Fe^(2+)螯合剂对羟脯氨酸发酵的影响

为解决反式-4-羟基脯氨酸发酵过程中Fe^(2+)供应不足、产酸效率低等问题。该研究以大肠杆菌HYP-08为供试菌株,首先通过单因素实验探究Fe^(2+)螯合剂种类及添加量对羟脯氨酸发酵生产的影响,并通过5 L发酵放大验证,以羟脯氨酸产量、生物量,糖酸转化率为指标,进一步探究其在放大过程中的影响,结果表明葡萄糖酸亚铁对羟脯氨酸发酵效果最好,流加发酵生产中,最终确定了10 h开始持连续流加的补料方式,反式-4-羟基脯氨酸生物量及产量达到最高,分别为146.2、118.6 g/L,较优化前提高了12.1%和4.2%,副产物乙酸减少到1.05 g/L,葡萄糖酸亚铁的添加有效增强了菌体活力,提高了羟脯氨酸的产量和糖酸转化率,为微生物发酵生产羟脯氨酸提供了依据。

EMS诱变菜豆子叶节定向筛选耐羟脯氨酸(HYP)突变体

以双丰一号菜豆子叶节为外植体,利用化学诱变剂EMS处理引发基因突变,进行突变体定向筛选抗逆突变细胞系。以0.17%EMS诱变处理2 h,子叶节的不再生率接近50%;以羟脯氨酸最大致死量3.5 mmol/L为筛选压力,定向筛选抗逆突变体。结果显示,在羟脯氨酸筛选培养基上,经EMS诱变的子叶节存活31个,突变率为8.61%,存活的子叶节再生率为74.19%,成功获得耐羟脯氨酸的突变株系。

血清羟脯氨酸的水平与冠心病及心肌梗死后心力衰竭相关性

观察冠心病及心肌梗死后心力衰竭患者血清Hyp水平的变化,并探讨血清Hyp在上述疾病中的临床价值。方法 医院收治的513例CAD患者和100例心梗后HF患者作为研究对象,同时选取同期224名健康体检者为对照组。收集所有研究对象的血清样本和一般资料,对比各组研究对象血清Hyp水平的差异,分析各组研究对象血清Hyp水平与疾病相关指标的相关性。结果 各组患者各项指标存在统计学差异。结论 血清Hyp水平与CAD及心肌梗死后HF存在相关关系。检测血清Hyp水平,可用来区分AMI和其他类型的CAD,评价患者心肌梗死的严重程度,对于临床治疗具有重要的指导意义。检测Hyp水平可以辅助评估HF患者的心功能,但对HF没有诊断价值。

分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸含量

采用分光光度法测定鱼皮(鱿鱼皮和狗鲑鱼皮)中的羟脯氨酸(Hyp)含量。结果表明:两种鱼皮中羟脯氨酸的含量分别为0.823%和2.247%,平均回收率分别为98.47%和98.39%,变异系数分别为1.65%和0.64%。该法重复性好,可信度高,可作为判定鱼皮中胶原蛋白含量的一个定量指标。

一种新型优化的肺组织羟脯氨酸水平测定方法的建立

目的建立大鼠肺组织羟脯氨酸（HYP）水平测定方法，以评价大鼠肺组织纤维化程度。方法比较不同酸水解时间、氧化时间、显色时间等对大鼠肺组织HYP水平测定结果的影响，据此建立大鼠肺组织HYP水平测定方法，并初步应用于博莱霉素诱导大鼠肺纤维化HYP水平的测定。结果通过优化得出HYP水平测定最佳条件为110℃7．50mol盐酸（HCL）水解16h，常温氧化10min，60℃显色25min。本方法灵敏度为0．067／μg／mL，回收率为88．85％～110．88％，平均CV为4．70％～6．60％。该法应用于博莱霉素诱导大鼠肺纤维化研究中，模型组HYP水平明显高于对照组。结论该法灵敏度与回收率均较高、重现性较好，可用作临床对肺纤维化程度判定的定量方法。

