Fe^(2+)螯合剂对羟脯氨酸发酵的影响

为解决反式-4-羟基脯氨酸发酵过程中Fe^(2+)供应不足、产酸效率低等问题。该研究以大肠杆菌HYP-08为供试菌株,首先通过单因素实验探究Fe^(2+)螯合剂种类及添加量对羟脯氨酸发酵生产的影响,并通过5 L发酵放大验证,以羟脯氨酸产量、生物量,糖酸转化率为指标,进一步探究其在放大过程中的影响,结果表明葡萄糖酸亚铁对羟脯氨酸发酵效果最好,流加发酵生产中,最终确定了10 h开始持连续流加的补料方式,反式-4-羟基脯氨酸生物量及产量达到最高,分别为146.2、118.6 g/L,较优化前提高了12.1%和4.2%,副产物乙酸减少到1.05 g/L,葡萄糖酸亚铁的添加有效增强了菌体活力,提高了羟脯氨酸的产量和糖酸转化率,为微生物发酵生产羟脯氨酸提供了依据。

EMS诱变菜豆子叶节定向筛选耐羟脯氨酸(HYP)突变体

以双丰一号菜豆子叶节为外植体,利用化学诱变剂EMS处理引发基因突变,进行突变体定向筛选抗逆突变细胞系。以0.17%EMS诱变处理2 h,子叶节的不再生率接近50%;以羟脯氨酸最大致死量3.5 mmol/L为筛选压力,定向筛选抗逆突变体。结果显示,在羟脯氨酸筛选培养基上,经EMS诱变的子叶节存活31个,突变率为8.61%,存活的子叶节再生率为74.19%,成功获得耐羟脯氨酸的突变株系。

血清羟脯氨酸的水平与冠心病及心肌梗死后心力衰竭相关性

观察冠心病及心肌梗死后心力衰竭患者血清Hyp水平的变化,并探讨血清Hyp在上述疾病中的临床价值。方法 医院收治的513例CAD患者和100例心梗后HF患者作为研究对象,同时选取同期224名健康体检者为对照组。收集所有研究对象的血清样本和一般资料,对比各组研究对象血清Hyp水平的差异,分析各组研究对象血清Hyp水平与疾病相关指标的相关性。结果 各组患者各项指标存在统计学差异。结论 血清Hyp水平与CAD及心肌梗死后HF存在相关关系。检测血清Hyp水平,可用来区分AMI和其他类型的CAD,评价患者心肌梗死的严重程度,对于临床治疗具有重要的指导意义。检测Hyp水平可以辅助评估HF患者的心功能,但对HF没有诊断价值。

心肌梗死及心力衰竭病人血清羟脯氨酸水平的变化

目的探讨心绞痛、心肌梗死及心力衰竭(HF)病人血清羟脯氨酸(Hyp)水平的变化及意义。方法选取2021年3月—2022年9月青岛大学附属医院收治的295例稳定型心绞痛(SAP)病人为SAP组,200例急性心肌梗死(AMI)病人为AMI组,100例心肌梗死后HF病人为HF组,另选取同期435例健康体检者为对照组,比较各组血清Hyp水平的差异。采用Pearson相关分析法分析AMI组病人血清Hyp水平与血清高敏心肌肌钙蛋白I(Hs-cTnI)、C反应蛋白(CRP)水平的相关性,以及HF组病人血清Hyp水平与血清B型尿钠肽(BNP)水平的相关性。结果4组血清Hyp水平比较,差异有统计学意义(F=22.749,P<0.05)。SAP组病人血清Hyp水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05);AMI组病人血清Hyp水平显著低于对照组(t=-7.025,P<0.05);HF组病人血清Hyp水平高于AMI组和对照组,差异有统计学意义(t=6.903、2.557,P<0.05)。AMI组病人血清Hyp水平与血清Hs-cTnI和CRP水平均呈负相关(r=-0.417、-0.182,P<0.05),HF组病人血清Hyp水平与血清BNP水平呈正相关(r=0.380,P<0.05)。结论血清Hyp水平与心肌梗死及HF密切相关。

