糖皮质激素ELISA检测方法的建立及群选性抗体的筛选

设计间接竞争ELISA方法,并优化二抗稀释比、竞争时间、PBS溶液的pH值3个条件参数。优化后的地塞米松、倍他米松、双氟米松3种抗体的间接竞争ELISA曲线的IC50分别为2.66、7.36、6.12ng/ml。通过3种抗体的交叉反应来评估其群选特性。结果表明,地塞米松抗体的群选性最强,对双氟米松的交叉反应率高达120%、倍他米松73%、曲安息龙37%、泼尼松龙21%,而对其他3种内源性类糖皮质激素交叉反应率均小于0.1%,然后地塞米松以0.375、0.75、1.5、3.0ng/g分别添加到鸡肉样本中测定回收率,所得回收率在61.3%～80.3%之间,变异系数小于15%。在实际样本检测中,将ELISA方法的测定结果与LC-MS的结果进行比较,两者具有很好的相关性。