抗羟脯氨酸水稻变异系的筛选及其特性的研究

利用Hyp反复筛选经EMS处理的水稻愈伤组织,得到4个抗性细胞系。它们的游离脯氨酸含量高于对照2—25倍。Hyp(2 mmol/L)和NaCl(1%)胁迫对M_1、M_2变异系γ-谷氨酰磷酸合成活力及游离脯氨酸积累的影响呈一定的正相关性。变异系在0.8%,15NaCl 培养基中分化出植株。与对照相比,各变异系在愈伤组织、植株水平上均表现较强的耐盐性,且与游离脯氨酸的积累量呈正相关。

毛细管电泳-激光诱导荧光检测肌腱和肌腱细胞中的羟脯氨酸

建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)分析羟脯氨酸的方法。肌腱和肌腱细胞中的胶原蛋白碱水解生成氨基酸,经异硫氰酸荧光素(FITC)衍生,采用LIF-CE分离测定胶原蛋白特异性氨基酸-羟脯氨酸。羟脯氨酸在0.5μg/L^8×103μg/L浓度范围内线性关系良好;检出限为0.5μg/L。相对迁移率和相对峰高的相对标准偏差(RSD)分别为5.0%和6.1%。测定了60份肌腱和9份细胞样品,加标回收率为95%~110%。将所建立的毛细管电泳方法与高效液相色谱法(HPLC)进行比较,两者测定结果相对误差为-1.9%~2.0%。本法仅需一次荧光标记,操作简单、快速灵敏,12min内完成一个分析周期,适于测定肌腱和细胞样品。

不同配比与剂量黄芪当归对药对肺纤维化小鼠肺形态学及羟脯氨酸含量影响

目的：观察黄芪、当归不同剂量与配伍比例对实验性肺纤维化小鼠肺病理形态学及肺组织羟脯氨酸（HYP）含量的影响。方法：SPF级ICR雄性小鼠80只,体重18~22 g,随机分为正常对照组、模型组,以及6个不同配比与剂量的黄芪当归组成的中药治疗组（1.大剂量黄芪当归5∶1组、2.大剂量黄芪当归1∶1组、3.大剂量黄芪当归1∶5组、4.小剂量黄芪当归5∶1组、5.小剂量黄芪当归1∶1组、6.小剂量黄芪当归1∶5组）,每组10只,除正常对照组外,其余各组采用气管内注射博莱霉素（5 mg/kg）复制小鼠肺纤维化模型。造模第2天起,正常对照组和模型组用生理盐水灌胃,6个中药治疗组给予不同配比与剂量的黄芪当归水煎液灌胃治疗,于28 d处死小鼠,观察肺组织病理变化及羟脯氨酸的含量。结果：HE染色显示模型组小鼠支气管周围及肺泡间隔有大量炎症细胞浸润,肺泡壁增厚,肺泡结构破坏甚至消失,肺泡间隔纤维化显著。武兆发简化Mallory氏胶原染色显示模型组小支气管壁周围有大量蓝色胶原纤维沉积。6个中药治疗组较模型组均有所改善,其中中药治疗第1、6组改善明显,肺泡结构已基本恢复。与模型组比较,中药第1、6组小鼠肺组织Hyp含明显降低,统计学差异显著（P〈0.01）。结论：大剂量黄芪当归5∶1组在降低肺组织Hyp含量及改善肺泡结构方面效果显著。

猪皮中羟脯氨酸含量的测定

猪皮中含有丰富的胶原蛋白,胶原蛋白以其独特的结构与生物学性质,被广泛应用于食品、化妆品与医药等工业领域。胶原蛋白中含有高比例的羟脯氨酸,由测定的羟脯氨酸乘以相应系数即可得出胶原蛋白含量。本文采用比色法测定猪皮中羟脯氨酸(Hyp),结果表明,采用比色法测定具有较好的稳定性和较高的回收率。羟脯氨酸的平均回收率达85.97%,其在猪皮中含量的平均值为23.18mg/g(羟脯氨酸/猪皮)。