国标法与试剂盒法检测脆肉鲩中羟脯氨酸含量的比较

比较国家标准GB/T 9695.23-2008《肉与肉制品羟脯氨酸含量测定》和试剂盒法定量检测脆肉鲩中羟脯氨酸含量的差异。采用试剂盒法和国标法测定脆肉鲩中羟脯氨酸含量,通过相对标准偏差(RSD)来比对两种方法的精密度,通过加标回收实验比对方法准确度。由精密度与准确度实验结果可知,国标法与试剂盒法的相对标准偏差分别为2.34%和7.75%,加标回收率分别为92%~109%和64%~81%。试验结果表明,相对于试剂盒法,国标法精密度和准确度更高,更适合用于检测脆肉鲩的羟脯氨酸含量。

高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中的L-羟脯氨酸

建立饲料和宠物食品L-羟脯氨酸含量的高效液相色谱检测方法。采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(含1%N,N-二甲基甲酰胺)和乙腈溶液(体积比为80:20),流速为1.0 mL/min,检测波长为360 nm。结果显示,L-羟脯氨酸在1.0~100.0μg/mL范围内线性关系良好,线性方程y=2994.4x+1051.9,R^(2)=0.9998;最低检出限为2.0 mg/kg,回收率95.00%~100.00%。该方法简单快速、重现性好、精确度高,可作为饲料和宠物食品中L-羟脯氨酸的质量控制手段。

一次性运动负荷练习对人体尿中羟脯氨酸排泄规律的影响

测定男性运动员安静状态和一次性负荷练习后24 h内尿羟脯氨酸（Hyp）的排泄情况,分析结果表明,安静状态下人体尿Hyp的排出量24 h内比较均匀,其同尿Hyp/Cr比值与24 h总尿Hyp的排量相关性较高的时间段是20：00～23：00时段,一次高负荷练习后没有改变各时段的尿Hyp排出量和24 h尿Hyp排出总量.

(2S,4S)-4-羟脯氨酸的合成工艺研究

以(2S,4R)-4-羟脯氨酸为基础原料,以水为介质,利用三苯基膦和醇的Mitsunobu合成反应,改变其构型得到(2S,4S)-4-羟脯氨酸。此方法在现有合成路线基础上有所改进,在实验过程中探索反应物配比对各步反应收率的影响,得到实验的最优条件。并对产物进行表征及纯度分析,确定为(2S,4S)-4-羟脯氨酸,纯度为87.2%,收率93.3%。

毛细管电泳-电致化学发光法测定人尿中脯氨酸和羟脯氨酸

采用毛细管电泳联吡啶钌电致化学发光法检测了人尿中的脯氨酸和羟脯氨酸。讨论了联吡啶钌浓度、检测电位、磷酸盐缓冲液浓度和pH值、进样电压和进样时间等实验条件对脯氨酸和羟脯氨酸分离检测的影响。在优化实验条件下,脯氨酸和羟脯氨酸分别在0.008～2和0.01～2mmol/L范围内呈良好线性(相关系数0.997);检出限浓度分别为2和4μmol/L。测定了人尿中游离脯氨酸和羟脯氨酸以及两者总浓度,回收率96.4%～99.7%。

分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸含量

采用分光光度法测定鱼皮(鱿鱼皮和狗鲑鱼皮)中的羟脯氨酸(Hyp)含量。结果表明:两种鱼皮中羟脯氨酸的含量分别为0.823%和2.247%,平均回收率分别为98.47%和98.39%,变异系数分别为1.65%和0.64%。该法重复性好,可信度高,可作为判定鱼皮中胶原蛋白含量的一个定量指标。

