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干扰TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞的构建及其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响
1
作者
宋志茹
刘秀盈
+3 位作者
朱晶晶
刘静静
冯娅茹
王建勋
《山东医药》
CAS
2022年第2期1-6,17,共7页
目的构建干扰胸腺细胞选择相关高迁移率群体盒(TOX)基因联合抗CD38 CAR-T细胞,观察其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法采集健康志愿者外周血,分离单个核细胞(PBMC),提取原代T淋巴细胞。构建以shRNA技术靶向抑制TOX的抗CD38 CA...
目的构建干扰胸腺细胞选择相关高迁移率群体盒(TOX)基因联合抗CD38 CAR-T细胞,观察其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法采集健康志愿者外周血,分离单个核细胞(PBMC),提取原代T淋巴细胞。构建以shRNA技术靶向抑制TOX的抗CD38 CAR分子,分别命名为TOX-shRNA1-CD38 CAR和TOX-shRNA2-CD38 CAR,另设计一条不针对任何靶点的无意义RNA序列作为对照,命名为CD38 CAR分子。将分子酶切并连接逆病毒载体包装质粒pMFG,获得pMFG-TOX-shRNA1-MYC-CD38 CAR、pMFG-TOX-shRNA2-MYC-CD38 CAR和pMFG-MYC-CD38 CAR。将人原代T淋巴细胞分为CD38 TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组、TOX-shRNA2-CD38 CAR-T组、CAR-T组,分别转导pMFG-TOX-shRNA1-MYC-CD38 CAR、pMFG-TOX-shRNA2-MYC-CD38 CAR和pMFG-MYCCD38 CAR质粒,获得CD38 CAR-T细胞、TOX-shRNA1-CD38 CAR-T细胞和TOX-shRNA2-CD38 CAR-T细胞。采用RT-QPCR法检测三组细胞中TOX mRNA的相对表达量;记录三组细胞0~10 d体外培养生长倍数,观察细胞增殖能力。选取CD38高表达的人多发性骨髓瘤荧光素酶标记细胞RPMI-Luc、人Burkitt’s淋巴瘤荧光素酶标记细胞Raji-Luc作为靶细胞,与三组CAR-T细胞分别共培养48 h;另取三组CAR-T细胞单独培养作为对照,不加肿瘤细胞。采用流式细胞术检测三组CAR-T细胞表面CD69的表达效率,评价CAR-T细胞活化情况;对三组细胞进行CFSE染色,采用流式细胞术观察CAR-T细胞增殖能力;荧光素酶化学发光法观察CAR-T细胞在不同效靶比(1∶2、1∶4、1∶8)时对肿瘤细胞的杀伤效率;ELISA法检测三组CAR-T细胞上清中IFN-γ释放量;流式细胞术检测三组细胞表面PD-1表达量,评估CAR-T细胞的耗竭程度。结果 CD38 CAR-T组、TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组、TOXshRNA2-CD38 CAR-T组的转导效率分别为41.51%、41.28%、44.84%,均超过40%。与CD38 CAR-T组比较,TOXshRNA2-CD38 CAR-T组TOX mRNA表达水平降低(P <0.05),TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组无明显变化(P>0.05)。三组CAR-T细胞体外培养0~10 d均稳定增殖,三组间生长倍数比较差异无统计学意义(P <0.05)。三组与肿瘤细胞共培养后,CD69表达效率均升高(P均<0.01)。与单独培养的CAR-T细胞相比,三组CAR-T细胞与Raji-Luc、RPMI-Luc细胞共培养后FITC信号左移,增殖加快,三组增殖能力比较无统计学差异(P> 0.05)。与CD38 CAR-T组相比,TOX-shRNA2-CD38 CAR-T组在不同效靶比时对肿瘤细胞的杀伤效率均提高,γ干扰素释放水平升高,细胞表面PD-1表达水平降低(P <0.05或<0.01),而TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组与CD38 CAR-T组比较,肿瘤细胞的杀伤效率、γ干扰素释放水平、细胞表面PD-1表达水平均无统计学差异(P均>0.05)。结论成功构建了靶向抑制TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞,TOX-shRNA-CD38 CAR-T细胞能够有效抑制TOX表达;经肿瘤细胞激活后,其体外增殖活性及抗肿瘤能力显著增强,且TOX-shRNA-CD38 CAR-T细胞耗竭也得到改善。
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关键词
嵌合型抗原受体基因修饰的T
细胞
胸腺
细胞
选择相关高
迁移
率
群体
盒基因
多发性骨髓瘤
淋巴瘤
细胞
免疫治疗
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职称材料
外源微直流电场对肺腺癌细胞Calu-3迁移的影响
2
作者
李莎
王晓燕
+3 位作者
赵三军
高润池
赵敏
施利民
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
2017年第8期1015-1025,共11页
该文通过Time-lapse技术,以无电场作用的人肺腺癌细胞Calu-3细胞为对照组,以分别暴露于电场强度为2 V/cm、4 V/cm和6 V/cm的Calu-3细胞为实验组,研究了外源微直流电场对Calu-3迁移的影响。结果表明,Calu-3细胞可通过单细胞和群体细胞两...
