四川省炉霍县牦牛源蜱传斑点热群立克次体和无形体分子检测及遗传进化分析

【目的】了解四川省炉霍县牦牛体表寄生蜱的种类及其斑点热群立克次体(Spotted fever group Rickettsia,SFGR)和无形体的感染情况。【方法】在炉霍县6个乡采集牦牛体表的蜱,经形态学初步鉴定后提取蜱基因组DNA,采用PCR技术分别扩增蜱ITS⁃2、SFGR OmpB和无形体16S rRNA基因部分片段,对阳性产物进行测序、比对及构建进化树,从而确定蜱的种类及其SFGR和无形体的感染情况。【结果】在820份蜱样本中,只包含青海血蜱(Haemaphysalis qinghaiensisus,29/820)和微小扇头蜱(Rhipicephalus micro⁃plus,791/820)。总共有408份蜱样本被检出SFGR,只检出Candidatus Rickettsia longicornii 1种SFGR,总感染率为49.8%(408/820)。本次调查的6个乡均检出SFGR,不同乡之间SFGR感染率的差异极显著(χ^(2)=111.524,P=0.000<0.01)。青海血蜱和微小扇头蜱的SFGR感染率分别为44.8%(13/29)和49.9%(395/791),差异不显著(χ^(2)=0.292,P=0.589>0.5)。有5个乡检出无形体,共检出Anaplasma bovis、A.marginale、A.platys和A.phagocytophilum 4种无形体,总感染率为30.9%(253/820),不同乡之间蜱样本无形体感染率差异极显著(χ^(2)=139.825,P=0.000<0.01)。青海血蜱和微小扇头蜱的无形体感染率分别为6.9%(2/29)和31.7%(251/791),差异极显著(χ^(2)=8.087,P=0.004<0.01)。SFGR与无形体混合感染率为18.8%(154/820)。【结论】炉霍县存在青海血蜱和微小扇头蜱,还携带SFGR和多种无形体,应做好当地蜱传斑点热群立克次体和无形体的防治工作。

我国西部地区蜱类携带斑点热群立克次体现状

近几十年来,蜱传疾病已经成为一个全球性的健康问题。在世界范围内斑点热群立克次体(SFGR)被认为是重要的蜱传病原体。伴随着全球一体化进程的加快,近年来在我国西部地区多次发现蜱传新发再发病原体。本文主要针对我国西部地区蜱虫携带斑点热群立克次体现状进行了简要概述,以期为我国西部地区蜱传斑点热群立克次体疾病的系统研究和综合防控提供参考信息。

云南省大理市鼠、蜱中检测出斑点热群立克次体DNA

目的 了解鼠、蜱中自然感染斑点热群立克次体状况。方法 用PCR法检测鼠类脾脏和蜱类中的斑点热群立克次体DNA序列片段。结果 在云南省大理市下关野外山地捕获鼠类 9种 5 1只 ,从大足鼠 (1/ 15 )、大绒鼠 (1/ 7)和短尾 (1/ 8)各检出阳性 1份 ,其他鼠种均为阴性 ,总阳性率为 5 .88%。从采自弥渡县的 2 0 8只勐突血蜱中检出阳性 5份 ,阳性率为 2 .40 %。结论 初步认为云南省大理地区存在斑点热疫源地。

部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的检测

目的了解我国部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的自然感染情况,比较南北地区不同鼠种带菌率的差异。方法在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州5省(自治区)共捕获鼠473只,用聚合酶链反应检测鼠脾脏中的斑点热群立克次体DNA序列片段。结果共检测鼠473只,69只阳性,阳性率为14.6%;在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州省(自治区)都检测出阳性标本,阳性率分别为3.1%、21.6%、30.0%、10.8%和21.4%。结论我国黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州省(自治区)的鼠中都存在斑点热群立克次体的感染,南北地区鼠的带菌率差异无统计学意义(P>0.05)。

