羟自由基、低密度脂蛋白和胆固醇对血管内皮细胞钙响应能力的影响

目的 :探讨分别经羟自由基、低密度脂蛋白和胆固醇处理后 ,血管内皮细胞对外钙浓度增加的响应能力的改变 ,为研究动脉粥样硬化的发生发展机制提供新线索。方法 :用人脐静脉内皮细胞作为模型细胞 ,分别用羟自由基、低密度脂蛋白、胆固醇和氧化胆固醇进行单独或组合处理 ,利用Fluo 3荧光标记细胞内游离Ca2 + ,以激光共聚焦手段考察了当细胞外液 [Ca2 + ]增加时胞内 [Ca2 + ]的变化。结果 :正常血管内皮细胞对胞外 [Ca2 + ]增加响应灵敏 ,胞内 [Ca2 + ]升高到一定程度后 ,迅速下降至初始水平 ;细胞经羟自由基处理后 ,对Ca2 + 的响应明显迟钝 ,胞内[Ca2 + ]达到峰值的时间延长了 35 0s ,细胞形态也有损伤迹象 ;细胞经低密度脂蛋白处理后 ,胞内 [Ca2 + ]达到峰值的时间延长了 2 5 0s,且对 [Ca2 + ]的调节作用明显失常 ,使细胞处于高钙水平 ;而细胞经羟自由基和低密度脂蛋白依次处理后 ,细胞内 [Ca2 + ]达到峰值的时间延长了 5 0 0s,损伤程度更大 ,当胞外 [Ca2 + ]增加时细胞破裂死亡 ;细胞经胆固醇处理后 ,当胞外 [Ca2 + ]突然升高时 ,胞内 [Ca2 + ]不仅没有升高 ,反而缓慢降低 ;细胞经羟自由基和胆固醇依次处理后 ,对胞外 [Ca2 + ]的突然升高反应紊乱。结论 :羟自由基。

L-4F抑制低密度脂蛋白诱导的内皮细胞氧自由基产生

目的 探讨L - 4F ,一个载脂蛋白A -Ⅰ (apolipoproteinA -Ⅰ ,ApoA -Ⅰ )类似物 ,能否抑制低密度脂蛋白(LowDensityLipoprotein ,LDL)诱导的内皮细胞 (Endothelialcell,EC)的氧自由基 (Superoxideanion ,O2 )产生。方法 ①采用牛主动脉EC(BovineAorticEndothelialcell,BAEC)作细胞培养 ,分成 4组。第一组不作预处理 ,第二组L -4F 10 μg/ml,第三组LDL 6 .2mmol/L ,第四组LDL +L - 4F ,预处理BAEC 2 4h后 ,用超氧化物歧化酶可抑制的铁化细胞色素C还原法 ,测量A2 3187刺激状态下BAEC的O2 的产生情况。②采用成年犬的颈内动脉作组织的培养 ,分成 3组。第一组不作预处理 ,第二组LDL 6 .2mmol/L ,第三组LDL +LF ,预处理 2 4h后用Hydroethidine 10 μmol/L染色后用共聚焦显微镜测量组织EC的O2 的产量。结果 ①LDL导致A2 3187刺激状态下的BAECO2 产生增加 ,L - 4F可以抑制LDL导致的BAECO2 产生增加 ,而L - 4F本身对BAEC的O2 产生无影响。②LDL导致的血管组织O2 的产生增加 ,L - 4F可抑制LDL导致的血管组织O2 的产生增加。结论 L - 4F可以明显抑制LDL诱导的ECO2 产生增加 ,为将来寻找预防动脉粥样硬化形成的方法提供新的线索和理论依据。

慢性肾功能衰竭患者的低密度脂蛋白和氧自由基的变化及其联系

目的：探讨脂代谢异常，脂质过氧化自由基反应在慢性肾功能衰竭发生发展中的作用。方法：观察３８例慢性肾功能衰竭患者低密度脂蛋白与氧自由基的变化及两者的联系。结果：患者血清低密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白Ｂ１００明显升高；血清脂质过氧化物含量亦显著升高；超氧化物歧化酶活性明显降低；两者相关分析表明：低密度脂蛋白胆固醇升高与脂质过氧化物含量呈正相关，而与超氧化物歧化酶活性呈负相关。结论：慢性肾功能衰竭存在着脂代谢紊乱和脂质过氧化改变，两者存在相关或相依关系。

25-羟维生素D3、低密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸对桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块稳定性的影响

