酒曲中羧甲基纤维素酶活力测定影响因素分析

对还原糖法测定酒曲中羧甲基纤维素酶活力的影响因素进行了探讨,建立了适合酒曲中羧甲基纤维素酶活的测定方法。研究了酒曲中酶的提取方法(缓冲液与酒曲提取比例、酒曲中酶的溶出方式)、酶解反应条件(酶促反应pH、反应温度、酶液与底物添加量)及空白的选择。结果表明,最优条件为酒曲经-20℃冷冻过夜处理,用15倍质量的缓冲液振荡提取30 min,5 000 r/min离心5 min,上清为原始酶液。酶解反应条件为pH值4.8,样品为0.50mL酶液和2.00mL底物,空白为0.50mL酶液和2.00mL缓冲液,同时50℃反应30 min后添加3.0 mL DNS试剂,沸水浴显色10 min,冷却后空白补加2.00 mL底物,样品管补2.00 mL缓冲液,分别用水定容至25 mL,测定波长540nm。

一株来源于土壤的横梗霉菌及其产羧甲基纤维素酶性质

从广州徐闻农垦丰收农场土壤样品中分离到一株产羧甲基纤维素酶菌株,结合菌株形态特征和ITS基因序列同源性分析结果,表明该菌株为Lichtheimia sp.的未定种,其系统分类学关系与横梗霉菌Lichtheimia ramosa isolate K12(MN190291.1)最近,故命名为:横梗霉菌XWNR1(Lichtheimia ramosa XWNR1),该菌种保藏号为CCTCC NO:M2018230。采用刚果红染色法发现该菌粗酶液能够降解羧甲基纤维素钠产生透明圈,初步确定该菌具有产羧甲基纤维素酶的能力。通过优化该菌发酵培养条件,结果表明:该菌株以2.0×10^6接种浓度、1%接种量,28℃180 r/min恒温振荡培养60 h时,菌株分泌的羧甲基纤维素酶具有最好的活力。酶学性质初步研究结果表明,该羧甲基纤维素酶在最适pH 7.0、最适反应温度40℃条件下具有较好的pH稳定性和热稳定性。

纤维素酶的滤纸酶活和CMC酶活的测定

采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)为显色剂、滤纸或CMC为底物,测定纤维素酶的滤纸酶活(FPA)和CMC酶活(CMCA).分析确定了酶活测定用波长为530nm,参比溶液应为失活酶、底物和DNS等共热的反应物,比较了两种底物的酶活测定方法,结果表明:纤维素酶的CMC酶活比滤纸酶活高,酶对水溶性底物有较高的活力。

黑曲霉纤维素酶的纯化及酶学性质研究

黑曲霉 (Aspergillusniger)固态发酵后粗酶液经硫酸铵盐析 ,2次SephadexG - 2 0 0柱层析后可提纯8倍左右。CMC酶最适作用温度为 60℃ ,最适作用pH为 3 5,30℃～ 70℃区间酶活力较稳定 ,在pH3 0～5 0范围内 ,50℃保温 30min能保持 80 %的酶活力。CMC酶的Km、Vmax值分别为 7 69%CMCg/ml、0

康氏木霉固体发酵生产纤维素酶优化研究——培养基用料与工艺条件优化

培养基及培养条件的优化是降低酶制剂成本、提高酶活、实现其工业化生产的重要措施。本研究采用均匀设计U15(58)和双温度培养法(前30h恒温30℃,后续恒温27℃)进行康氏木霉产酶固体发酵生产纤维素酶,对滤纸酶、羧甲基纤维素酶、棉花酶、β-葡萄糖苷酶的活力进行回归分析,而后对各酶活方程求和得到纤维素酶的总活力回归方程并进行约束规划求解。结果表明:应用双温度培养法进行康氏木霉固体发酵生产纤维素酶时,在自然补给氧气,培养基pH自然(约6.5),并保持环境湿度约60%的条件下,72h是适宜的发酵周期;培养基构成以稻草粉50%, (NH4)2SO4 8%,麸皮42%,加水量以4.9倍的固体物质为宜;少量的Tween80有利于纤维素酶活力的提高。

纤维素酶耐高温高产菌株的选育

该文以绿色木霉N0为出发菌株,经紫外线、亚硝基胍诱变处理,采用刚果红透明圈法,在含有制霉菌素浓度为20U的平板上挑取HC值(透明圈直径与菌落直径之比)比N0大的菌株分别在不同温度下进行固态发酵复筛,得到耐高温(38℃)高酶活菌株110。

白腐菌纤维素酶高酶活菌株的筛选

在已确定4株白腐菌最适培养条件、最佳培养基配比的前提下,研究了其发酵后滤纸酶(FPA)、羧甲基纤维素酶(CMC)、微晶纤维素酶(AVI)的活性变化。结果表明:在整个培养周期内3种酶均有活性,但不同菌株酶的活性有较大差异,酶活的高峰也不尽相同。经过比较分析,筛出了纤维素酶活力较高的白腐菌L-1、P-1,并对其发酵前后培养物的成分进行了测定,为研制生物秸秆饲料奠定了基础。

