羧肽酶E的高表达与肿瘤的生长和转移相关

羧肽酶E（Carboxypeptidase E,CPE）是多种激素肽和神经递质生物合成过程中最主要的羧肽酶.GEO数据分析显示,羧肽酶E作为激素原处理酶,在不同类型的肿瘤中表达.在肺神经内分泌肿瘤、垂体瘤等中,CPE mRNA表达升高.微阵列分析显示,在很多转移性非神经内分泌肿瘤中,CPE mRNA的表达水平也显著升高,例如：结直肠癌,肾癌,尤文氏肉瘤,但CPE mRNA的表达在其相应的正常组织中缺如.研究显示,不仅野生型CPE在肿瘤中表达,其变异体也与肿瘤相关,在一些较大或侵袭性肿瘤中,CPE 变异体mRNA的基因拷贝数非常高.总之,CPE可能在促进肿瘤生长、侵袭及转移中发挥重要作用,能够成为不同类型转移癌诊断及预后判断潜在的生物标志物.

过表达羧肽酶E对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究羧肽酶E(carboxypeptidase E,CPE)对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖、周期及凋亡的影响。方法:PCR法扩增CPE基因片段,将其插入表达载体pcDNA3.1质粒中以构建重组质粒pcDNA3.1-CPE。将质粒转染GMC细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测CPE标签蛋白、增殖标志物细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及凋亡标记物Cleaved-caspase-3的表达;采用平板克隆、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法以及流式分析法检测过表达CPE对高糖培养的GMC细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。结果:成功构建CPE过表达的GMC细胞。平板克隆以及CCK-8实验表明,过表达CPE可以抑制GMC细胞的增殖能力。流式细胞学检测表明,与对照组相比,CPE过表达明显促进了细胞凋亡;细胞周期中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:过表达CPE可以抑制高糖培养的小鼠GMC细胞增殖并诱导细胞凋亡。

羧肽酶E在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨羧肽酶E(CPE)在胃癌组织中表达及其临床意义。方法选择2010年1月至2011年12月在焦作煤业集团责任有限公司中央医院择期行手术治疗的胃癌患者76例,留取胃癌及癌旁正常组织,免疫组织化学检测胃癌及癌旁正常组织中CPE蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测胃癌及癌旁正常组织中CPE mRNA表达,利用Kaplan-Meier法对胃癌组织中CPE表达与患者生存时间的关系进行分析。结果胃癌组织和癌旁正常组织中CPE蛋白阳性表达率分别为80. 3%(61/76)和36. 8%(28/76),胃癌组织中CPE蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织(χ~2=37. 112,P <0. 05)。胃癌组织和癌旁正常组织中CPE mRNA相对表达量分别为2. 07±0. 18和1. 39±0. 14,胃癌组织中CPE mRNA相对表达量显著高于癌旁正常组织(t=25. 981,P <0. 05)。胃癌组织中CPE mRNA相对表达量与TNM分期、淋巴结转移、浆膜浸润、血管侵犯、远处转移有关(P <0. 05)。Kaplan-Meier生存分析显示,低表达组患者平均生存时间为(48. 9±3. 6)个月,总生存率为57. 9%;高表达组患者平均生存时间为(34. 7±2. 7)个月,总生存率为35. 1%;低表达组患者总生存率高于高表达组(χ~2=4. 171,P <0. 05)。结论胃癌组织中CPE呈高表达,其与胃癌发生、发展及不良预后有关,可作为判定患者预后的潜在指标。

羧肽酶E蛋白CPE△N在人宫颈癌中的表达及相关性研究

目的探讨羧肽酶E蛋白CPE△N在人宫颈癌中的表达及相关性,评估其作为肿瘤预后标志物的可能性,为肿瘤的个体化治疗提供相应指南。方法应用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测分析CPE△N在35例宫颈癌患者瘤组织中的表达水平,并对35例宫颈癌患者CPE△N高表达与肿瘤两年内复发和淋巴结转移进行相关性比较。结果 CPE△N在宫颈癌组织中呈高表达,35例患者肿瘤组织中CPE△N mRNA/18sRNA平均比值为2.01±0.65显著高于远瘤区的正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);同时其表达情况与肿瘤复发及淋巴结转移呈正相关性(P<0.05)。结论 CPE△N的高表达是宫颈癌患者一个独立的预后因素,极有可能作为宫颈癌患者预后评价的潜在生物标志物。

胆囊胆固醇结石患者肝脏羧肽酶E表达

目的分析胆囊胆固醇结石患者肝脏羧肽酶E(CPE)的表达,探讨胆囊胆固醇结石形成的可能机制。方法肝胆手术留取肝活检标本30例。其中,胆囊胆固醇结石20例(结石组),胆囊无结石患者10例(对照组)。利用qRT-PCR、蛋白免疫印迹法测定两组肝脏CPE表达,用ELISA法测定血清胆囊收缩素(CCK)表达;并测定血清总胆固醇及血清总三酰甘油含量,分析胆汁成分及胆固醇饱和指数(CSI)。结果结石组胆汁总胆固醇、胆汁总脂含量及CSI均高于对照组(P<0.05),结石组血清CCK、肝脏CPE mRNA表达及CPE蛋白表达均低于对照组(P<0.05)。结石组患者血清CCK含量与肝脏CPE mRNA表达呈正相关(r2=0.710,P<0.05)。结论肝脏CPE表达降低可能导致血清CCK分泌减少,进而诱发结石形成。

