羧基末端结合蛋白1对肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的研究羧基末端结合蛋白1(C-terminal binding protein1,CtBP1)对人肝癌细胞HepG2增殖的影响及机制。方法采用CtBP1 siRNA转染HepG2细胞,实验分为4个组:空白对照组、转染试剂对照组、阴性序列对照组与干扰组。于转染后不同的时间收集细胞,用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果 CtBP1 siRNA转染有效抑制了HepG2细胞中CtBP1蛋白表达,与空白对照组比较,转染后72 h后,CtBP1蛋白下调了57.80%。CtBP1沉默后细胞生长受到抑制(P<0.05),转染后24、48、72、96 h生长抑制率分别为22.34%、52.15%、53.97%和54.77%;而对细胞周期分布无明显影响(P>0.05);但CtBP1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 CtBP1沉默能抑制HepG2细胞增殖,其机制是通过促凋亡来实现的。CtBP1能促进肿瘤生长和抑制凋亡,是潜在的肿瘤治疗靶点。

Src羧基末端激酶结合蛋白过表达及棕榈酰化对裸鼠T系白血病Jurkat细胞增殖作用影响的研究

目的:建立Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞裸鼠模型,研究Cbp过表达及棕榈酰化对Jurkat细胞增殖作用的影响。方法:利用neg-EGFP、Cbp-EGFP、Cbp-m-EGFP融合蛋白慢病毒载体转染的Jurkat细胞构建动物模型,24只5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、空病毒对照组、Cbp过表达组和Cbp棕榈酰化位点突变组,每组6只。接种前和接种后0、1、2、3、4、5周裸鼠称重,取外周血计数白细胞总数。利用病毒本身携带的EGFP绿色荧光蛋白在激光共聚焦显微镜下观察Jurkat细胞在外周血中的增殖情况;HE染色观察肝脏的病理变化;流式细胞仪检测Jurkat细胞在小鼠骨髓和外周血中的增殖水平。结果:Cbp过表达组小鼠体重低于空白对照组,高于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组,Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠体重低于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。Cbp过表达组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、低于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组。Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。结论:成功建立了Cbp过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞动物模型,Cbp过表达可抑制Jurkat细胞增殖,Cbp棕榈酰化位点突变可促进Jurkat细胞增殖。

羧基末端结合蛋白CtBP2与泛素结合酶UBE2Ⅰ的相互作用

目的筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白。方法用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达技术和荧光显微镜观察确认CtBP2与其相互作用蛋白的亚细胞共定位情况。结果酵母双杂交筛选获得了41个与Bd-CtBP2相互作用的阳性克隆,编码10个不同的蛋白,其中有4个克隆编码泛素结合酶UBE2Ⅰ的不同片段。从人肝cDNA文库中扩增获得UBE2Ⅰ的全长编码序列,酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验证实CtBP2与UBE2Ⅰ能够特异性结合。亚细胞定位研究表明GFP-CtBP2弥散分布于细胞核,DsRed-UBE2Ⅰ不均匀分布于细胞核,有部分点状聚集。两者共转染时能够呈点状共定位于细胞核。结论人CtBP2能够在细胞核内与UBE2Ⅰ特异性相互作用,是UBE2Ⅰ的靶蛋白。

大鼠坐骨神经夹伤后羧基末端结合蛋白2的表达及意义

目的探讨大鼠坐骨神经夹伤后羧基末端结合蛋白2(CtBP2)的表达及意义。方法制备成年SD大鼠坐骨神经夹伤模型,用western blot和免疫荧光染色检测坐骨神经CtBP2的表达。结果 western blot显示大鼠坐骨神经夹伤后,CtBP2表达逐渐下降,第7天达最低后逐渐上升,第28天达正常水平。免疫荧光染色结果表明,CtBP2在大鼠正常坐骨神经与许旺细胞(Schwann's cell)标志物100(S100)有共定位,和神经纤维200(NF200)几乎无共定位;坐骨神经夹伤后第5天,CtBP2表达量较正常坐骨神经降低。结论大鼠坐骨神经夹伤可引起CtBP2表达变化,可能与损伤后神经的再生及功能修复有关。