肝纤维化不同证型与肝功能和肝组织羟脯氨酸关系的实验研究

目的:观察不同证型的肝纤维化与肝功能和肝组织羟脯氨酸的关系。方法:分别设立正常对照组、单纯肝纤维化组、肝纤维化肝郁脾虚证组和气虚血瘀证组,采用CC l4注射法复制单纯肝硬化模型,肝郁脾虚证组附加夹尾和大黄灌胃法、气虚血瘀证组附加游泳疲劳法复制不同证型的肝纤维化模型,分别予相应药物干预。然后其测血清肝功能和肝组织羟脯氨酸的水平。结果:各模型组与正常组肝功能指标比较均有显著性差异,不同证型间肝功能有一定差异,但并无很好的一致性;各模型组羟脯氨酸含量较正常对照组均明显升高(P<0.01),气虚血瘀组较单纯肝纤维化组明显升高(P<0.05),肝郁脾虚组与单纯肝纤维化组及气虚血瘀组比较,差异无显著性意义(P>0.05);各组药物治疗后上述指标均有不同程度缓解。结论:肝功能仅反映肝脏损伤程度及代偿功能,与肝纤维化程度相关性不大;羟脯氨酸和肝纤维化程度密切相关,可作为中医辨证分型、判断病情和指导治疗的客观指标之一。

白屈菜红碱对肝纤维化大鼠肝脏病理学和肝脏羟脯氨酸含量的影响

目的观察白屈菜红碱对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏病理学和肝脏羟脯氨酸(Hpy)含量的变化。方法采用四氯化碳联合营养控制和饮用10%酒精复合法制备SD大鼠肝纤维化模型,在实验第4周末,肝纤维化模型建立(2期)成功,然后应用不同剂量的白屈菜红碱和INF-γ处理。在给药8周后,处死所有大鼠,并取肝脏组织,采用HE、VG及Massion染色观察肝脏组织病理学形态的变化,同时采用改进的氯胺-T测定法检测肝脏Hyp含量。结果各剂量白屈菜红碱组肝纤维化半定量计分和肝脏的Hpy含量明显低于病理模型组(P<0.01);大中剂量白屈菜红碱组与小剂量组比,大鼠肝脏组织纤维化半定量计分及肝组织Hyp含量有明显下降,差异显著(P<0.01)。结论白屈菜红碱可以改善肝纤维化大鼠肝组织纤维化程度,降低肝组织Hyp含量,具有抗化学性肝纤维化作用。

组织羟脯氨酸测定方法的改进

组织羟脯氨酸的测定,对于机体胶原代谢的研究具有重要意义。而以往的测定方法,仅组织脱水脱脂过程,就需要3～5天。我们参照有关文献,对该方法进行了改进,

油菜抗羟脯氨酸突变体的筛选

本文用脯氨酸的类似物羟脯氨酸筛选出经甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）诱变处理的油菜幼胚培养苗的抗羟脯氨酸突变体．抗性系叶片中的绝大多数游离氨基酸的含量都比对照品种“Ｏｒｏ”高，其中游离脯氨酸的含量是“Ｏｒｏ”的２２倍，表明用羟脯氨酸筛选出的突变体植株细胞内的游离氨基酸，特别是游离脯氨酸的含量明显增加．抗性系后代的多种农艺性状试验结果表明，抗性系的产量比对照高３１１％，发病率低３８５％，病情指数下降００９％。

高效液相色谱法测定人血清游离羟脯氨酸的含量

目的：建立血清游离羟脯氨酸的高效液相色谱外标测定法。无需对衍生产物进行处理即可使羟脯氨酸与血清中18种氨基酸达到良好的分离。方法：使用邻苯二甲醛（OPA）和芴甲基氯甲酸酯（FMOC）双衍生剂法，对血清进行处理后采用ODS C18柱，以醋酸钠缓冲液和乙腈的为流动相进行梯度洗脱，紫外检测器于265nm进行测定。结果：日内、日间RSD分别为1．95％和2．02％，回收率为（100．5±4．0）％，标准曲线在0．26～64mg·L^-1范围线性关系良好（R^2=0．9998）。使用该方法对10名健康志愿者进行了血清中游离羟脯氨酸的测定，测得男性平均值为（1．4±0．5）mg·L^-1、女性平均值为（1．10±0．32）mg·L^-1。结论：该法无需除去血清中一级胺衍生产物，直接测定羟脯氨酸，处理简单且特异性好，方法简单经济，适合临床检测需要。