羧肽酶E促进淋巴细胞跨血管内皮细胞迁移的研究

目的研究羧肽酶E如何促进淋巴细胞及其亚群跨血管内皮细胞进行迁移。方法利用CRISPR/Cas9技术对MS1细胞上的基因cpe进行敲除;淋巴细胞与血管内皮细胞黏附试验比较淋巴细胞对MS1细胞和敲除细胞Cpe^-/-MS1的黏附能力,RT-PCR及流式方法比较MS1细胞和敲除细胞Cpe^-/-MS1表面黏附分子的表达;Transwell试验比较淋巴细胞及其亚群穿过MS1细胞和敲除细胞Cpe^-/-MS1的能力。结果我们成功获得了敲除细胞系Cpe^-/-MS1;在TNF-α刺激下,淋巴细胞对MS1细胞的黏附能力显著高于敲除细胞Cpe^-/-MS1;在TNF-α刺激下,MS1细胞表面黏附分子的表达量显著高于敲除细胞Cpe^-/-MS1;在TNF-α刺激下,淋巴细胞及其亚群穿过MS1细胞的能力显著高于敲除细胞Cpe^-/-MS1。结论羧肽酶E影响淋巴细胞与血管内皮细胞的黏附及跨血管内皮细胞迁移,本研究对于深入理解淋巴细胞跨血管内皮细胞向外周淋巴结迁移具有重要指导意义。

人宫颈癌中CPE△N的表达及对肿瘤细胞增殖迁移功能的影响

目的:探讨N端截短的羧肽酶E(N-terminal truncated carboxypeptidase E,CPE△N)在人宫颈癌中的表达情况及其对肿瘤细胞增殖迁移功能的影响。方法:采用qRT-PCR方法检测35例宫颈癌患者肿瘤组织中CPE△N的表达水平,同时检测CPEΔN高表达组肿瘤细胞增殖和迁移功能并进行相关分析。结果:宫颈癌患者肿瘤组织CPEΔN mRNA/18sRNA比值平均为2.01±0.65,显著高于对照组,其高表达情况与细胞迁移功能具有显著相关(P<0.05)。结论:宫颈癌组织中CPE△N过表达并促进肿瘤细胞的迁移,由此推断CPE△N极有可能作为宫颈癌患者病情发展和预后评价的生物标志物。

乳腺癌组织中CPE-ΔN的表达与临床意义

目的检测CPE-ΔN在乳腺癌组织中的表达,并分析CPE-ΔN与乳腺癌患者预后的关系。方法应用qRT-PCR和Western blot两种方法分析CPE-ΔN在157例乳腺癌患者中的表达情况。结果 CPE-ΔN在乳腺癌组织中高表达,并且CPE-ΔN mRNA的高表达与肿瘤分化程度,pN分期及肿瘤复发密切相关(P=0.028,0.030,0.005)。此外,CPE-ΔN高表达的患者,生存时间显著较短(P=0.001)。Cox风险比例模型多因素分析结果显示,CPE-ΔN的高表达是乳腺癌患者一个独立的预后因素(P=0.038)。结论 CPE-ΔN可能是乳腺癌一个潜在的预后生物标志物。

CPE-ΔN的高表达预示结直肠癌患者预后不良

目的：羧肽酶E的剪接变异体（ Carboxypeptidase E ，CPE-ΔN）在多种不同类型的肿瘤中表达，本研究的目的是检测CPE-ΔN在人类结直肠癌组织（ CRC）中的表达，并评估其可能作为潜在的预后生物标志物。方法应用qRT-PCR和Western blot两种方法分析了CPE-ΔN在219例结直肠癌患者中的表达情况。结果 CPE-ΔN在结直肠癌组织中高表达，并且CPE-ΔN mRNA的高表达与肿瘤分化程度，pT分期，pN分期，肿瘤复发及淋巴结转移密切相关；Cox风险比例模型多因素分析结果显示，CPE-ΔN的高表达是结直肠癌患者一个独立的预后因素（ P＝0．011）。结论 CPE-ΔN可能是结直肠癌患者一个潜在的预后生物标志物。

筛选高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株

背景与目的 N端截短的羧肽酶E(N-terminal truncated carboxypeptidase E,CPEΔN)是一个新的肿瘤转移相关蛋白。本研究旨在筛选高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株,为完成小鼠活体成像实验创造条件。方法构建CPEΔN的慢病毒表达载体。分别用CPEΔN慢病毒表达载体或对照慢病毒空载体转染H1299细胞,2μg/m L的嘌呤霉素加压筛选。Western blot分析CPEΔN蛋白的表达,荧光素酶报告基因实验分析荧光素酶对底物的分解作用。结果当感染倍数(multiple of infection,MOI)是20时,慢病毒对H1299细胞的转染效率可以达到80%。CPEΔN高表达H1299细胞株(H1299-CPEΔN)和对照慢病毒载体表达H1299细胞株(H1299-control)中CPEΔN蛋白的表达量为4:1。H1299-CPEΔN和H1299-control均能够有效分解荧光素酶底物,可以满足活体成像实验的需求。结论筛选出高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株,为活体成像实验的开展创造了条件,也为进一步解释CPEΔN促进肿瘤转移的分子机制奠定了基础。