目的探讨25-羟维生素D3[25(OH)D3]、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和同型半胱氨酸(HCY)对桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块稳定性的影响。方法选取2021年1月至2023年4月于内蒙古自治区人民医院体检并诊断为桥本甲状腺炎合并颈动脉斑块的患者200例,随机选取同期体检健康人群116例作为对照组,按照斑块厚度、内部回声、超微血流和溃疡情况及纤维帽是否完整的特点将桥本甲状腺炎合并颈动脉斑块患者分为稳定斑块组(n=132)和易损斑块组(n=68)。记录三组患者的基线资料,采用受试者工作特征(ROC)曲线对颈动脉斑块的稳定性进行评估,计算ROC曲线下面积(AUC)。结果稳定斑块组和易损斑块组葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、LDL-C、HCY水平均高于对照组,25(OH)D3、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。稳定斑块组与易损斑块组患者LDL-C、HCY水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,LDL-C、HCY均是导致颈动脉发生易损斑块的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线分析显示,LDL-C、HCY诊断颈动脉易损斑块的AUC分别为0.662、0.633,灵敏度分别为0.706、0.824,特异度分别为0.636和0.273。结论25(OH)D3、LDL-C、HCY、GLU、TC、HDL-C均是桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块形成的影响因素,LDL-C、HCY均是影响颈动脉斑块稳定性的独立危险因素,对颈动脉易损斑块具有预测价值。

丙丁酚对氧化型低密度脂蛋白和氧自由基促血管平滑肌细胞增殖的影响

用细胞计数和ＭＴＴ快速比色计量法观察到体外培训的牛主动脉平滑肌细胞分别与氧化型低密度脂蛋白和黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶共同培养后，前者明显增殖（Ｐ＜０．０１）。抗氧化剂丙丁酚（１００μｍｏｌ·Ｌ－１）能抑制氧化型低密度脂蛋白和黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶促平滑肌细胞增殖作用；一氧化氮合成酶抑制剂ＮＧ－硝基－Ｌ－精氨酸对两者促平滑肌细胞增殖的作用无影响，同时也不能阻断丙丁酚的抑制两者促细胞增殖作用。这一结果提示，丙丁酚能抑制氧化型低密度脂蛋白和外源性氧自由基促平滑肌细胞增殖，这一作用可能与血管平滑肌细胞中一氧化氮的合成及释放无关。

3-羟-3甲基戊二酰辅酶A还原酶基因多态与血浆高浓度低密度脂蛋白的风险

目的:研究潮汕人群3-羟-3甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶基因多态性与血浆高浓度低密度脂蛋白(LDL)的风险。方法:收集潮汕籍汉族高浓度LDL 792例,并与1 073名健康人对照,用SNPstream技术检测样本HMG-CoA还原酶基因多态性。结果:2个单核苷酸多态性位点(rs3846662和rs12916)与高浓度LDL均有相关性(P<0.05),2个单倍型G-T-C和A-C-C在两组中的分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HMG-CoA还原酶2个单核苷酸多态性和2个单倍型均与血浆高浓度低密度脂蛋白LDL存在相关性。

傅里叶变换显微红外光谱法研究羟自由基与红细胞膜脂和膜蛋白二级结构的作用机制

利用傅里叶变换显微红外光谱法和计算机辅助解析法研究了羟自由基作用于红细胞后膜蛋白二级结构的变化规律及羟自由基对红细胞膜脂损伤的作用机理。结果表明，由于羟自由基的攻击，导致表征蛋白质二级结构的α－螺旋的含量发生变化；自由基损伤３０分钟后，放置３小时其蛋白结构仍不能恢复；由于自由基的过氧化反应，膜脂磷氧双键ＯＰ（νｐ＝０）、ＯＣ双键及ＣＣ双键的含量均改变。

