羧甲基壳聚糖超小超顺磁氧化铁纳米粒在兔磁共振淋巴成像中的意义

目的:考察羧甲基壳聚糖超小超顺磁氧化铁纳米粒(OCMCS-USPIO-NPs)在兔肿瘤淋巴转移诊断中的价值,为该MRI对比剂临床应用奠定基础。方法:以新西兰大白兔为模型动物,分别建立反应性增生淋巴结和VX2肿瘤淋巴转移模型,MRI平扫后,组织间隙注射OCMCS-USPIO-NPs,根据增强前、后MRI图像淋巴结SNR信号的变化,结合HE染色,考察该对比剂在肿瘤淋巴转移和反应性增生淋巴结鉴别诊断的价值。结果:MRI平扫,反应性增生淋巴结和肿瘤转移淋巴结SNR信号无显著差异,OCMCS-USPIO-NPs增强后,反应性增生腘窝淋巴结上在T2WI像信号均匀降低,而肿瘤转移性腘窝淋巴结表现为阴性不均匀强化或无强化,两者SNR差异显著(P<0.05);磁共振淋巴造影结果与HE染色结果相符(P>0.05)。结论:OCMCS-USPIO-NPs作为MRI对比剂,增强扫描可为良、恶性淋巴结的鉴别诊断提供依据。

羧甲基壳聚糖超小超顺磁氧化铁纳米粒在大鼠体内的药动学特点及组织分布

目的考察羧甲基壳聚糖超小超顺磁氧化铁纳米粒(O-carboxymethyl chitosans ultrasmall superparamagnetic iron oxide nanoparticles,OCMCS-USPIO-NPs)在SD大鼠体内的药动学特征及组织分布,为其临床应用提供依据。方法 SD大鼠随机分为生理盐水组、OCMCS-USPIO-NPs组和葡聚糖超顺磁氧化铁纳米粒组(dextran-SPIO-NPs),原子分光光度法测定血浆和心、肝、脾、肺和肾等组织的铁含量,DAS药动学软件对血药浓度-时间数据处理,求得OCMCS-USPIO-NPs组和dextran-SPIO-NPs组在大鼠体内的主要药动学参数;绘制组织内铁含量-时间曲线结合普鲁士蓝染色,比较OCMCS-USPIO-NPs和Dextran-SPIO-NPs在大鼠体内组织分布特点。结果 OCMCS-USPIO-NPs组和dextran-SPIO-NPs组的主要药动学参数(AUC,MRT,t1/2,CL,V2,差异显著(P<0.05),且OCMCS-USPIO-NPs组t1/2>7 h;OCMCS-USPIO-NPs组在肝、脾和肺的组织分布浓度显著低于dextran-SPIO-NPs组。结论 OCMCS-USPIO-NPs能逃避网状内皮系统吞噬,具有长循环作用。

超小的羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒制备及处方优化

目的优化羧甲壳聚糖超小超顺磁氧化铁纳米粒（O-carboxymethyl-chitosan ultra-small superparamagnetic iron oxide nanoparticle,OCMCS-USPIO-NPs）处方并对其理化性质进行表征。方法共沉淀法合成超顺磁氧化铁纳米粒核并用羧甲基壳聚糖对其表面进行共价修饰,用正交实验L9（34）对OCMCS-USPIO-NPs的处方优化和工艺进行优化筛选;用透射电镜、电子相关光谱仪（LSD）、X-Ray衍射法、傅立叶红外、磁性测定仪、MRI扫描仪和邻二氮菲法测定铁含量等对制备的OCMCS-USPIO-NPs进行表征;用普鲁士蓝染色法体外评价OCMCS-USPIO-NPs抗吞噬能力。结果正交实验处方优化处方为：羧甲基壳聚糖的分子量为1~2万,浓度为3%,超声时间为45 min,功率为600 W;傅立叶红外和X-Rays结果证实了OCMCS-SPIO-NPs的合成,羧甲基壳聚糖的修饰显著降低超顺磁氧化铁的流体粒径及超顺磁性,修饰后饱和磁性为73.4 emu.g-1 Fe,磁性较强;同时增加纳米粒表面的Zeta电位,普鲁士蓝染色结果表明巨噬细胞吞噬的纳米粒量依次是：uncoated SPIO-NPs〉dextran-SPIO-NPs〉OCMCS-SPIO-NPs。结论合成的OCMCS-USPIO-NPs的流体粒径〈50 nm,具有强的超顺磁性,分散性好,能逃避巨噬细胞的摄取,可用于MRI照影。

