羧甲基茯苓多糖阻遏亚慢性应激诱发的抑郁样行为

探讨羧甲基茯苓多糖在缓解亚慢性应激诱发的抑郁样行为中的作用。通过连续2周温和不可预知应激,在造模的后7 d,每日分别用0.1、0.2、0.4 g/kg羧甲基茯苓多糖干预模型小鼠。采用16S rRNA高通量测序法分析小鼠肠道菌群组成,ELISA法测定血清中炎性因子水平,分别用LC-MS和GC-MS法测定粪便中神经递质和短链脂肪酸含量,并通过强迫游泳、高架十字迷宫和旷场实验测定小鼠抑郁样行为。结果表明,与模型组相比,低、中剂量的羧甲基茯苓多糖均能不同程度改善抑郁样行为,并改变肠道菌群的组成,降低革兰氏阴性菌的相对丰度(P<0.05);中剂量能够显著降低血清中IL-6 (P<0.01)和IL-2 (P<0.05)的水平;各剂量可通过调节Lactobacillus和Parabacteroides的丰度,显著下调异戊酸、NE、5-HT以及Ach的含量,从而减少IL-6的过量释放。综上,羧甲基茯苓多糖可通过调节肠道菌群组成,抑制肠源性异戊酸、NE、5-HT以及Ach的释放,降低抑郁症相关的炎性因子IL-6和IL-2的水平,从而有效阻遏亚慢性应激诱发的抑郁样行为。

羧甲基茯苓多糖的制备及体内抗肿瘤作用的实验研究

目的 :探讨羧甲基茯苓多糖的制备方法及体内抗肿瘤作用。方法 :选择性氧化茯苓菌发酵液得羧甲基茯苓多糖 ,检测三个剂量的羧甲基茯苓多糖 (2 mg/ ml、4mg/ ml、6mg/ ml)对 H2 2 荷瘤小鼠淋巴细胞转化率和 NK细胞杀伤活性以及血清中 TNF-α含量的影响。结果 :羧甲基茯苓多糖三个剂量组均可提高荷瘤小鼠的淋巴细胞转化率和 NK细胞杀伤活性 ,与生理盐水组相比差异有显著性 (P<0 .0 5) ,中剂量组抗肿瘤的效果显著 ,与其他两组相比差异有显著性 (P<0 .0 5) ;羧甲基茯苓多糖三个剂量组均可提高荷瘤小鼠血清中 TNF-α的含量 ,与生理盐水组相比差异有显著性 (P<0 .0 5) ,但三个剂量组之间比较差异无显著性 (P<0 .0 5)。结论 :羧甲基茯苓多糖可改善荷瘤小鼠的免疫功能 ,具有抗肿瘤作用 ,且功效与作用剂量间有一定的关系 。

羧甲基茯苓多糖对小鼠免疫功能的影响

目的 观察羧甲基茯苓多糖 (CMP)体内外给药对小鼠免疫功能的影响。方法 体外方法为将指数生长小鼠淋巴细胞或巨噬细胞与不同浓度的羧甲基茯苓多糖共培养 ,观察小鼠脾淋巴细胞的增殖作用和巨噬细胞吞噬中性红的能力。体内方法为每日给正常小鼠分别静脉注射不同剂量的羧甲基茯苓多糖 ,连续注射 1 0d ,用与体外同样方法观察CMP对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用及对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果 CMP静脉注射剂量在 5 ,1 0 ,50mg·kg- 1 时对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能均有明显的促进作用 ,体外给药浓度在 0 .1～ 50 μg·mL- 1 时对小鼠脾淋巴细胞增殖有直接的促进作用。对小鼠混合淋巴细胞反应也有明显的促进作用 ,CMP还显著增强ConA及LPS活化的小鼠脾淋巴细胞的增殖反应及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。

羧甲基茯苓多糖的抗氧化活性研究

研究羧甲基茯苓多糖的体内外抗氧化作用。通过测定羧甲基茯苓多糖的总还原能力及对羟基自由基、超氧阴离子和过氧化氢的清除作用,证明羧甲基茯苓多糖的体外抗氧化作用;通过测定小鼠血清和肝脏中的MDA含量和SOD活性的变化,研究了羧甲基茯苓多糖对小鼠体内的抗氧化作用。羧甲基茯苓多糖可以抑制小鼠血清和肝脏中MDA的生成,增强小鼠血清和肝脏中SOD的活性;羧甲基茯苓多糖具有一定的还原能力,可以清除羟基自由基、超氧阴离子和过氧化氢。羧甲基茯苓多糖具有明显的抗氧化作用。