博莱霉素诱导大鼠肺纤维化过程中羟脯氨酸及氧化应激指标的变化

目的 :观察博莱霉素诱导的肺纤维化模型中组织羟脯氨酸 (Hyp)及各氧化应激指标的变化 ,探讨氧化 抗氧化失衡在该病发生发展中的作用 .方法 :二级SD大鼠 4 0只 ,随机分为模型组与对照组 ,每组 2 0只 .气管内注入博莱霉素A5(BLMA5)溶液 ,建立肺纤维化模型 .分别于 3,7,14和 2 8d每组随机抽出 5只 ,处死后取肺脏行HE ,Masson染色鉴定模型并测定Hyp含量 .同时分别以八木国夫荧光法测定肺组织脂质过氧化产物 (MDA) ;改良盐酸羟胺法测定组织总超氧化物歧化酶 (SOD)的酶活力 ;改良荧光法测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量 ;荧光法测定氧化型谷胱甘肽 (GSSG)含量 .并计算GSH/GSSG值 .结果 :成功建立博莱霉素诱导的肺纤维化模型 .各指标在不同时间点出现变化 .模型组Hyp含量于 7d时高于对照组 ,2 8d达到最高 (P <0 .0 5 ) .模型组MDA含量随时间延长而增加 ,其中 14d时显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,但在 2 8d时有下降 .SOD活力在 7d ,14d均降低 ,2 8d时上升 .模型组GSH/GSSG在 3d ,7d显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,14d ,2 8d又回升 .结论 :Hyp可作为博莱霉素诱导的肺纤维化的一个指标 .博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化伴有氧化损伤 ,且在不同阶段细胞内、外的氧化 抗氧化出现失衡 .

比色法测定酱油中羟脯氨酸含量的探讨

文章采用比色法对酱油中羟脯氨酸含量测定进行了研究。结果表明，该方法能够有效地测定酱油中羟脯氨酸含量，加标回收率为81．4％～91．2％（n=3），相对标准偏差为2．3％～3．6％（n=3）。

羟脯氨酸含量的测定方法与应用

对Hyp(羟脯氨酸,hydroxyproline)的不同测定方法和应用进行了详细介绍。Hyp是胶原蛋白中特有的氨基酸,通过对Hyp的测定,可以得到胶原蛋白的含量,该方法在医学、食品、制革等方面都有广泛的应用。

厚朴酚对肺纤维化大鼠肺病理学和羟脯氨酸含量的影响

目的观察厚朴酚(MAG)对肺纤维化大鼠肺病理学和羟脯氨酸(HYP)含量的影响。方法雄性SD大鼠58只,随机分为假手术组(n=18)、模型组(n=20)、MAG治疗组(n=20)。模型组和MAG治疗组采用气管内注入博莱霉素(5 mg/kg)制作大鼠肺纤维化模型,各组于造模后次日开始给药,MAG治疗组腹腔注射MAG 50 mg/kg,假手术组和模型组腹腔注射等体积的生理盐水,每日1次,共28 d。给药后第7、14、28天,各实验组分别取至少6只大鼠处死取肺组织,计算肺系数、测定肺组织HYP含量、HE染色进行肺组织病理学观察及评价肺泡炎程度。结果与模型组相比,各时间点MAG治疗组大鼠肺系数、HYP含量、肺泡炎程度均显著降低(P<0.05或P<0.01);肺组织病理学观察,各时间点病变均明显减轻。结论 MAG可减轻肺纤维化大鼠的肺组织纤维化程度,降低肺组织含量,具有抗肺纤维化作用。

羟脯氨酸的研究与开发

从羟脯氨酸平衡失调与疾病、检测方法与应用、生产工艺、展望等4个方面介绍了羟脯氨酸的研究与开发。