纤维素酶活测定影响因素的研究

研究和分析了3,5-二硝基水杨酸法测定羧甲基纤维素酶糖化力的实验条件,尤其是对测定波长的选择、底物和酶液加量、空白样的选择、酶液稀释倍数对酶活的影响等方面进行了创新性的探究;另外对常规性的影响因素:酶促反应时间、反应pH、底物的浓度等传统因素做了研究。实验表明:在40℃,pH4.6,底物浓度为10g/L,底物和酶液加量各2mL,酶促反应时间5min,空白样选择终止空白,测定波长480nm处测定OD值比较适宜。

超高压处理对蛹虫草汁纤维素酶活性的影响

为了明确超高压加工技术对纤维素酶活性的影响,分别研究了压力、保压时间、温度、乙醇体积分数、加压次数和pH值等对蛹虫草汁中纤维素酶的羧甲基纤维素酶活性（CMC）和滤纸酶活（FPA）的影响。结果表明,纤维素酶的最适压力、保压时间、温度、乙醇体积分数、pH值和加压次数分别为：400MPa、10min、35℃、30%,pH4.0~7.0,加压1次,在最适条件下,CMC酶活比处理前分别提高了82.07%、52.41%、87.22%、54.48%、67.52%和66.67%;FPA酶活比处理前分别提高了97.37%、61.4%、69.4%、61.4%、1.31%和33.91%。因此,利用超高压处理能有效提高蛹虫草汁中的纤维素酶活性。

纤维素酶高产菌的筛选和鉴定

从兰州榆中县兴隆山国家自然保护区采集土样,先用羧甲基纤维素钠刚果红培养基筛选出79株Hc值较大的产纤维素酶菌株,再经液体发酵复筛测CMC酶活和滤纸酶活。结果表明,经复筛后菌株No-15A的纤维素酶活力最高,羧甲基纤维素酶活1376.20U/mL,滤纸酶活497.78U/mL,其粗酶液分解滤纸快速明显,且该菌株生长速度最快,每日菌落直径增长量为4～5cm。经形态学初步鉴定菌株No-15A属青霉。

产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件优化

以羧甲基纤维素钠培养基和液体发酵培养基筛选菌株,经初筛和复筛筛选出目的菌株后,通过观察菌落形态、颜色和孢子形态等方法初步鉴定目的菌株。结果表明,本研究筛选出的2株目的菌株均为黑曲霉。菌株的最佳碳源和氮源分别为1.0%CMC-Na和0.3%酵母膏,最佳培养起始p H值和最适宜温度分别为4和40℃。在此条件下培养7d后菌株1和菌株2的CMCase酶活分别达到0.504 IU/m L和0.277 IU/m L。

黑曲霉突变株ZM-8产纤维素酶条件的研究

经筛选的黑曲霉突变株ZM-8是一株高产纤维素酶菌株,其β-葡萄糖苷酶活性特别高.采用正交试验对其产酶条件进行了优化,结果表明其最适培养基配方为:氮源(NH4)3PO4,含氮量0.6%,含水量300%;玉米秸秆粉与麸皮质量比为4∶1,接种量1∶30.最佳培养条件为:培养温度为35℃,培养时间为72 h,初始pH值为6.5.在优化后的培养条件下测定纤维素FPU酶、C1酶、CMC酶和β-葡萄糖苷酶的活力分别为5.25、0.48、19.60U/mL和42.86 U/mL,约为优化前各酶活的3.0倍、1.8倍、2.5倍和2.1倍.

里氏木霉产纤维素酶条件的优化

研究采用里氏木霉菌株30911、40358和40359,设计了9个影响里氏木霉产纤维素酶活性因素,对里氏木霉的纤维素酶活性进行了液体摇瓶发酵试验。结果表明,培养基中微晶纤维素和小麦麸皮的最适添加量分别为:微晶纤维素20 g·L-1,小麦麸皮80 g.L-1,微晶纤维素与小麦麸皮最适配比为1:4;接种孢子悬液浓度1×107个·mL-1,培养温度28～30℃,pH 5.5,培养时间72 h,摇瓶转速180 r·min-1,250 mL三角瓶中装液量为50～75 mL。