过表达Src羧基末端激酶结合蛋白的Jurkat细胞荷瘤小鼠模型的建立与鉴定

目的建立过表达Src羧基末端激酶结合蛋白(CBP)的T系白血病Jurkat细胞动物模型。方法 5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、正常Jurkat细胞对照组、空病毒Jurkat细胞对照组、病毒转染过表达CBP模型组,每组5只。小鼠腋窝皮下注射Jurkat细胞1×107个/0.1 m L。建模成功后取出完整瘤体组织称质量、HE染色观察小鼠皮下肿块的病理变化;流式细胞术检测小鼠外周血Jurkat细胞增殖水平;ELISA检测小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)水平。结果病毒转染过表达CBP模型组小鼠瘤体组织块体积和质量小于对照组,HE染色瘤体内有Jurkat细胞增殖,外周血Jurkat细胞增殖水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组,血清中IL-2水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组。结论成功建立了过表达CBP的Jurkat白血病细胞小鼠荷瘤模型,CBP可抑制Jurkat细胞IL-2分泌和增殖。

羧基末端结合蛋白:一种实体肿瘤的致癌因子

肿瘤的发生、发展涉及多因素、多阶段的相互协调、相互作用,预测肿瘤相关标志物是目前医学研究的热点。羧基末端结合蛋白(CtBP)是一种转录辅抑制因子,在许多实体肿瘤细胞中过表达,可与其相关的转录因子相结合,参与肿瘤细胞“Warburg效应”、上皮-间充质转化、肿瘤干细胞自我更新等多个过程,促进肿瘤的发生、发展。本文就CtBP在肝癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌中的研究进展作一综述。

胆管细胞癌中CtBP1、Zeb1、Zeb2与E-cadherin蛋白的表达及临床意义

目的探讨转录抑制因子Zeb1、Zeb2、转录辅抑制因子CtBP1及其靶基因E-cadherin在胆管细胞癌中的表达及CtBP1、Ecadherin的临床意义。方法采用免疫组化法检测胆管细胞癌及癌旁组织芯片中CtBP1、Zeb1、Zeb2和E-cadherin的表达。结果CtBP1在胆管细胞癌及癌旁组织中的阳性率分别为44.44%和17.86%,Zeb2分别为34.92%和10.71%,E-cadherin分别为50.79%和100%,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。Zeb1在胆管细胞癌仅1例表达,而在癌旁组织中不表达。CtBP1与胆管细胞癌的分化程度相关(P<0.05),E-cadherin与胆管细胞癌的分化程度及远处转移有关(P均<0.05)。E-cadherin和CtBP1及Zeb2表达呈负相关(r=-0.034、-0.029,P均<0.001),CtBP1和Zeb2表达呈正相关(r=0.228,P=0.005)。结论胆管细胞癌中CtBP1、Zeb2与E-cadherin均表达异常,CtBP1、Zeb2可能共同参与E-cadherin表达调控。联合检测CtBP1和E-cadherin有望成为评估胆管细胞癌恶性生物学行为的参考指标。

食管癌组织中CtBP1、p16蛋白的表达变化

目的观察食管癌组织中C端结合蛋白(CtBP)1和p16蛋白的表达变化。方法采用免疫组化法检测57例食管癌组织(观察组)及30例癌旁组织(对照组)中的CtBP1和p16蛋白,并分析其与食管癌临床病理参数的关系。结果观察组51例、对照组29例CtBP1蛋白表达阳性,两组CtBP1蛋白阳性表达率相比P>0.05。观察组30例、对照组24例p16蛋白表达阳性,两组p16蛋白阳性表达率相比P<0.05。食管癌组织中p16表达与临床分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与病理分型无关(P>0.05);CtBP1表达与临床分期、淋巴结转移、病理分型均无关(P均>0.05)。结论食管癌组织中p16蛋白表达下调,CtBP1蛋白表达无明显变化。

鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2和miR-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系研究