丹参联合川芎嗪对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β_1表达及羟脯氨酸含量的影响

目的观察丹参联合川芎嗪注射液腹腔注射对博来霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达及羟脯氨酸含量的影响。方法将90只成年雄性SD大鼠,随机分为6组:生理盐水(NS)组、BLM组、地塞米松(DM)组,中药干预组(A组、B组、C组)。NS组气管内灌注NS,BLM组、DM组及中药干预组(A组、B组、C组)气管内灌注BLM,随后NS组和BLM组每日腹腔注射NS,DM组每日腹腔注射DM,中药干预组(A组、B组、C组)每日给予不同剂量丹参和川芎嗪复合制剂腹腔注射,分别于气管内灌注药物后第7天,第14天和第28天处死每组大鼠各5只,左肺多聚甲醛固定后行HE染色、Masson染色进行肺泡炎及肺纤维化程度的判定;免疫组化法测定肺组织中TGF-β1的表达;右肺行肺组织羟脯氨酸含量的测定;血清用于检测肝肾功能。结果①NS组大鼠各时间点肺组织未发现肺泡间隔水肿、炎性细胞浸润及纤维化的形成。BLM组大鼠第7天时肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润,第14天时炎症细胞减少,肺泡间隔内成纤维细胞显著增多,肺泡结构破坏,第28天时肺纤维化程度进一步加重,形成广泛纤维化。与BLM组比较,DM组大鼠各时间点肺泡炎及纤维化程度减轻(P<0.05)。A组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度与BLM组类似(P>0.05)。B组、C组第14天肺泡炎及肺纤维化程度明显低于BLM组(P<0.05)。B组、C组第28天肺纤维化程度明显低于BLM组(P<0.05)。②与NS组比较,BLM组、DM组及中药干预组(A组、B组、C组)肺组织中TGF-β1的表达水平和羟脯氨酸含量明显升高(P<0.05)。③与BLM组比较,DM组及中药干预组(B组、C组)肺组织中TGF-β1的表达水平及羟脯氨酸含量明显降低(P<0.05)。④大鼠血清肝肾功能检测结果显示各组两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹参联合川芎嗪腹腔注射能减轻BLM所致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,其机制可能与抑制肺组织TGF-β1的表达,减少羟脯氨酸含量有关。

毛细管电泳-激光诱导荧光检测肌腱和肌腱细胞中的羟脯氨酸

建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)分析羟脯氨酸的方法。肌腱和肌腱细胞中的胶原蛋白碱水解生成氨基酸,经异硫氰酸荧光素(FITC)衍生,采用LIF-CE分离测定胶原蛋白特异性氨基酸-羟脯氨酸。羟脯氨酸在0.5μg/L^8×103μg/L浓度范围内线性关系良好;检出限为0.5μg/L。相对迁移率和相对峰高的相对标准偏差(RSD)分别为5.0%和6.1%。测定了60份肌腱和9份细胞样品,加标回收率为95%~110%。将所建立的毛细管电泳方法与高效液相色谱法(HPLC)进行比较,两者测定结果相对误差为-1.9%~2.0%。本法仅需一次荧光标记,操作简单、快速灵敏,12min内完成一个分析周期,适于测定肌腱和细胞样品。

亲水性相互作用色谱-四极杆串联线性离子阱质谱测定蛋白食品中L-羟脯氨酸残留

建立了亲水性相互作用色谱-四极杆串联线性离子阱质谱检测含蛋白食品中的皮革水解蛋白标示物L-羟脯氨酸(L-HYP)的同时定性与定量分析方法。样品中的L-HYP经酶解后用乙腈沉淀蛋白,HLB小柱除去部分脂溶性干扰物,采用液相色谱-质谱进行测定。本方法采用IDA结合EPI模式对试样中的L-HYP进行定性分析,并建立L-HYP的二级子离子谱库。通过以MRM模式对L-HYP进行定量分析,L-HYP在12种蛋白食品中平均回收率在73.4%～114.2%(n=6)之间,相对标准偏差在2.5%～14.4%(n=6)之间,可对试样中的L-HYP在定性确证的同时进行定量分析。