产纤维素酶新菌株的筛选及其产酶特性研究

【目的】筛选分离新的纤维素酶产酶菌株，并对其生长特性和产酶特性进行研究。【方法】从堆肥样品中分离得到一株产纤维素酶菌株，定名为CP1，利用16SrRNA序列对比和Biolog微生物鉴定系统进行鉴定。通过测定菌株生长速率确定其最适生长条件。采用CMC发酵培养基进行纤维素酶的研究，确定其产酶曲线。测定粗酶液最适作用温度和pH值，热稳定性和金属离子对其影响。【结果】经鉴定该菌株为梭形芽孢杆菌（LysinibacillusfusiJbrmis），其最适生长温度为30℃，最适生长pH值为6。在含CMC—Na的培养基培养，该菌株的生长与产酶同步进行，培养48h菌株生长量达到最大，培养液的CMC酶活力同时达到最大值，为0．46U／mL。该菌株所产的纤维素酶既有酸性CMC酶活力，又有碱性CMC酶活力，并以碱性CMC酶为主，酸性CMC酶的活力只有碱性CMC酶的71．4％。其酸性CMC酶的最适作用pH值为6．0，碱性CMC酶的最适作用pH值为8．0。另外，该菌株所产碱性CMC酶活的最适作用温度为40～50℃，而且0．5%的Cu^2＋使其酶活降低45％。【结论】菌株CP1为首次报道的梭形芽孢杆菌产纤维素酶新菌株，具有独特的酸碱性环境下的纤维素酶活力。

低温纤维素酶产生菌的筛选、鉴定、生长特性及酶学性质

从北极楚科奇海分离出一株产纤维素酶的耐冷假交替单胞菌BSw20308.研究表明:该菌最适生长温度10℃,35℃不生长;在pH7.0～8.0、含2.0%～3.0% NaCl的培养基条件下最适宜菌株生长与产酶;可溶性淀粉、酵母浸出液是有利于菌株生长及产酶的碳源、氮源物质;蔗糖、可溶性淀粉、麦芽糖及麸皮对CMCase的合成具有明显诱导作用;CMC、麸皮、可溶性淀粉及麦芽糖对滤纸酶的合成有一定诱导作用,单糖与部分双糖(蔗糖、纤维二糖及乳糖)则起阻遏作用;在指数生长后期至稳定早期,大量产CMCase;发酵液含CMCase、滤纸酶及葡萄糖苷酶活性,以CMCase活力最高;胞外CMCase活力占总CMCase活力的74.1%左右;酶最适作用温度35℃,5℃时酶活保留50%左右;酶对热敏感,35℃半衰期为3 h,25℃下酶活稳定;酶最适pH8.0.

嗜热戴氏霉真菌产纤维素酶的筛选

研究报道了嗜热戴氏霉属菌株的产纤维素酶情况。通过滤纸培养基初筛,发酵液CMC酶活复筛。从供试的大孢戴氏霉Taifang-lania major GZUIFR-H57-2、GZUIFR-H52-1,合川戴氏霉T.hechuanensis GZUIFR-H08-1和戴氏霉Taifanglania sp.GZUIFR-PH430等4个菌株中观察到,除菌株GZUIFR-PH4304无纤维素酶活外,其他3个菌株都显示有不同程度的纤维素酶CMC酶活。其中,合川戴氏霉GZUIFR-H08-1菌株CMC酶活最高,达到了228.61U/mL。

兔源益生菌Tu-115菌株鉴定及其产纤维素酶固体发酵条件优化

对胞外产纤维素酶且能有效抑制大肠杆菌的优良菌株Tu-115菌株进行菌体形态和菌落形态观察、生理生化特性测定及16S rDNA序列系统发育分析以确定其种属。以羧甲基纤维素(CMC)酶和滤纸酶活力大小为指标,通过单因素试验和正交试验来确定发酵培养基的最适发酵条件。Tu-115菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);当以麸皮为碳源,豆饼粉为氮源,碳氮比4:1,麸皮粒度大于20目,料水比1:1,接种量20%,初始pH值4.0,装瓶量4 g/250 ml,在35℃静置培养144 h时,CMC酶和滤纸酶活力分别可达73.35 IU/g和64.06 IU/g。确定了Tu-115菌株的种属,获得了该菌株产纤维素酶的最适固体发酵条件,为该菌株应用于纤维素酶生产奠定了基础。

纤维素酶高产细菌的筛选、鉴定及酶学特性分析

从武夷山森林腐烂枯叶及附近土壤中筛选分离得到1株产纤维素酶活力较高的菌株CS-7。通过形态特征观察和16S rDNA序列分析,将其鉴定为蜡状芽胞杆菌（Bacillus cereus）。对菌株CS-7所产纤维素酶的相关酶学特性进行研究,结果表明,该菌株所产纤维素酶CMC酶活为7.91 U/mL,FPA酶活为2.40 U/mL;酶的最适反应温度和最适反应pH分别为60℃和6;在40-50℃温度范围内热稳定性较好;在pH 5.0-7.0范围内pH稳定性较好。研究结果表明,CS-7菌株是能产生耐高温中性纤维素酶的菌株,具有进一步研究开发利用的潜力。