吉林省林区家畜中斑点热群立克次体与莱姆病螺旋体复合感染的血清学调查

目的了解吉林珲春地区家畜中斑点热、莱姆病及其复合感染的情况。方法应用间接免疫荧光法检测家畜血清中斑点热群立克次体和伯氏疏螺旋体的IgG抗体。结果牛血清中斑点热感染率为18.0%,莱姆病感染率为27.5%,复合感染率为9.5%;羊血清中斑点热感染率为19.2%,莱姆病感染率为31.5%,复合感染率为12.8%。结论吉林珲春地区家畜中广泛存在斑点热和莱姆病的复合感染。

黑龙江林区野鼠中斑点热群立克次体的核酸检测与序列分析

目的：了解黑龙江林区野鼠中斑点热群立克次体的感染情况。方法：运用聚合酶链反应方法对黑龙江地区采集的啮齿动物标本扩增斑点热群立克次体外膜蛋白A（OmpA）基因。阳性标本送测序并应用Mega5．0软件进行序列分析。结果：共检测鼠标本514份，斑点热群立克次体的阳性率为9．3％（95％CI：7．1％～12．2％），牡丹江、绥芬河、同江和东宁四个地区斑点热群立克次体的阳性率分别为12．4％（39／314），5．3％（3／57），2．0％（1／51），5．4％（5／92），地区间阳性率差异有统计学意义（P=O．023）。感染斑点热群立克次体的有仓鼠、大仓鼠、大林姬鼠、褐家鼠、黑线姬鼠、红背鼠平、鼠句黯、棕背鼠平、东方田鼠、明纹花松鼠10种，鼠种间阳性率差异有统计学意义（P=O．002）；棕背肝的阳性率最高，为22．1％（21／95）。测序结果显示鼠感染的斑点热群立克次体基因型是黑龙江立克次体基因型和一种新的未定种基因型。结论：黑龙江地区存在鼠感染黑龙江立克次体，同时可能存在未定种的新的斑点热群立克次体。

190kDR.rOmpA基因序列对斑点热群立克次体的检测

目的为探讨190 kD R.rOmpA 基因序列对斑点热群立克次体的检测作用。方法从立氏立克次体190 kD 外膜蛋白 A(R.rOmpA)基因序列设计引物,利用 PCR 检测的方法,检测了683只蜱类标本和146个鼠类脏器标本,并随机抽取1株森林革蜱阳性扩增产物进行克隆与序列测定。结果从蜱类标本和鼠类脏器标本中检测出了斑点热立克次体 DNA 片段;所测序列的分型结果表明与前苏联的 DnS 14株型别一致,与我国曾经检测出的斑点热立克次体株差异较大。结论 190kD 外膜蛋白 A 基因序列可用于斑点热立克次体检测,并可用于斑点热群立克次体基因型或亚型之间的鉴别。

斑点热群立克次体中国分离株rOmpA基因片段的克隆和序列分析

用Rr190.70p-602n引物扩增了斑点热群立克次体（spottedfevergrouprickettsiae，SFGR）中国分离株（BJ－90株、Ha－91株和HLJ－054株）及SFGR国际标准株西伯利亚立克次体（Rickettsiasibiricu）246株和派克立克次体（R.parkeri）的rOmpA基因片段，将PCR产物克隆入pGEM－T载体中，用双脱氧法进行序列测定，并与SFGR的rOmpA基因已知序列进行了比较。结果表明，SFGR国际标准株间rOmpA基因片段的核苷酸同源性为90.06%～96.62%，推定氨基酸的同源性为83.05％～94.35％，中国分离株与国际标准株及参考株rOmpA基因片段比较的结果发现：BJ－90株及Ha－91株与西伯利亚立克次体标准株的核苷酸同源性分别为99．06％和98．31％，推定氨基酸的同源性则为98.87％和96.61％，HL－93株和HLJ-054株与日本立克次体（R.japonica）核苷酸同源性较高，分别为96.62％和95.68％，推定氨基酸的同源性为92．09％和89．27％。在中国分离株内，BJ-90株和Ha－91株的核昔酸同源性高达99．20％，推定氨基酸的同源性为97．74％，HIJ－054株和HL－93株rOmpA基因片段的核苷酸及推定氨基酸的同源性分别为98.12％，94.92％。因此认为在中国广阔的地域内，除HLJ-054株和HL-93株可能为SFGR的新成员外。