体外评价羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒的细胞毒性和巨噬细胞的摄取

目的体外评价自制羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒(OCMCS-SPIO-NPs)的细胞毒性和逃避巨噬细胞的吞噬能力。方法以菲立磁和未包被的超顺磁氧化铁纳米粒为对照,采用四唑盐(MTT)比色法考察OCMCS-SPIO-NPs对LO2细胞(正常肝细胞株)和A549(人肺腺癌细胞株)的细胞毒性;用菲洛嗪法及普鲁士蓝法考察OCMCS-SPIO-NPs纳米粒并评价其体外的抗吞噬能力。结果 SPIO-NPs经羧甲基壳聚糖共价修饰后,对LO2和A549细胞的细胞毒性明显降低,OCMCS-SPIO-NPs的细胞毒性和dextran-SPIO的细胞毒性无显著性差异(P>0.05),其细胞毒性与培养基中SPIO的浓度呈正相关;与3种SPIO纳米粒孵化24h后,RAW264.7细胞内铁含量随培养基中SPIO的含量增加而增加,细胞内铁含量依次为:未包被SPIO-NPs>dextran-SPIO-NPs>CMCS-SPIO-NPs组(P<0.05)。结论超顺氧化铁纳米粒经羧甲基壳聚糖共价修饰后能显著降低细胞毒性和吞噬细胞摄取,提高了生物相容性,显著降低了巨噬细胞对其的摄取。

新型肿瘤靶向超顺磁氧化铁纳米粒的制备、表征及体外靶向性评价

目的制备具有良好叶酸受体肿瘤靶向且性质稳定超顺磁氧化铁纳米粒并评价其叶酸受体肿瘤靶向性。方法采用"三步法"合成叶酸-羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒(folic acid-O-carboxymethylchitosan-superparamagnetic iron ox-ide nanoparticle,FA-OCMCS-SPIO-NPs):共沉淀法合成超顺磁氧化铁纳米粒后,依次用羧甲基壳聚糖和叶酸对纳米粒表面进行共价修饰。应用透射电镜、激光散射粒度分析仪和电位测定仪、X-Ray衍射法、傅立叶红外、超导电子干涉等对中间产物及终产物进行表征。菲洛嗪法和普鲁士蓝染色评价叶酸-羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒的叶酸受体肿瘤靶向性。结果 X-Ray衍射法表明所有纳米粒粉末的晶型与标准Fe3O4一致,傅立叶红外结果表明叶酸-羧甲基壳聚糖已成功嫁接到超顺磁氧化铁纳米粒,透射电镜结果示纳米粒大多呈圆形或椭圆形,粒径均小于20 nm,激光散射粒度分析仪和电位测定仪叶酸-羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒强均粒径为(41.4±0.132)nm、Zeta电位为(-21.36±1.15)mV,超导电子干涉结果示OCMCS和叶酸共价修饰会使得SPIO-NPs的磁性下降,但依然保持强超顺磁性,菲洛嗪法和普鲁士蓝染色表明叶酸-羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒具有良好的叶酸受体肿瘤靶向性,靶向性的强度与细胞表面受体数量呈正相关。结论本研究成功合成了超顺磁性强,粒径小,叶酸受体靶向性强的超顺磁氧化铁纳米粒,为其开发用于肿瘤的MRI诊断及治疗奠定基础。

肿瘤靶向超顺磁氧化铁纳米粒的小鼠急性毒性与抗吞噬性评价

目的:考察叶酸-羧甲基壳聚糖-超顺磁氧化铁纳米粒(FA-OCMCS-SPIO-NPs)和羧甲基壳聚糖-超顺磁氧化铁纳米粒(OCMCS-SPIO-NPs)2种造影剂的急性毒性及其抗肝、脾吞噬的能力。方法:尾静脉给予小鼠2种造影剂低、中、高剂量(278、347.5、434.5mg(Fe)·kg-1)后观察14d内的一般情况,计算半数致死量(LD50),并进行各组织病理学检查;以葡聚糖-超顺磁氧化铁纳米粒(dextran-SPIO-NPs)为阳性对照,普鲁士蓝染色法观察2种造影剂经小鼠尾静脉注射相似剂量后抗肝、脾吞噬的能力。结果:2种造影剂的LD50>434.5mg(Fe)·kg-1,所有小鼠均未出现明显的毒性反应和组织病理学改变;普鲁士蓝染色切片结果显示,dextran-SPIO-NPs无法逃避肝、脾中巨噬细胞的吞噬,而FA-OCMCS-SPIO-NPs能完全逃避吞噬,OCMCS-SPIO-NPs大部分逃避了吞噬。结论:2种造影剂的安全性高,且能全身分布,具有潜在的肿瘤靶向载体价值。

适配子PBCA-USPIO纳米微粒的制备研究

目的研究适配子PBCA-USPIO纳米微粒体制备工艺。方法以聚氰基丙烯酸正丁酯作为载体,通过乳化聚合法制备PBCA-USPIO,并通过正交试验和单因素实验设计对制备工艺进行优化。用生物素亲和素法将适配子连接到PBCA-USPIO纳米微粒上。MTT法检测细胞毒性。结果优化后的制备工艺所获得的PBCA-USPIO纳米微粒体大小均匀、形态规则、无黏连,平均粒径为260 nm。适配子PBCA-USPIO的细胞毒性低于USPIO。结论该优化方法切实可行,能有效提升PBCA-USPIO纳米微粒体的制备质量。