目的探讨鼻咽癌癌组织中长链非编码RNA羧基末端结合蛋白1反义RNA2(long non-coding RNA C-terminal binding protein 1 antisense RNA2,LncRNA CTBP1-AS2)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系。方法选取2018年3月~2020年3月于南通市肿瘤医院确诊的222例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,记录患者临床资料,评估放疗疗效及预后,并分为生存组(n=194)和死亡组(n=28);另选取同期219例鼻咽炎患者为对照组。采用Pearson相关分析检验鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2,miR-140-5p表达水平与患者预后的关系;采用COX比例风险回归模型对鼻咽癌患者预后进行多因素分析。结果鼻咽癌组患者组织中LncRNA CTBP1-AS2表达水平(2.25±0.46)高于对照组(1.02±0.22),miR-140-5p表达水平(0.67±0.19)低于对照组(1.01±0.23),差异具有统计学意义(t=35.742,16.934,均P<0.001)。鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平呈负相关(r=-0.624,P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2高表达的鼻咽癌患者放疗后总有效率(74.11%)和三年生存率(77.68%)低于低表达患者(93.64%,97.27%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.578,19.331,均P<0.001);miR-140-5p高表达患者放疗后总有效率(93.58%)和三年生存率(96.33%)显著高于低表达患者(74.34%,78.76%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.119,15.538,均P<0.001)。死亡组磁共振酰胺质子转移(amide proton transfer,APT)值(2.10±0.26)、放疗无效(85.71%)、LncRNA CTBP1-AS2高表达(89.29%)及miR-140-5p低表达(85.71%)患者比例高于生存组(1.82±0.31,6.19%,44.85%,45.88%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=4.551,108.127,19.331,15.538,均P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的危险因素(HR=2.762,95%CI:1.510~5.051,P=0.001),miR-140-5p表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的保护因素(HR=0.817,95%CI:0.718~0.930,P=0.002)。结论鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2高表达,miR-140-5p低表达,二者与放疗疗效及预后关系密切。

E-ca、SOX2、CtBP1在结直肠癌患者中的免疫组化表达及与预后的相关性

目的:观察E-cadherin(E-ca)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、羧基末端结合蛋白1(CtBP1)在结直肠癌(CRC)患者中的免疫组化表达,并分析其与患者预后的相关性。方法:回顾性收集2015年1月—2018年1月医院收治完成手术治疗及随访的85例CRC患者癌肿组织及癌旁组织标本,均获得5年随访,随访截至2023年1月,以生存情况作为预后观察指标,分为预后不良组(病死,25例)、预后良好组(存活,60例);采用免疫组化法测定组织中E-ca、SOX2、CtBP1表达,分析其与CRC患者预后的相关性。结果:CRC组织中SOX2、CtBP1阳性表达率高于癌旁组织,E-ca阳性表达率低于癌旁组织,且预后不良组SOX2、CtBP1阳性表达率高于预后良好组,E-ca阳性表达率低于预后良好组,有统计学差异(P<0.05)。经Cox回归分析,结果显示,CRC组织中E-ca、SOX2、CtBP1表达与预后有关,可能是术后病死的风险因子(HR=2.561、3.159、3.680,P均<0.05)。结论:CRC组织中SOX2、CtBP1阳性表达率高、E-ca阳性表达率低与患者预后不良有关,是患者病死的风险因子。

肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白的表达与临床意义

目的:探究羧基末端结合蛋白1(CtBP1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)在肝癌组织中的表达情况及临床意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测200例肝癌及癌旁组织标本CtBP1和E-钙黏蛋白的表达情况,并分析CtBP1、E-钙黏蛋白表达与肝癌临床病理特征的关系,以及肝癌组织二者表达的相关性。结果:肝癌组织CtBP1的阳性表达率明显高于癌旁组织、E-钙黏蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达与年龄、性别无关(P>0.05),与TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达呈负相关关系(r=-0.102,P<0.05)。结论:肝癌组织CtBP1和E-cadherin均呈异常表达,且二者可能存在调控关系,联合检测CtBP1、E-钙黏蛋白有望成为评估肝癌恶性生物学行为的指标。