斑点热群立克次体中国分离株HL-93和HLJ-054亲缘关系的研究

目的 通过斑点热群立克次体 (spottedfevergrouprickettsiae ,SFGR)rOmpA基因片段的序列分析对HL 93和HLJ 0 5 4的亲缘关系进行研究。方法 用PCR分段扩增rOmpA基因重复区后 1 9kb片段 ,PCR产物直接测序 ,用WinstarDNA分析软件包进行同源性比较、进化树分析及酶切位点的分析。 结果 HL 93株和HLJ 0 5 4株核苷酸及推定氨基酸的同源性均在 99%以上 ,在树形图上单独聚为一类。常用酶的酶切位点完全一致。结论 HL 93株和HLJ 0 5 4株为同一种SFGR ,建议均命名为黑龙江立克次体 ,但可能存在株间差异性。

斑点热群立克次体广东分离株OmpA基因片段的克隆及序列分析

目的 鉴定斑点热群立克次体广东分离株GDFK5 8- 2 0 0 0和GDFK5 9- 2 0 0 0种属类型。方法 用PCR方法扩增GDFK5 8- 2 0 0 0和GDFK5 9- 2 0 0 0的OmpA基因起始部位 5 33bp片段 ,克隆于pMD18-T载体并进行测序 ,测序结果与Genbank中其它斑点热群立克次体相应基因片段的核苷酸进行比较 ,用DNASTAR软件分析结果。结果 GDFK5 8- 2 0 0 0、GDFK5 9- 2 0 0 0和西伯利亚立克次体之间的核苷酸同源性为 99 6 %～ 99 8% ,推断的氨基酸同源性为 99 6 %～ 99 8% ,常用于分类鉴定的酶切位点完全一致。结论 两株广东分离株属于斑点热群立克次体的西伯利亚立克次体种。

斑点热群立克次体中国分离株染色体DNA限制性核酸内切酶分析

应用限制性核酸内切酶Hind Ⅲ、BamHI、Pst Ⅰ及EcoRI,对本研究室从斑点热病人分离的立克次体An-84、Se-85、W-883株,从蜱分离的FT-84、MT-842株、从蜱卵分离的TO-85株及中国参考株JH-74蜱株与7株斑点热群立克次体国际标准株,进行了染色体DNA限制性核酸内切酶酶切片段电泳图谱分析。结果表明不同种的斑点热群立克次体国际标准株的DNA酶切图谱不相同,各具特征。7株中国分离株与国际标准株西伯利亚立克次体(Rickettsia sibirica)的DNA酶切图谱完全一致,株间未发现有差异。由此证明中国分离株均属西伯利亚立克次体,所致疾病为北亚蜱传斑点热(NorthAsia Tick-Borne Spotted Fever)。

斑疹伤寒群立克次体对肝脏的损害

斑疹伤寒患者的临床表现为发热、头痛、皮疹及中枢神经系统症状,但斑疹伤寒患者早期常伴有肝脏受损,肝功能异常,应引起重视.我们观察了1997年1月-2002年7月我科收治的35名斑疹伤寒患者的肝功能异常情况,现报告如下.

中国北方斑点热群立克次体病原学和分子流行病学研究

斑点热是由斑点热群立克次体引起的一系列疾病的总称,包括:落矶山斑点热、钮扣热、北亚热、昆士兰热、立克次体痘和日本红斑热.该病是自然疫源性疾病,人群易感性高且难于消灭.随着资源开发、人们社会实践活动的增加及旅游事业的发展,斑点热在西方和欧洲发病率逐年增高.据报道,美国落矶山斑点热的年发病率为5%,欧洲钮扣热为10%.我国自1958年开始对斑点热群立克次体进行研究,历经40余年从血清学上已证实我国北方有:北亚热、立克次体痘及扭扣热,从病原学上证实的有北亚热.为了进一步查明我国北方斑点热疫源地及SFGR种群的分布,我们用系列分子流行病学方法在我国北方进行了SFGR的研究.

