合稀释法可以较好地消除羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中的抑菌活性,最终选择采用中和法联合稀释法对本品进行需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数检测,各试验菌株的回收率均在0.5%~2.0%之间,符合《中华人民共和国药典》规定;采用中和法联合增菌常规法进行控制菌检查,阳性对照组中菌落生长良好,阴性试验组中均无细菌生长,符合《中华人民共和国药典》规定。说明所建立的微生物限度检查方法(中和法联合稀释法)准确可行,适用于羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液微生物限度检查。

羟氯扎胺盐酸左旋咪唑复方混悬液对靶动物羊的安全性评价

为研究羟氯扎胺盐酸左旋咪唑复方混悬液对靶动物羊的安全性,选取32只(雌雄各半)体重在20 kg左右的健康小尾寒羊,随机分成4组,每组8只。分别为1倍(0.25 mL/kg)剂量组、3倍(0.75 mL/kg)剂量组、5倍(1.25 mL/kg)剂量组和对照组,给药组逐只按量经口灌服给药,每天用药1次,连用3 d;对照组灌服等体积生理盐水。给药后连续观测14 d,每天观察试验羊的精神状况、饮食欲及二便,检测体温等。试验期间除进行一般临床健康检查状况观察以外,试验前、给药后及观测期结束还进行增重、血常规和血清生化指标检测,对对照组和5倍剂量组进行大体病理学和组织病理学检查。结果显示,试验组羊在给药期间出现不同程度的腹泻和食欲不振,给药结束后症状逐渐缓解;试验组与对照组相比,血液学检查和血清生化指标结果未见明显差异;大体剖检未有显著的病理变化;与空白剂量组相比,5倍剂量组羊的组织病理学检查也未见明显异变,未出现中毒及死亡现象。上述结果表明,羟氯扎胺盐酸左旋咪唑复方混悬液在以5倍剂量给药时对靶动物仍安全,通过靶动物安全性试验,为羟氯扎胺盐酸左旋咪唑复方混悬液的安全性评价及临床科学用药提供了依据。