TFCP2/YAP转录复合体调控蛋白CPE对肝细胞肝癌的诊断价值

目的探讨转录因子CP2(TFCP2)/Yes相关蛋白(YAP)转录复合体调控蛋白——羧肽酶E(CPE)在肝细胞肝癌(HCC)中的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验测定147例HCC患者、42例乙型肝炎患者、29例胃癌患者及100名健康志愿者(正常对照组)血清CPE水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CPE mRNA水平,免疫印迹法检测CPE、TFCP2及YAP蛋白表达,双荧光报告实验检测CPE启动子基因的活性。CPE与甲胎蛋白(AFP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的相关性采用Spearman等级相关分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CPE和AFP诊断HCC的价值。结果过表达YAP或TFCP2可促进CPE mRNA及蛋白的表达,而YAP和TFCP2共同过表达可明显促进CPE mRNA和蛋白的表达。YAP或TFCP2的敲减可抑制CPE mRNA和蛋白表达,而YAP及TFCP2共同敲减可明显抑制CPE mRNA和蛋白的表达。CPE启动子区域存在TFCP2结合基序,突变该基序后,TFCP2和YAP对CPE启动子的调控作用丧失。HCC组血清CPE水平明显高于乙型肝炎组、胃癌组和正常对照组(P<0.01),而乙型肝炎组、胃癌组和正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。CPE与AFP、ALT、AST均呈正相关(r值分别为0.644、0.454、0.351,P值分别为0.000、0.000、0.001)。ROC曲线分析显示,CPE诊断HCC的曲线下面积(AUC)为0.937,明显高于AFP的AUC(0.679)。结论 CPE在HCC的诊断中具有较高的价值,可作为HCC的血清学诊断标志物。

CPE在胆囊胆固醇结石患者肝脏的表达水平

目的研究羧肽酶E(CPE)在胆囊胆固醇结石患者肝脏的表达水平,探讨两者之间的相关性。方法选取我院2012年6月到2015年6月期间收治肝胆手术患者术中留取肝标本39例,以其中胆囊胆固醇结石患者24例作为观察组,以未患胆囊胆固醇结石患者15例作为对照组。分别测定血清甘油三酯和总胆固醇,胆汁中胆汁酸、磷脂和胆固醇含量和胆固醇饱和指数,并检测肝脏CPE表达水平。结果观察组血清甘油三酯、总胆固醇,胆汁中胆汁酸、磷脂与对照组相比,差异均无统计学意义(t≤1.479,均P>0.05)。观察组胆汁胆固醇含量(11.42±1.24 mmol/L)和胆固醇饱和指数(1.31±0.14)明显高于对照组(8.72±1.05 mmol/L和1.06±0.12),差异均具有统计学意义(t≥13.421,均P<0.05)。观察组肝脏CPE表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(t=-58.341,P<0.05)。相关性分析表明,肝脏CPE表达水平与胆汁中胆固醇含量(r=-0.532)和胆固醇饱和指数(r=-0.614)具有显著负相关(均P<0.05)。结论胆囊胆固醇结石的主要影响因素在于患者胆汁胆固醇含量和饱和度,肝脏CPE表达水平下降与胆囊胆固醇结石的形成有关,其作用机制可能是肝脏CPE表达水平的变化对胆汁胆固醇含量和饱和度的改变。

脑星形胶质细胞瘤CPE的表达及其与病人预后的关系

目的 探讨脑星形胶质细胞瘤羧肽酶E(CPE)的表达及其病人预后的关系。方法 选取2011年3月至2012年3月手术切除并经术后病理证实的脑星形胶质细胞瘤86例,免疫组织化学染色检测组织CPE表达水平,根据染色强度分为高表达和低表达。随访截止2022年3月,记录总生存时间(OS)。结果 86例中,毛细胞型(WHO分级Ⅰ级)20例,弥漫型(WHO分Ⅱ级)22例,间变型(WHO分Ⅲ级)26例。WHO分级Ⅲ级星形细胞瘤CPE高表达率[65.00%(13/20)]明显高于WHO分级Ⅰ级[45.45%(10/22)]、Ⅱ级[34.62%(9/26)]星形细胞瘤(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,CPE低表达是星形胶质细胞瘤患存预后不良的独立影响因素(HR=3.000;95%CI 1.274~4.462;P<0.001)。生存曲线分析显示CPE低表达组中位OS[12个月(9~38个月)]明显低于高表达组[18个月(14~44);P<0.05]。结论 随WHO分级升高,星形胶质细胞瘤CPE表达水平逐渐降低,CPE低表达与脑星形胶质细胞瘤不良生存预后有关。