羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙对成熟脂肪细胞胰岛素敏感性和线粒体功能的影响

目的观察线粒体氧化磷酸化解耦联剂——羰基．氰-对-三氟甲氧基本腙（FCCP）对成熟脂肪细胞胰岛素敏感性及线粒体功能的影响。方法以333-L1前体脂肪细胞为研究对象，诱导分化为成熟脂肪细胞，给予7．5μmol／LFCCP干预分化成熟的333-L1脂肪细胞12h后，采用1H标记的2-脱氧葡萄糖检测成熟脂肪细胞基础状态下及胰岛素刺激下葡萄糖摄取率；采用Westernblot检测葡萄糖转运体4（GLUT4）的表达及转位，同时检测胰岛素信号转导通路中相关信号分子胰岛素受体底物-1（IRS-1）、Akt的总蛋白水平及磷酸化水平；采用透视电镜观察线粒体形态改变；荧光定量PCR技术检测线粒体DNA拷贝数；生物发光法检测细胞ATP水平；应用流式细胞仪观察线粒体膜电位及细胞活性氧簇（ROS）的变化。结果（1）FCCP干预成熟脂肪细胞后降低了胰岛素刺激下的葡萄糖摄取率（t=5．87，P〈0．01），但基础葡萄糖摄取变化率比较差异无统计学意义（t=-0.07，P〉0．05）；（2）FCCP干预抑制成熟脂肪细胞胰岛素刺激下的IRS-1、Akt磷酸化活性，减少GLUT4由胞质向胞膜的转位；（3）FCCP干预成熟脂肪细胞后，线粒体出现嵴断裂、减少、消失，部分线粒体肿胀，甚至呈空泡状等形态学变化；（4）FCCP显著下调成熟脂肪细胞中线粒体DNA拷贝数（t=-1．73，P〈0．001）；（5）FCCP显著下调成熟脂肪细胞中ATP水平和线粒体膜电位（t=6．08、4．83，P〈0．0001、0．01），但增加成熟脂肪细胞中ROS水平（t=-6．82，P〈0．叭）。结论FCCP导致脂肪细胞线粒体形态异常、功能损伤及胰岛素敏感性降低，提示FCCP损害成熟脂肪细胞的胰岛素敏感性可能与FCCP引起的ROS水平增高有关。

miR-137对Parkin诱导的线粒体自噬的影响

目的探讨miR-137对Parkin诱导的线粒体自噬的影响。方法将miR-137 mimics和miR-137 inhibitor分别转染进He La细胞8 h后,再转染p EGEPC1-Parkin,24 h之后加羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(FCCP)处理4 h或者不加FCCP,利用免疫荧光和蛋白免疫印迹技术分析miR-137对线粒体自噬的影响。用实时定量PCR方法检测帕金森病患者与健康对照者血液样本中miRNAs的表达情况。结果在FCCP作用下,Parkin的表达促进细胞自噬分子LC3由LC3Ⅰ型变为LC3Ⅱ型,Parkin蛋白从胞浆转位至线粒体。而细胞先经外源过表达miR-137处理之后,Parkin引起的细胞自噬受到显著抑制(P=0.003)。miR-137在帕金森病患者血液中的表达水平显著高于健康对照组(P<0.001)。结论在FCCP作用下,miR-137抑制Parkin介导的线粒体自噬。miR-137在帕金森病患者血液样本中高表达,提示miR-137可能通过调控Parkin介导的线粒体自噬,参与帕金森病的发生。

高效液相色谱-串联质谱法测定氰氟虫腙和甲氧虫酰肼在水稻和土壤中的残留及消解动态

[目的]建立同时对水稻和土壤中氰氟虫腙和甲氧虫酰肼残留进行测定的高效液相色谱-串联质谱分析方法,研究其在水稻和土壤中的残留及消解动态。[方法]样品中的氰氟虫腙和甲氧虫酰肼经乙腈提取,十八烷基硅烷键合相(C18)净化,高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测。[结果]氰氟虫腙和甲氧虫酰肼在水稻植株中的半衰期分别为2.4~11.4、1.3~10.2d;在土壤中的半衰期分别为3.0~6.8、0.8~10.4d;在水稻植株中的最终残留量分别为0.213~1.072、0.300~4.757mg/L,在稻壳中的最终残留量分别为0.040~0.636、0.174~2.257mg/L,在糙米中的最终残留量均<0.030mg/L,在土壤中的最终残留量均<1.150mg/L。[结论]对结果进行分析,建议我国20%氰氟虫腙·甲氧虫酰肼悬浮剂施药剂量的高剂量按制剂量750g/hm^2 (150g a.i./hm^2),施药次数为1次。

茚虫威二种关键中间体的前驱体的合成研究

在传统合成方法的基础上,分别以5-氯-1-茚酮和4-三氟甲氧基苯胺作为起始物,以绿色化学品碳酸二甲酯(DMC)作为甲氧羰基化试剂兼作溶剂来合成茚虫威二种关键中间体的前驱体。与传统的合成方法相比,该合成方法操作简便、安全,且收率较高,符合绿色合成的要求。

FCCP对FABP3基因表达沉默的P19细胞线粒体功能的影响

目的探讨羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(FCCP)对脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因表达沉默的P19细胞线粒体功能的影响。方法构建FABP3表达沉默载体(A组)及相应的空载体(B组),包装病毒后感染P19细胞,建立稳定转染FABP3沉默的P19细胞株,采用实时定量PCR检测干扰效率。给予FCCP 2.5μmol/L(C组)、5μmol/L(D组)干预FABP3沉默的P19细胞,采用荧光素酶化学发光法检测细胞ATP含量,流式细胞术观察线粒体膜电位的变化。结果 B组FABP3基因表达量较A组下调(0.50±0.08vs.2.23±0.42)(P<0.05)。与A、B组相比,C、D组细胞ATP生成减少(2.47±0.58、1.05±0.13vs.0.09±0.03、0.12±0.02)(P<0.05),而细胞线粒体膜电位升高(358.36±12.23、389.66±12.13vs.437.35±9.27、473.21±19.65)(P<0.05)。结论FABP3基因在维持P19细胞线粒体功能中发挥重要作用。