基质细胞衍生因子1对低密度脂蛋白诱导单核—内皮细胞粘附的影响

目的观察基质细胞衍生因子1对低密度脂蛋白诱导的单核细胞-内皮细胞粘附的调节作用,以进一步探讨基质细胞衍生因子1在动脉粥样硬化中的作用。方法密度梯度离心法分离人低密度脂蛋白;逆转录聚合酶反应检测内皮细胞基质细胞衍生因子1mRNA表达,Westernblot检测基质细胞衍生因子1蛋白质的表达;细胞记数法观察低密度脂蛋白及基质细胞衍生因子1抗体干预对内皮细胞单核细胞粘附的影响。结果对照组几乎没有基质细胞衍生因子mRNA以及蛋白质的表达,随着低密度脂蛋白浓度增加,基质细胞衍生因子1mRNA以及蛋白质的表达水平明显增加。低密度脂蛋白浓度为50mgL、100mgL和150mgL时,每个视野粘附的单核细胞数分别为60±20、97±26和170±32,而正常对照组为20±5,差异有极显著性意义(P<0.01)。终浓度为0.1mgL、0.5mgL和1mgL基质细胞衍生因子1抗体干预后,粘附的单核细胞数分别为113±23、53±21和41±10,均低于低密度脂蛋白对照组的186±31,与低密度脂蛋白对照组差异有显著性意义(P<0.05)。结论低密度脂蛋白促进内皮细胞与单核细胞的粘附,其机制与促进内皮细胞表达基质细胞衍生因子1密切相关。

氧化型低密度脂蛋白对人血单核细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

探讨氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶的表达及其活性的影响。采用体外培养人单核细胞源巨噬细胞 ,分别应用逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹检测基质金属蛋白酶 2和基质金属蛋白酶 9基因和蛋白表达 ,酶谱法检测基质金属蛋白酶活性。结果发现 ,不同浓度 (10、2 0、4 0mg/L)氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶 2和基质金属蛋白酶 9基因表达的影响均明显高于相应浓度低密度脂蛋白组 ;基质金属蛋白酶 2和基质金属蛋白酶 9蛋白表达也明显高于相应浓度低密度脂蛋白组 ;基质金属蛋白酶 2和基质金属蛋白酶 9的活性明显高于相应剂量低密度脂蛋白组 ,且随剂量增加而增高。提示氧化修饰低密度脂蛋白可刺激人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶 2、基质金属蛋白酶 9基因及蛋白的表达 ,增强其活性 ,因而有可能促进动脉粥样硬化斑块内基质降解 ,形成易损斑块 。

葡萄籽原花青素对实验性动脉粥样硬化兔基质金属蛋白酶和氧化低密度脂蛋白的影响

目的观察葡萄籽原花青素(GSPE)对实验性动脉粥样硬化兔基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,9)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的可能机制。方法雄性新西兰兔24只,随机分为3组:正常对照组,饲喂标准颗粒饲料;模型组,饲喂含1%胆固醇的颗粒饲料;干预组,饲喂含1%GSPE和1%胆固醇的颗粒饲料。于实验前及实验的第4,8,12周末空腹经耳中动脉采空腹血,检测血清MMP-2,9和血浆ox-LDL水平。于12周末,留取主动脉作常规病理观察和免疫组化染色。结果与模型组相比,GSPE干预组病变明显减轻,免疫组化染色显示主动脉MMP-2和MMP-9表达明显减少,血清MMP-2,MMP-9和ox-LDL水平明显下降。结论GSPE有明显的抗动脉粥样硬化效应,该效应与其抗氧化、抑制MMP有关。

氧化低密度脂蛋白增加巨噬细胞基质金属蛋白酶-9和-12的表达

为探讨巨噬细胞在动脉粥样斑块不稳定性中的作用机制 ,观察致动脉粥样硬化的主要炎性因子 氧化低密度脂蛋白 (oxLDL) ,对巨噬细胞基质金属蛋白酶MMP 9和MMP 12表达和分泌的影响。在体外分离培养小鼠腹腔巨噬细胞 ,以不同浓度低密度脂蛋白 (LDL)、氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)作用细胞 ;作用 6h后用RT PCR检测MMP 9,MMP 12mRNA表达 ,作用 2 4h后用Westernblot和 β 酪蛋白酶谱法检测MMP 9,MMP 12酶蛋白的分泌及活性。ox LDL增强巨噬细胞MMP 9,MMP 12mRNA表达和酶蛋白的分泌及活性 ,对MMP 12的诱导作用更为显著且呈浓度依赖性。表明oxLDL可能通过同时上调巨噬细胞基质金属蛋白酶MMP 9和MMP

羟基自由基对兔脑微粒体膜脂及膜蛋白的损伤

本文研究了过氧化氢与亚铁离子体系产生的羟基自由基对兔脑微粒体脂质过氧化作用及对膜上(Na^++K^+)-ATP酶活性的影响.结果表明,羟基自由基导致兔脑微粒体脂质过氧化,增加丙二醛的含量.羟基自由基还使微粒体膜巯基数下降,(Na^++K^+)-ATP酶活力受到抑制.阿魏酸钠对抑制微粒体脂质过氧化及对膜巯基和(Na^++K^+)-ATP酶均有保护作用.自旋捕集实验结果进一步证明药物对羟基自由基的猝灭作用.