乳铁蛋白提取工艺研究及应用

乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,它的分子主体是一个大约有700个氨基酸残基构成的多肽链,该多肽链可以折叠成两个球状叶,一端是氨基末端叶,一端是羧基末端叶,每一叶状结构都含有一个Fe3+和一个碳酸氢阴离子结构部位,每一叶都能高亲和性可逆的与铁结合。其中,Fe3+结构位于一个很深的裂缝中,当铁离子缺乏时,每一片叶片可以曲折,使裂缝打开或关闭,但当多肽链已同铁离子结合时,则裂缝处于闭锁状态。现有的提取纯化方法包括:吸附色谱法、离子交换色谱法。

转录辅抑制因子CtBP1与其靶基因E-cadherin在结肠腺癌中的表达

目的:探讨转录辅抑制因子CtBP1在结肠腺癌中的表达状况及对其靶基因E-cadherin表达的影响.方法:采用免疫组织化学染色方法检测结肠癌及癌旁组织中CtBP1及E-cadherin的表达.结果:CtBP1在结肠癌组织及癌旁组织中表达阳性率分别为96.25%(77/80)和100%(80/80);E-cadherin在结肠癌组织及癌旁组织中表达率分别为32.50%(26/80)和100%(80/80),且与肿瘤浸润深度相关;CtBP1在结肠癌中表达与E-cadherin不相关.结论:CtBP1对其靶基因E-cadherin表达的抑制并不是由CtBP1的异常表达介导的.

肝细胞肝癌中转录辅抑制因子CtBP1与其靶基因E-cadherin的表达

目的探讨转录辅抑制因子CtBP1在肝细胞肝癌中的表达状况及对其靶基因E-cadherin表达的影响。方法采用免疫组化方法检测肝细胞肝癌组织芯片中CtBP1及E-cadherin的表达。结果 CtBP1在肝细胞肝癌组织中表达阳性率为79.69%(204/256),其表达与分化程度相关(P=0.049);E-cadherin在肝细胞肝癌组织表达率为20.31%(52/256),与肿瘤分级相关(P=0.027);CtBP1在肝细胞肝癌组织中表达与E-cadherin呈负相关(P=0.036)。结论在肝细胞肝癌组织中,CtBP1和E-cadherin可以作为肿瘤诊断的分子标记;同时转录辅抑制因子CtBP1对其靶基因E-cadherin的表达有抑制作用。

shRNA沉默CtBP2基因对前列腺癌细胞的增殖作用

目的探讨RNA干扰技术沉默羧基末端结合蛋白(CtBP)2基因表达对前列腺癌PC3细胞增殖能力的影响。方法实验分为空白对照组、转染空质粒组、转染shRNA组。设计并合成针对CtBP2的3条特异性短发卡RNA(shRNA)模板,构建CtBP2-shRNA重组质粒,转染PC3细胞。通过RT-PCR检测CtBP2 mRNA的表达水平;采用Western blot法检测CtBP2蛋白表达的水平,运用MTT法检测沉默CtBP2对PC3细胞体外增殖的抑制作用。结果将CtBP2-shRNA转染前列腺癌PC3细胞后,CtBP2 mRNA以及蛋白的表达水平均明显下降。沉默CtBP2表达后,MTT结果显示转染shRNA组的PC3细胞较空白对照组、转染空质粒组细胞增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CtBP2-shRNA可抑制CtBP2在前列腺癌细胞中的表达并抑制肿瘤细胞生长,提示CtBP2可作为前列腺癌基因治疗的一个新靶点。

Zeb1、CtBP1与E-cadherin在结肠腺癌中的表达及意义

目的:探讨转录抑制因子Zeb1、转录辅抑制因子CtBP1在结肠腺癌中的表达及与其靶基因Ecadherin的关系。方法:采用免疫组织化学染色方法检测结肠腺癌及癌旁组织中E-cadherin、Zeb1和CtBP1表达。结果:CtBP1在结肠腺癌组织及癌旁组织中表达阳性率分别为96.25%和100%,Zeb1分别为28.75%和0%,E-cadherin分别为32.50%和100%。E-cadherin表达和CtBP1表达不相关,而与Zeb1表达成负相关。结论:结肠腺癌中Zeb1与E-cadherin均表达异常;结肠腺癌中Zeb1异常表达可能是E-cadherin表达下调的机制。