该文通过Time-lapse技术,以无电场作用的人肺腺癌细胞Calu-3细胞为对照组,以分别暴露于电场强度为2 V/cm、4 V/cm和6 V/cm的Calu-3细胞为实验组,研究了外源微直流电场对Calu-3迁移的影响。结果表明,Calu-3细胞可通过单细胞和群体细胞两种形式迁移,直流电场对这两种迁移形式具有显著的影响:无电场作用时,单细胞和群体性的Calu-3随机迁移;加入直流电场后,单细胞和群体性的Calu-3朝向负极定向迁移,迁移方向性指数、迁移方向持续性指数、轨迹速度、位移速度显著高于无电场作用的对照组。电场强度为4 V/cm时,单细胞和群体性的Calu-3趋电性最明显,迁移方向最恒定。相同强度的电场作用下,Calu-3群体细胞迁移的方向性指数和方向持续性均高于单细胞迁移,但单细胞迁移的轨迹速度和位移速度快于群体细胞迁移。
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关键词
肺腺癌
细胞
Calu-3
直流电场
单
细胞
迁移
群体细胞迁移
趋电性
原文传递
群体细胞动力学研究进展
被引量:
1
3
作者
林绍珍
陈鹏程
+1 位作者
李博
冯西桥
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第28期3100-3117,共19页
在胚胎发育、伤口愈合、肿瘤侵袭等生理和病理过程中,群体细胞动力学行为起着重要调控作用.群体细胞动力学涉及细胞骨架演化、生化信号转导、细胞之间以及细胞与微环境之间的相互作用等,是力学与生物学交叉领域的一个前沿课题.本文重点...
在胚胎发育、伤口愈合、肿瘤侵袭等生理和病理过程中,群体细胞动力学行为起着重要调控作用.群体细胞动力学涉及细胞骨架演化、生化信号转导、细胞之间以及细胞与微环境之间的相互作用等,是力学与生物学交叉领域的一个前沿课题.本文重点介绍单层多细胞系统群体动力学研究的一些最新进展.首先,介绍单层多细胞系统在不同边界约束下的群体细胞运动模式及其演化规律,并与多粒子系统拥堵转变行为进行类比分析.进而介绍单层多细胞系统的细胞形状和取向的统计规律、细胞取向所形成的拓扑缺陷,及其对群体细胞运动和细胞命运的影响、然后,介绍群体细胞的振荡行为及其发生机制与理论模型,并简要讨论基底曲率对群体细胞动力学的影响.最后,介绍群体细胞动力学研究的一种常用力学模型——细胞顶点模型.