茯苓液体培养法中羧甲基茯苓多糖(CMP)的提取、纯化及鉴定

对茯苓菌株HD06-10进行液体发酵培养,采用醇沉法从其发酵液中提取羧甲基茯苓多糖(CMP).用DEAE-32纤维素和SephadesG-200对CMP进行柱层析分离提纯,得到主要组分PG.通过紫外光谱和红外光谱对组分PG进行纯度鉴定,结果表明:PG为多糖纯品,未检测出核酸、蛋白质等杂质,仅由羧甲基葡萄糖组成.PG是β构型的葡聚糖,糖环为吡喃型,糖苷键的连接方式为β(1→3)及β(1→6),分子量大约为4.2×104Da.

羧甲基茯苓多糖抗疲劳作用研究

研究羧甲基茯苓多糖(CMP)对小鼠抗疲劳作用。将雄性小鼠随机分为5组,分别为空白对照组、阳性对照组、CMP低剂量组(35 mg/(kg bw·d))、CMP中剂量组(70 mg/(kg bw·d))、CMP高剂量组(140 mg/(kg bw·d)),灌胃给药30 d后,测定小鼠负重的游泳时间、血清尿素氮和血乳酸等指标。结果表明,与空白对照组相比,CMP可以延长小鼠负重游泳时间(P<0.05);CMP中、高剂量组可以显著降低血清尿素氮、血乳酸含量并提高肝脏SOD活性(P<0.05)。CMP对小鼠具有很好的抗疲劳作用,其机制可能与降低血清尿氮素、血乳酸含量以及提高肝脏SOD活性有关。

羧甲基茯苓多糖上调HBV转基因小鼠树突状细胞功能

采用1％羧甲基茯苓多糖（CMP）腹腔注射，摘取乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠脾脏，制备淋巴细胞，MTT（噻唑蓝粉剂）法观察CMP对淋巴细胞的毒性作用；经粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-4（IL-4）培养转基因小鼠脾脏来源树突状细胞（DC），ELISA法检测DC分泌IL-12以及刺激混合淋巴细胞反应T淋巴细胞分泌IL-10、IFN-γ的含量．CMP在0～500mg／L浓度对HBV转基因小鼠无毒性作用，并能显著促进HBV转基因小鼠DC分泌IL-12，在混合淋巴细胞反应中，能显著促进T淋巴细胞分泌IFN—γ并抑制IL-10的分泌，从而上调DC功能．

羧甲基茯苓多糖和PHA诱导人外周血淋巴细胞产生GM-CSF的研究

健康人外周血淋巴细胞在羧甲基茯苓多糖与PHA等的刺激诱导下共同培养7d后可获高效价粒-巨噬细胞集落刺激因子。该制剂经特殊处理后可达到临床药用标准。

羧甲基茯苓多糖对小鼠T淋巴细胞分泌细胞因子的影响

目的：探讨羧甲基茯苓多糖（CMP）对小鼠T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10的影响。方法：CMP溶液给小鼠腹腔注射，10天后取外周血分离T细胞，体外将不同浓度的CMP与T细胞共培养，MTT法观察其对T细胞的毒性作用，ELISA法检测IFN-γ、IL-10的含量。结果：CMP在0～500μg／ml对小鼠T细胞无明显毒性作用，CMP能显著提高IFN-γ水平，降低IL-10含量。结论：CMP具有较好的调节Th1／Th2细胞因子分泌作用。

羧甲基茯苓多糖钠体外抗单纯疱疹病毒I型的作用

目的观察羧甲基茯苓多糖钠体外抗单纯疱疹病毒I型(HSV-I)的作用。方法采用细胞病变抑制试验法,观察羧甲基茯苓多糖钠对因感染HSV-I而引起的猪肾传代细胞病变的保护作用。结果在感染10和100TCID50(半数细胞培养感染量)的HSV-I情况下,羧甲基茯苓多糖钠(2.0mg/mL)对HSV-I的致猪肾传代细胞的细胞病变(CPE)具有抑制作用,在感染HSV-I10TCID50的情况下,羧甲基茯苓多糖钠的ID50为0.5mg/mL。结论羧甲基茯苓多糖钠在体外有抗HSV-I作用。