白屈菜红碱对肝纤维化大鼠肝脏病理学和肝脏羟脯氨酸含量的影响

目的观察白屈菜红碱对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏病理学和肝脏羟脯氨酸(Hpy)含量的变化。方法采用四氯化碳联合营养控制和饮用10%酒精复合法制备SD大鼠肝纤维化模型,在实验第4周末,肝纤维化模型建立(2期)成功,然后应用不同剂量的白屈菜红碱和INF-γ处理。在给药8周后,处死所有大鼠,并取肝脏组织,采用HE、VG及Massion染色观察肝脏组织病理学形态的变化,同时采用改进的氯胺-T测定法检测肝脏Hyp含量。结果各剂量白屈菜红碱组肝纤维化半定量计分和肝脏的Hpy含量明显低于病理模型组(P<0.01);大中剂量白屈菜红碱组与小剂量组比,大鼠肝脏组织纤维化半定量计分及肝组织Hyp含量有明显下降,差异显著(P<0.01)。结论白屈菜红碱可以改善肝纤维化大鼠肝组织纤维化程度,降低肝组织Hyp含量,具有抗化学性肝纤维化作用。

还原型谷胱甘肽对单侧输尿管梗阻大鼠羟脯氨酸及氧化应激反应的影响

目的采用单侧输尿管梗阻（UUO）致肾间质纤维化大鼠模型，探讨还原型谷胱甘肽（GSH）抗肾间质纤维化的部分作用机制。方法健康Wistar大鼠36只，随机分为假手术（Sham）组、模型组（UUO组）和GSH组，每组12只。UUO组和GSH组大鼠麻醉后开腹分离左侧输尿管，并于靠近。肾盂段行左输尿管结扎；Sham组开腹但不行输尿管结扎。GSH组于术前1d腹腔注射GSH100mg·kg^-1·d^-1，连续给药10d；Sham组和UUO组给予等量生理盐水。术后10d处死各组大鼠，取左侧肾脏，行苏木素-伊红（HE）和Masson染色，观察大鼠。肾脏组织病理学的改变；用化学比色法测定梗阻侧肾组织羟脯氨酸（Hyp）含量和总抗氧化能力（T-AOC），用黄嘌呤氧化酶法测定总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性；用硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量。结果大鼠行UUO 10d后，梗阻侧肾脏肿大、肾实质变薄，肾间质水肿，弥漫性炎细胞浸润，肾小管扩张或萎缩，部分肾小管腔内有蛋白或细胞管型，间质趋向纤维化。与Sham组比较[Hyp（0．524±0．132）μg／mg，T-AOC（1．48±0．21）U／mg，T-SOD（12．77±0．76）U／mg，MDA（2．65±0．32）nmol／mg]，UUO组与GSH组梗阻侧肾脏病理改变明显，且。肾组织中Hyp、MDA含量增加，T-AOC降低，T-S0D活性下降（P均〈0．01）。与UUO组比较，GSH组梗阻侧肾脏组织病理学改变减轻，且肾组织中Hyp含量减少[（1．598±0．252）μg／mg比（1．027±0．196）μg／mg，P〈0．053，T-AOC升高[（0．67±0．19）U／mg比（0．94±0．17）U／mg，P〈0．05]，MDA含量降低[（4．58±0．59）nmol／mg比（3．26±0．34）nmol／mg，P〈0．05]，T-SOD活性无明显变化[（9．39±0．87）U／mg比（9．41±0．93）U／mg，P〉0．05]。结论GSH可缓解UUO大鼠肾间质纤维化病理改变，降低梗阻侧。肾脏Hyp含量与其抗氧化应激作用，减轻UUO诱导的氧化损伤。