CBP基因与肿瘤相关性研究进展

Src羧基末端激酶结合蛋白(CBP)是一种一次性跨膜蛋白,具有乙酰转移酶的活性。它能通过乙酰化组蛋白和非组蛋白的方式参与基因的转录调控和介导多种转录因子的生成,从而与细胞周期调控、细胞凋亡以及肿瘤的发生和发展等病理生理变化间存在一定的联系。该文通过概述CBP与非小细胞肺癌、食管癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌及淋巴瘤间的相关性研究进展,为肿瘤的早期诊断和基因治疗提供新思路。

卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达及临床价值

目的 探讨卵巢癌组织长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)、羧基末端结合蛋白2(CtBP2)表达及临床价值。方法 选取68例卵巢癌患者和20例良性囊肿患者,手术切除并剥离卵巢癌组织、卵巢囊肿组织,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法对lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量进行测定。比较卵巢癌组织与卵巢囊肿组织中lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量,分析卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量与患者临床病理特征的关系。结果 卵巢癌组织中lncRNA NEAT1、Ct BP2相对表达量分别为(0.619±0.115)、(0.330±0.066),均明显高于卵巢囊肿组织的(0.079±0.021)、(0.112±0.014),差异具有统计学意义(P<0.05)。肿瘤FIGO分期1期患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、Ct BP2相对表达量分别为(0.425±0.077)、(0.207±0.057), 2期患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量分别为(0.618±0.071)、(0.336±0.066), 3~4期患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量分别为(0.983±0.076)、(0.546±0.070);有淋巴结转移患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量分别为(0.521±0.098)、(0.219±0.069),无淋巴结转移患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量分别为(0.845±0.064)、(0.586±0.054)。卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量与患者肿瘤FIGO分期、淋巴结转移情况有关,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量与患者年龄、肿瘤直径、病理类型无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达水平均高,两者表达变化可能协同促使肿瘤恶性进展,致使患者预后不良。lncRNA NEAT1、CtBP2有可能成为卵巢癌早期诊断和预后监测的生物标志物。

CtBP与肿瘤相关的研究

羧基末端结合蛋白(C-terminal-binding protein,CtBP)在进化上保守,主要发挥转录辅抑制因子的功能。研究发现,CtBP通过与多个转录因子相互作用,参与多个肿瘤相关基因的转录调控。因此,CtBP对肿瘤的研究提供了新思路,对于揭示肿瘤的发生、发展,肿瘤的治疗、预防具有重要意义。本文主要对近年来CtBP与肿瘤相关的研究作一综述。

卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达变化及其临床意义

目的观察卵巢癌组织长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)、羧基末端结合蛋白2(CtBP2)表达变化,并探讨其表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择卵巢癌患者76例、卵巢良性囊肿患者20例,取手术切除或剥离的卵巢癌组织与卵巢囊肿组织,采用RT-PCR法检测lncRNA NEAT1、CtBP2表达。比较卵巢癌组织与卵巢囊肿组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达,分析卵巢癌组织lncRNA NEAT1表达与CtBP2表达的关系以及二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量均明显高于卵巢囊肿组织(P均<0.01)。Pearson相关分析显示,卵巢癌组织lncRNA NEAT1相对表达量与CtBP2相对表达量呈正相关关系(r=0.689,P<0.01)。卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达均与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与患者年龄、肿瘤直径、病理类型无关(P均>0.05)。以卵巢癌组织lncRNA NEAT1或CtBP2相对表达量的均数为截断值,将患者分为lncRNA NEAT1高表达者34例、低表达者42例,CtBP2高表达者35例、低表达者41例。lncRNA NEAT1或CtBP2高表达者生存率和生存时间均低于lncRNA NEAT1或CtBP2低表达者(P均<0.05)。结论卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2高表达,二者表达变化可能协同促进肿瘤恶性进展并导致患者预后不良。