四川石渠县牦牛源蜱感染斑点热群立克次体分子流行病学调查

目的了解四川省石渠县牦牛体表寄生蜱的种类及其斑点热群立克次体的感染情况。方法采集牦牛体表的蜱,经形态学初步鉴定后,提取蜱总DNA,PCR扩增蜱16S rRNA基因及斑点热群立克次体ompA、ompB基因,并对扩得阳性产物进行测序和构建进化树分析,从而确定蜱及其携带斑点热群立克次体的种类。结果在石渠县4个乡共采集到蜱818只,其中西藏革蜱占78.97%(646/818)、青海血蜱占21.03%(172/818)。在818只蜱中有408只扩得斑点热群立克次体ompA、ompB基因,总阳性率为49.8%。经比对分析,ompA基因总共得到4条序列(uncultured Rickettsia sp.shiqu1、R.raoultii.shiqu2、R.raoultii.shiqu3和R.raoultii.shiqu4),ompB基因也得到4条序列(uncultured Rickettsia sp.shiqu1、R.raoultii.shiqu2、R.raoultii.shiqu3和R.raoultii.shiqu4)。经遗传进化分析显示ompA基因的uncultured Rickettsia sp.shiqu1与我国青海未定种的Uncultured Rickettsia sp.(MG228270)亲缘关系最近;ompB基因的uncultured Rickettsia sp.shiqu1与韩国未定种的Rickettsia sp.(KC888953)和Candidatus Rickettsia longicornii(MG906675)亲缘关系最近;ompA和ompB基因的R.raoultii.shiqu2-4与对人有致病性的劳氏立克次体(R.raoultii)的亲缘关系最近。结论首次在牦牛体表寄生的西藏革蜱中检出劳氏立克次体。石渠县存在西藏革蜱和青海血蜱,蜱传劳氏立克次体感染率较高并且具有感染人的风险。

羊蜱蝇携带巴尔通体和斑点热群立克次体PCR检测及遗传关系分析

为了解四川省石渠县羊蜱蝇巴尔通体和斑点热群立克次体感染情况,采集藏绵羊体表羊蜱蝇,经形态学鉴定后,提取羊蜱蝇总DNA,PCR扩增巴尔通体 gltA 和 rpoB 基因、斑点热群立克次体 OmpA和OmpB 基因,对阳性产物测序、比对及构建进化树,从而确定羊蜱蝇感染巴尔通体和斑点热群立克次体的种类及感染率。在石渠县的4个乡镇总计采集到407只羊蜱蝇成虫,4个乡镇均检出了 Bartonella melophagi ,总感染率为14.0%(57/407)。在阿日扎镇、呷衣乡和长沙贡马乡检出了 Rickettsia raoultii ,总感染率为11.1%(45/407),且长沙贡马乡感染率显著高于阿日扎镇和呷衣乡( P <0.05);在新荣乡检出了 Rickettsia sp.,感染率为6.6% (8/121)。本次试验中,未发现混合感染。石渠县藏绵羊源羊蜱蝇携带巴尔通体和立克次体,首次在石渠县藏绵羊源羊蜱蝇中检出了 B. melophagi 、 R. raoultii 和 Rickettsia sp.。