羧甲基茯苓多糖抑制人外周血源性树突状细胞凋亡的体外研究

目的 :探讨羧甲基茯苓多糖(carboxymethytl pachymaram,CMP)对人外周血源性树突状细胞(dendritic cells,DC)凋亡的影响。方法:人外周血单核细胞经rh GM-CSF和IL-4诱导分化为不成熟DC。LPS诱导成熟的基础上分别加入不同浓度的CMP(终浓度为10、50、100 mg/L),以不加CMP为对照组,应用流式细胞术检测细胞凋亡率和趋化因子受体CCR7表达情况,Q-PCR检测CCR7基因表达情况,Western blot检测磷酸化Akt、Akt蛋白表达情况。结果:经CMP处理后DC凋亡率低于对照组,而CCR7的表达高于对照组,磷酸化Akt蛋白表达亦增高,且呈剂量依赖趋势。100 mg/L CMP处理组细胞凋亡率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。50 mg/L和100 mg/L CMP处理组CCR7的表达和磷酸化Akt蛋白均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CMP能抑制成熟DC的凋亡,其机制可能是通过上调CCR7的表达,经PI3K/Akt信号通路发挥作用。

羧甲基茯苓多糖结构的红外光谱表征与原子力显微镜观测

用傅里叶变换红外光谱对羧甲基茯苓多糖(carboxymethylpachymaran,CMP)的结构进行了表征,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)对不同溶液环境下CMP的形态变化进行了观测。结果表明:经过羧甲基修饰,茯苓多糖在水中的溶解性显著增加,890 cm-1处的-βD-葡聚糖特征吸收峰明显减弱,1 333 cm-1处出现次甲基振动吸收峰,1 606 cm-1处出现C O非对称伸缩振动吸收峰,表明羧甲基化成功;原子力显微镜分析表明:在不同溶液条件下,CMP分子以不同形态存在,多糖溶液的浓度、离子强度及溶剂的物化特性均能对CMP的分子链构象及链间相互作用形式产生影响,推测可能与CMP分子内、分子间的氢键缔合及静电作用有关,CMP分子与云母基底间的吸附及静电作用也会对CMP的分子链构象及图像质量产生影响。

茯苓多糖与羧甲基茯苓多糖的结构表征

用高压液相色谱、红外光谱、核磁共振谱，Χ－射线衍射谱、热分析、可见光分光光度法等现代物理方法研究了具有抗肿瘤活性的茯苓多糖与羧甲基茯苓多糖的结构．结果表明，茯苓多糖是不含有β－（１→６）葡聚糖支链的β－（１→３）－Ｄ－葡聚糖，羧甲基茯苓多糖分子中的羧甲基呈ＣＨ２ＣＯＯ状态。

羧甲基茯苓多糖对淋巴细胞产生细胞因子的促诱生作用

目的：观察羧甲基茯苓多糖（ＣＭＰ）对人外周血淋巴细胞（ＨＰＢＬ） 产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ） 、白细胞介素６（ＩＬ６）的促诱生作用。方法：用ＨＰＢＬ 经ＣＭＰ预处理作用后再以ＰＨＡ 或和Ｃｏｎ Ａ刺激，培养后测定上清液中ＴＮＦ和ＩＬ６ 活性。结果：ＣＭＰ促诱生组比仅用ＰＨＡ 或／ 和Ｃｏｎ Ａ 常规刺激组培养上清液中的ＴＮＦ效价高０ ．５１ ．０ 倍，ＩＬ６ 效价高０ ．５０ ．８ 倍，ＣＭＰ＋ ＰＨＡ＋ Ｃｏｎ Ａ组对上述两种细胞因子的促诱生作用更加明显。结论：ＣＭＰ是一种有效的细胞因子促诱生剂。