基质细胞衍生因子1α—CXCR4趋化THP-1细胞迁移及氧化型低密度脂蛋白的影响

目的探讨基质细胞衍生因子1α对单核细胞趋化作用、氧化型低密度脂蛋白对基质细胞衍生因子1α趋化单核细胞的影响及其对THP-1细胞表达CXCR4的影响。方法用Transwell迁移实验检测基质细胞衍生因子1α对单核细胞的趋化作用，逆转录聚合酶链反应检测CXCR4 mRNA的表达，Westem blot检测CXCR4蛋白的表达，并观察氧化型低密度脂蛋白对THP-1细胞CXCR4表达的剂量和时间效应。结果基质细胞衍生因子1α呈浓度依赖性诱导单核细胞迁移，加入CXCR4抗体可明显抑制这种作用。经不同浓度氧化型低密度脂蛋白处理48h后的THP-1细胞再用10μg/L基质细胞衍生因子1α进行趋化时，氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性地增加单核细胞的迁移，50mg／L氧化型低密度脂蛋白组迁移的细胞数是对照组的11倍。THP-1细胞有基础水平的CXCR4表达，50mg／L氧化型低密度脂蛋白可使CXCR4的表达上调4．5倍。CXCR4上调最早在6h内发生，12h达峰值。结论基质细胞衍生因子1α--CXCR4参与趋化单核细胞迁移，其作用被氧化型低密度脂蛋白加强；氧化型低密度脂蛋白上调CXCR4表达。

基质细胞衍生因子1α对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞与单核细胞粘附的影响

目的观察基质细胞衍生因子1α对氧化型低密度脂蛋白诱导的单核细胞与内皮细胞粘附的影响。方法逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法分别检测内皮细胞基质细胞衍生因子1αmRNA和蛋白的表达,静态粘附实验观察氧化型低密度脂蛋白和基质细胞衍生因子1α抗体干预对内皮细胞与单核细胞粘附的影响。结果基质细胞衍生因子1α在静息状态下的血管内皮细胞上几乎不表达,随着氧化型低密度脂蛋白浓度增加和处理时间延长,基质细胞衍生因子1α的mRNA和蛋白表达水平均明显上调,25mg/L氧化型低密度脂蛋白处理48h时,基质细胞衍生因子1α表达到达峰值。氧化型低密度脂蛋白浓度为1、5、25及125mg/L时,每个视野粘附的单核细胞数分别为190±15、226±23、280±14、253±8,而正常对照组为104±10,差异有显著性意义(P<0.05)。终浓度为0.01、0.1和1μg/L基质细胞衍生因子1α抗体干预后,粘附的单核细胞数分别为202±17、142±6和115±12,明显低于对照组的279±11(P<0.05)。结论基质细胞衍生因子1α参与了内皮细胞与单核细胞的粘附。

低密度脂蛋白循环免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶-1及其抑制物的作用

目的探讨低密度脂蛋白循环免疫复合物(LDL-IC)对U937细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法分别采用不同浓度的天然低密度脂蛋白(N-LDL)、氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)及其免疫复合物作用U937细胞,通过半定量RT-PCR分析U937细胞中MMP-1和TIMP-1基因表达的变化。结果正常U937细胞几乎不表达MMP-1,而高表达TIMP-1。N-LDL对细胞MMP-1和TIMP-1 mRNA表达没有影响。Ox-LDL能引起MMP-1轻度表达,但显著地下调TIMP的表达;而天然、氧化LDL的循环免疫复合物均非常显著地增加MMP-1和降低TIMP-1的mRNA表达(P<0.001),且较Ox-LDL对MMP-1的作用更为显著(P<0.001),并具剂量效应。结论N-LDL-IC和Ox-LDL-IC增强U937细胞MMP-1 mRNA表达,下调其抑制物TIMP-1的表达。

氧化修饰低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2和骨桥蛋白基因表达及细胞增殖的影响

目的 探讨氧化修饰低密度脂蛋白 (ox L DL)和天然低密度脂蛋白 (n LDL)促血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖是否与细胞外基质(ECM)降解及粘附蛋白合成有关。方法 应用 Northern印迹和 3 H- Td R掺入的方法 ,观察两种脂蛋白对 VSMC表达基质金属蛋白酶 - 2 (MMP- 2 )和骨桥蛋白 (OPN)的影响 ,以及 ECM代谢与 VSMC增殖之间的关系。结果 1 0 μg/ml ox L DL作用于细胞 2 4 h可使 MMP- 2和 OPN基因表达活性增加 1倍左右 ;n LDL对两种基因表达的诱导作用较弱 ,高浓度的 ox LDL对 MMP- 2和 OPN表达不产生明显的影响。在一定浓度和时间范围内 ,LDL促细胞增殖作用显示量 -效与时 -效依赖关系。结论 ox LDL和 n L DL可在多位点上发挥促进