我国中东部地区蜱中斑点热群立克次体与新型布尼亚病毒复合感染调查研究

为了验证我国中东部发热伴血小板减少综合征流行地区-信阳和济南的蜱中有斑点热群立克次体存在，且有复合感染新型布尼亚病毒的情况，用布旗法和动物体表检查法在河南省信阳市和山东省济南市捕获蜱，采用PCR和RT-RCR进行病原体感染筛查。信阳市捕获长角血蜱215只，其中游离蜱164只，寄生蜱51只。37只蜱斑点热群立克次体检测阳性，阳性率17．2％；38只蜱新型布尼亚病毒检测阳性，阳性率为17．7％；4只蜱斑点热群立克次体与新型布尼亚病毒复合感染，复合感染率为1．9％。山东省捕捉到166只寄生蜱，均为长角血蜱，4只蜱斑点热群立克次体检测阳性，阳性率为2．4％。6只蜱新型布尼亚病毒检测阳性，阳性率为3．6％；2只蜱为斑点热立克次体与新型布尼亚病毒复合感染，复合感染率为1．2％。结果证实我国中东部地区存在斑点热立克次体与新型布尼亚病毒复合感染。

黑龙江口岸斑点热群立克次体调查研究

为了解黑龙江口岸地区斑点热群立克次体在人群、鼠类、蜱类中的分布特征，针对黑龙江省9个中俄边境口岸，采集出入境人群的血液样本215份、鼠类样本204份、蜱类样本188份，利用半巢式PCR方法对所有样本进行斑点热群立克次体特异性片段扩增，通过基因测序对斑点热群立克次体分型。结果在哈尔滨机场及嘉荫两个口岸的大仓鼠及小家鼠中检测到2例劳氏立克次体Rickettsia raoultii，为首次在黑龙江口岸鼠样本中检测出劳氏立克次体；在188份蜱样本中，检出斑点热群立克次体阳性样本101例，感染率达53．7％，其中劳氏立克次体89例，新塔拉塞维奇立克次体Candidatus Rickettsia tarasevichiae11例，黑龙江立克次体Rickettsia heilottgjiaagii1例，同样首次在黑龙江口岸全沟硬蜱中检测到新塔拉塞维奇立克次体。黑龙江中俄边境口岸开展SFGR的长期监测具有非常重要的公共卫生学意义。

用PCR/RFLP方法检测鼠蜱类中斑点热群立克次体的应用研究

目的:探讨PCR/RFLP方法在鼠蜱类中斑点热群立克次体分类学鉴定的意义。方法:利用福建省宁化县林区人群和野鼠中存在斑点热群立克次体(北亚热型、钮扣热型、小蛛型)感染的基础上,通过对蜱类媒介、宿主动物中的肝脏、脾脏等标本及林区人群血清,从中提取斑点热群立克次体DNA,制备PCR模板,用PCR/RFLP方法进行检测。结果:斑点热群立克次体存在着多种种间交叉较为普遍。结论:用PCR/RFLP方法可对鼠蜱类中斑点热群立克次体进行较准确的分离鉴定。

青海血蜱传斑点热群立克次体带菌率及遗传进化分析

为了明确青海省天峻地区青海血蜱传斑点热群立克次体带菌率及遗传进化特点,根据已发表的斑点热群立克次体外膜蛋白OmpA基因序列设计特异性引物,采用PCR方法对青海省天峻地区青海血蜱进行斑点热群立克次体检测,并对测定序列进行遗传进化分析。结果显示,在316个青海血蜱标本样品池中共检测到31个阳性样品,斑点热群立克次体(SFGR)带菌率为9.8%。遗传进化分析显示,TJ013与立克次体福建分离株FUJ98(AF169629)、黑龙江立克次体HL-93(AF179364)、HL-054(AF179362)及日本立克次体YM(U43795)处于同一分支;SFGR Omp A基因序列同源性分析结果显示,TJ013与立克次体福建分离株FUJ98(AF169629)同源性最高,为95.49%;与黑龙江立克次体绥芬分离株HLJ-054和虎林分离株HL-93的同源性均为91.44%;和日本立克次体YM同源性为90.24%。表明青海省天峻地区青海血蜱传斑点热群立克次体感染较为严重,应尽快制定防制措施,以免危及动物及人类健康。