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关键词
群体
细胞
动力学
群体细胞迁移
力化-生耦合
细胞
顶点模型
原文传递
题名
干扰TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞的构建及其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响
1
作者
宋志茹
刘秀盈
朱晶晶
刘静静
冯娅茹
王建勋
机构
北京中医药大学生命科学学院
深圳北京中医药大学研究院
出处
《山东医药》
CAS
2022年第2期1-6,17,共7页
基金
北京中医药大学高层次人才科研启动经费项目(9011451310032)。
文摘
目的构建干扰胸腺细胞选择相关高迁移率群体盒(TOX)基因联合抗CD38 CAR-T细胞,观察其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法采集健康志愿者外周血,分离单个核细胞(PBMC),提取原代T淋巴细胞。构建以shRNA技术靶向抑制TOX的抗CD38 CAR分子,分别命名为TOX-shRNA1-CD38 CAR和TOX-shRNA2-CD38 CAR,另设计一条不针对任何靶点的无意义RNA序列作为对照,命名为CD38 CAR分子。将分子酶切并连接逆病毒载体包装质粒pMFG,获得pMFG-TOX-shRNA1-MYC-CD38 CAR、pMFG-TOX-shRNA2-MYC-CD38 CAR和pMFG-MYC-CD38 CAR。将人原代T淋巴细胞分为CD38 TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组、TOX-shRNA2-CD38 CAR-T组、CAR-T组,分别转导pMFG-TOX-shRNA1-MYC-CD38 CAR、pMFG-TOX-shRNA2-MYC-CD38 CAR和pMFG-MYCCD38 CAR质粒,获得CD38 CAR-T细胞、TOX-shRNA1-CD38 CAR-T细胞和TOX-shRNA2-CD38 CAR-T细胞。采用RT-QPCR法检测三组细胞中TOX mRNA的相对表达量;记录三组细胞0~10 d体外培养生长倍数,观察细胞增殖能力。选取CD38高表达的人多发性骨髓瘤荧光素酶标记细胞RPMI-Luc、人Burkitt’s淋巴瘤荧光素酶标记细胞Raji-Luc作为靶细胞,与三组CAR-T细胞分别共培养48 h;另取三组CAR-T细胞单独培养作为对照,不加肿瘤细胞。采用流式细胞术检测三组CAR-T细胞表面CD69的表达效率,评价CAR-T细胞活化情况;对三组细胞进行CFSE染色,采用流式细胞术观察CAR-T细胞增殖能力;荧光素酶化学发光法观察CAR-T细胞在不同效靶比(1∶2、1∶4、1∶8)时对肿瘤细胞的杀伤效率;ELISA法检测三组CAR-T细胞上清中IFN-γ释放量;流式细胞术检测三组细胞表面PD-1表达量,评估CAR-T细胞的耗竭程度。结果 CD38 CAR-T组、TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组、TOXshRNA2-CD38 CAR-T组的转导效率分别为41.51%、41.28%、44.84%,均超过40%。与CD38 CAR-T组比较,TOXshRNA2-CD38 CAR-T组TOX mRNA表达水平降低(P <0.05),TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组无明显变化(P>0.05)。三组CAR-T细胞体外培养0~10 d均稳定增殖,三组间生长倍数比较差异无统计学意义(P <0.05)。三组与肿瘤细胞共培养后,CD69表达效率均升高(P均<0.01)。与单独培养的CAR-T细胞相比,三组CAR-T细胞与Raji-Luc、RPMI-Luc细胞共培养后FITC信号左移,增殖加快,三组增殖能力比较无统计学差异(P> 0.05)。与CD38 CAR-T组相比,TOX-shRNA2-CD38 CAR-T组在不同效靶比时对肿瘤细胞的杀伤效率均提高,γ干扰素释放水平升高,细胞表面PD-1表达水平降低(P <0.05或<0.01),而TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组与CD38 CAR-T组比较,肿瘤细胞的杀伤效率、γ干扰素释放水平、细胞表面PD-1表达水平均无统计学差异(P均>0.05)。结论成功构建了靶向抑制TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞,TOX-shRNA-CD38 CAR-T细胞能够有效抑制TOX表达;经肿瘤细胞激活后,其体外增殖活性及抗肿瘤能力显著增强,且TOX-shRNA-CD38 CAR-T细胞耗竭也得到改善。
关键词
嵌合型抗原受体基因修饰的T
细胞
胸腺
细胞
选择相关高
迁移
率
群体
盒基因
多发性骨髓瘤
淋巴瘤
细胞
免疫治疗
Keywords
chimeric antigen receptor gene modified T cells