丹红注射液对脑梗死患者氧化低密度脂蛋白及基质金属蛋白酶-2水平的影响

目的探讨脑梗死患者丹红注射液治疗前后血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、基质金属蛋白酶(MMP-2)水平的变化。方法选择住院治疗的急性脑梗死病人15例,给予0.9%生理盐水250 ml加丹红注射液40 ml每日1次静点,且在入院时及药物治疗后2 w分别检测ox-LDL,MMP-2的抗体水平。结果丹红注射液治疗前ox-LDL、MMP-2水平分别为(43.94±25.20)、(25.84±14.10)μg/dl,治疗后水平分别为(31.25±24.45)、(21.12±7.82)μg/dl,治疗前后血清ox-LDL含量有显著变化(P<0.05)。结论丹红注射液从抗氧化的角度,对急性脑梗死的治疗起重要作用。

注射用丹参(冻干)对实验性动脉粥样硬化兔基质金属蛋白酶和氧化低密度脂蛋白的影响

目的观察注射用丹参(冻干)对动脉粥样硬化模型兔基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的影响,探讨丹参对早期动脉粥样硬化干预的机制。方法新西兰白兔(雌雄不分)15只,随机分为3组,正常对照组饲喂标准颗粒饲料;高脂饮食组饲喂含1%胆固醇、5%猪油、6%蛋黄粉的颗粒饲料;丹参干预组在给予同模型组一样的饲料同时给予丹参静脉注射及口服干预,于实验前及实验第7周末采集耳缘静脉血,检测血脂、MMP-2和ox-LDL水平。结果7周后与正常对照组比较,高脂饮食组血脂(主要指总胆固醇)、MMP-2和血清ox-LDL水平明显升高,与高脂饮食组比较,丹参干预组血清中三酰甘油、低密度脂蛋白水平明显降低(P<0.05),而高密度脂蛋白升高明显(P<0.05)。结论注射用丹参(冻干)有明显降低血清总胆固醇的作用,同时其有抗动脉粥样硬化的作用,此作用可能与其抗氧化、抑制MMP、稳定斑块有关。

洛伐他汀对高糖和低密度脂蛋白所致肾小管上皮细胞外基质蓄积的改善作用

为探讨洛伐他汀对高糖环境和低密度脂蛋白（LDL）刺激下人肾小管上皮细胞外基质（ECM）蓄积的作用。经体外培养人肾脏近端小管上皮细胞(HKC)，分别用LDL和/或高糖刺激HKC细胞，并与洛伐他汀共孵育。采用3H－脯氨酸参入法测定总胶原合成，ELISA方法测定细胞培养上清中IV型胶原和板层素浓度，RT－PCR技术观察HKC细胞中IV型胶原及纤维连接蛋白(FN) mRNA表达。结果表明高糖和LDL均可增加HKC细胞培养上清中的IV型胶原和板层素水平，并能上调IV型胶原和FN mRNA 的表达，洛伐他汀可以部分或全部逆转高糖和LDL的作用。说明高糖和LDL均可促使HKC细胞合成细胞外基质，洛伐他汀可以逆转它们的作用。

氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞表达基质细胞衍生因子1α的影响

目的为探讨氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞上基质细胞衍生因子1α表达的影响。方法原代培养的大鼠血管平滑肌细胞,与氧化型低密度脂蛋白共同孵育,用逆转录聚合酶链反应检测基质细胞衍生因子1αmRNA,免疫印迹检测其蛋白表达变化,观察氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞表达基质细胞衍生因子1α的剂量—时间效应。结果原代培养的大鼠血管平滑肌细胞有基础水平的基质细胞衍生因子1α表达,且在0～50mg/L范围内,基质细胞衍生因子1α表达量随氧化型低密度脂蛋白浓度增加而增加,50mg/L可使基质细胞衍生因子1α上调约5倍;经50mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激0～48h,其峰值在12h,随后逐渐下降,但仍维持在基础水平的3倍左右。结论氧化型低密度脂蛋白上调大鼠血管平滑肌细胞的基质细胞衍生因子1α的表达。