羧甲基茯苓多糖增强人外周血源性树突状细胞迁移功能的研究

目的探讨羧甲基茯苓多糖(carboxymethytl pachymaran,CMP)对人外周血源性树突状细胞(dendritic cells,DC)迁移功能的影响。方法人外周血单核细胞经rhGM-CSF和IL-4诱导分化为不成熟DC,LPS诱导成熟的基础上分别加入不同质量浓度的CMP(终质量浓度为10、50、100 mg/L),以不加CMP为对照组,采用transwell小室检测DC向MIP-3迁移能力,流式细胞仪及Q-PCR检测CCR7蛋白和基因的表达情况,ELISA测定收集的上清液中IL-10的质量浓度。结果经CMP处理后DC迁移指数和CCR7的表达均升高,而上清液中IL-10的质量浓度降低,且呈剂量依赖趋势。100 mg/L CMP处理组细胞迁移指数显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。50 mg/L和100 mg/L CMP处理组CCR7的表达显著高于对照组,而上清液中IL-10的质量浓度明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CMP能上调人外周血源性树突状细胞CCR7的表达并减少IL-10的分泌,增强其迁移能力。

羧甲基茯苓多糖脂质体的制备及其包封率的测定

目的制备羧甲基茯苓多糖脂质体,并测定羧甲基茯苓多糖脂质体的含量和包封率,初步探讨最佳包封的药量。方法采用薄膜分散法制备羧甲基茯苓多糖脂质体,离心分离法测定羧甲基茯苓多糖脂质体的包封率。结果离心法所得羧甲基茯苓多糖脂质体检测浓度线性范围为1～100 mg/L。羧甲基茯苓多糖脂质体的最佳包封的药量为50 mg/L,包封率为37.99%。结论羧甲基茯苓多糖脂质体的制备需要分别处理,不同浓度的羧甲基茯苓多糖脂质体有不同的包封率,测定过程中需按要求进行,明确最佳包封药量。

高取代度羧甲基茯苓多糖(CMP)的制备及其注射剂的研制

为研究高取代度羧甲基茯苓多糖(CMP)及其注射剂的制备工艺条件,以中药茯苓粉为原料,正交试验优化其羧甲基反应的工艺条件,并对所制备的多糖注射剂进行性能鉴定和药理学试验。结果表明:所获得的羧甲基茯苓多糖取代度高、纯度高,具有羧甲基反应特征,最优反应工艺条件为氯乙酸:氢氧化钠=1.15:1,反应温度75℃,反应时间3 h,此最优组合下羧甲基取代度(DS)值为1.21。所制备的多糖注射剂性状稳定、无毒、无热原性和无刺激性,安全可靠。羧甲基茯苓多糖具有直接抑制或杀死肿瘤细胞、增强巨噬细胞吞噬、调节机体免疫功能的药理作用。高取代度羧甲基茯苓多糖及其注射剂的研制可为丰富茯苓多糖的产品类型、拓宽应用范围及市场投入提供前期的理论基础。

苯酚硫酸法测定兔血浆羧甲基茯苓多糖含量

目的 建立兔血浆羧甲基茯苓多糖浓度测定方法。方法 对兔血浆样品进行预处理，并用苯酚硫酸法测定羧甲基茯苓多糖的含量，测定波长为488．2nm。结果 兔血浆羧甲基茯苓多糖血药浓度线性范围为2～64μg·mL^-1，回归方程为C=76．6676A＋0．8508，r=0．9998，回收率≥96．54％，日内精密度脚≤1．56％，日间精密度RSD≤2·53％。结论 该方法操作简便，测定结果准确可靠，可用于羧甲基茯苓多糖的血药浓度测定。

羧甲基茯苓多糖的研究进展

羧甲基茯苓多糖是从中药茯苓中提取的β-茯苓聚糖经羧甲基化而生成,显示有免疫调节、抗肿瘤等多种生理活性,具有广阔的药物开发及应用前景。现对羧甲基茯苓多糖的提取工艺、含量测定、药理活性等方面的研究进展进行综述。

羧甲基茯苓多糖体外抗艾滋病病毒作用研究

目的观察羧甲基茯苓多糖(CMP)体外抗艾滋病病毒(HIV)作用。方法通过观察CMP对HIV-1ⅢB诱导感染C8166细胞致细胞病变的抑制实验及对HIV-1ⅢB感染MT4细胞的保护实验进行CMP抗HIV-1活性研究。结果同对照组相比,10.000,1.000和0.100 g.L-1CMP对C8166细胞培养上清液HIV-1ⅢB P24抗原的分泌有抑制作用(P<0.05),IC50为1.8 g.L-1,10.000和1.000 g.L-1CMP对感染HIV-1ⅢB的MT4细胞有保护作用(P<0.05),EC50为0.5 g.L-1。结论CMP体外有一定的抗HIV病毒的作用。