TOX gene
multiple myeloma
lymphoma
cellular immunotherapy
分类号
R733 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
外源微直流电场对肺腺癌细胞Calu-3迁移的影响
2
作者
李莎
王晓燕
赵三军
高润池
赵敏
施利民
机构
云南师范大学生命科学学院
生物能源持续开发利用教育部工程研究中心
美国加州大学戴维斯分校医学院
出处
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
2017年第8期1015-1025,共11页
基金
国家自然科学基金–云南省联合基金(批准号:U1132603)
国家重点基础研究发展计划(批准号:2012CB518100)
+2 种基金
云南省应用基础研究青年项目(批准号:2012FD021)
教育部工程中心开放基金
国家自然科学基金(批准号:81660519)资助的课题~~
文摘
该文通过Time-lapse技术,以无电场作用的人肺腺癌细胞Calu-3细胞为对照组,以分别暴露于电场强度为2 V/cm、4 V/cm和6 V/cm的Calu-3细胞为实验组,研究了外源微直流电场对Calu-3迁移的影响。结果表明,Calu-3细胞可通过单细胞和群体细胞两种形式迁移,直流电场对这两种迁移形式具有显著的影响:无电场作用时,单细胞和群体性的Calu-3随机迁移;加入直流电场后,单细胞和群体性的Calu-3朝向负极定向迁移,迁移方向性指数、迁移方向持续性指数、轨迹速度、位移速度显著高于无电场作用的对照组。电场强度为4 V/cm时,单细胞和群体性的Calu-3趋电性最明显,迁移方向最恒定。相同强度的电场作用下,Calu-3群体细胞迁移的方向性指数和方向持续性均高于单细胞迁移,但单细胞迁移的轨迹速度和位移速度快于群体细胞迁移。
关键词
肺腺癌
细胞
Calu-3
直流电场
单
细胞
迁移
群体细胞迁移
趋电性
Keywords
lung cancer Calu-3
direct current electric field
isolated cell migration
clustered cell migration
electrotaxis
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
群体细胞动力学研究进展
被引量:
1
3
作者
林绍珍
陈鹏程
李博
冯西桥
机构
清华大学航天航空学院工程力学系生物力学与医学工程研究所
出处
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第28期3100-3117,共19页
基金
国家自然科学基金(11921002,11922207)资助。
文摘
在胚胎发育、伤口愈合、肿瘤侵袭等生理和病理过程中,群体细胞动力学行为起着重要调控作用.群体细胞动力学涉及细胞骨架演化、生化信号转导、细胞之间以及细胞与微环境之间的相互作用等,是力学与生物学交叉领域的一个前沿课题.本文重点介绍单层多细胞系统群体动力学研究的一些最新进展.首先,介绍单层多细胞系统在不同边界约束下的群体细胞运动模式及其演化规律,并与多粒子系统拥堵转变行为进行类比分析.进而介绍单层多细胞系统的细胞形状和取向的统计规律、细胞取向所形成的拓扑缺陷,及其对群体细胞运动和细胞命运的影响、然后,介绍群体细胞的振荡行为及其发生机制与理论模型,并简要讨论基底曲率对群体细胞动力学的影响.最后,介绍群体细胞动力学研究的一种常用力学模型——细胞顶点模型.
关键词
群体
细胞
动力学
群体细胞迁移
力化-生耦合
细胞
顶点模型
Keywords
collective cell dynamics
collective cell migration
mechano-chemo-biological coupling
cellular vertex model
分类号
Q25 [生物学—细胞生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
干扰TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞的构建及其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响
宋志茹
刘秀盈
朱晶晶
刘静静
冯娅茹
王建勋
《山东医药》
CAS
2022
0
下载PDF
职称材料
2
外源微直流电场对肺腺癌细胞Calu-3迁移的影响
李莎
王晓燕
赵三军
高润池
赵敏
施利民
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
2017
0
原文传递
3
群体细胞动力学研究进展
林绍珍
陈鹏程
李博
冯西桥
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
原文传递
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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