一种新型优化的肺组织羟脯氨酸水平测定方法的建立

目的建立大鼠肺组织羟脯氨酸（HYP）水平测定方法，以评价大鼠肺组织纤维化程度。方法比较不同酸水解时间、氧化时间、显色时间等对大鼠肺组织HYP水平测定结果的影响，据此建立大鼠肺组织HYP水平测定方法，并初步应用于博莱霉素诱导大鼠肺纤维化HYP水平的测定。结果通过优化得出HYP水平测定最佳条件为110℃7．50mol盐酸（HCL）水解16h，常温氧化10min，60℃显色25min。本方法灵敏度为0．067／μg／mL，回收率为88．85％～110．88％，平均CV为4．70％～6．60％。该法应用于博莱霉素诱导大鼠肺纤维化研究中，模型组HYP水平明显高于对照组。结论该法灵敏度与回收率均较高、重现性较好，可用作临床对肺纤维化程度判定的定量方法。

生肌玉红膏对大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合过程中羟脯氨酸水平和胶原比例的影响

目的动态观察生肌玉红膏(当归、白芷、紫草、血竭、甘草、轻粉、白蜡、麻油等)对深Ⅱ度烧伤大鼠创面组织中羟脯氨酸水平及Ⅰ型和Ⅲ型胶原比例的影响。方法将深Ⅱ度烧伤大鼠按体质量分层随机分为模型组、生肌玉红膏组和湿润烧伤膏组,每组24只。烧伤创面分别给予相应药物外敷,直至创面愈合。观察各组创面愈合时间,烧伤后每隔7 d测定各组动物背部创面羟脯氨酸水平及Ⅰ型和Ⅲ型胶原比值的变化。结果与模型组相比,生肌玉红膏组创面愈合时间缩短(P<0.05);创面羟脯氨酸水平高于模型组(P<0.05);在创面修复的第14、21天,生肌玉红膏组Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值低于模型组(P<0.05)。结论生肌玉红膏可能通过促进烧伤创面组织中新生胶原合成及调节Ⅰ型和Ⅲ型胶原二者的比值平衡,起到促进烧伤创面愈合的作用。

油菜抗羟脯氨酸突变体的筛选

本文用脯氨酸的类似物羟脯氨酸筛选出经甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）诱变处理的油菜幼胚培养苗的抗羟脯氨酸突变体．抗性系叶片中的绝大多数游离氨基酸的含量都比对照品种“Ｏｒｏ”高，其中游离脯氨酸的含量是“Ｏｒｏ”的２２倍，表明用羟脯氨酸筛选出的突变体植株细胞内的游离氨基酸，特别是游离脯氨酸的含量明显增加．抗性系后代的多种农艺性状试验结果表明，抗性系的产量比对照高３１１％，发病率低３８５％，病情指数下降００９％。

碱解法测定组织羟脯氨酸的实验研究

目的 在羟脯氨酸的测定方法中,传统的酸解法存在消化时间长,6 mol/L HC1易挥发,步骤繁琐等缺点,故本文目的在于探讨操作简单的碱解法测定羟脯氨酸的可行性及影响因素。方法 将待测组织匀浆或组织碎块按1:4的比例加入2.5 mol/L氢氧化钠,12℃、0.1 kPa消化20 min,然后氯氨T氧化10 min(37℃水浴),与对二甲氨基苯甲醛反应10 min(水浴80℃)生成红色化合物,550nm 处比色。分别观察了氢氧化钠浓度、水解时间、pH值、组织干重及湿重对本实验的影响,并与酸解法作了对比。结果碱解法的适宜条件如下:组织块必须称干重、2 mol/L NaOH(终浓度)、水解时间20 min、pH值6.0-6.5。结论碱解法缩短了测定时间(全部测定用2 h),简化了操作,而且灵敏度高、重复性和一致性较好,回收率较高,可用于临床和生物医学领域。